Darko H. Anđelković – DOKTORSKA DISERTACIJA ... - Prirodno
Darko H. Anđelković – DOKTORSKA DISERTACIJA ... - Prirodno Darko H. Anđelković – DOKTORSKA DISERTACIJA ... - Prirodno
Rezultati i diskusija Za razliku od salicilne kiseline, ftalna kiselina pod datim uslovima jonizacije ne pokazuje dekarboksilaciju (gubitak CO2), niti tendenciju za građenje anjonskih adukta s prisutnim jonskim i neutralnim vrstama matriksa, ali je karakteristično građenje jednostruko deprotonovanog mononaelektrisanog dimera [2M–H] – na m/z 331 (rel. int. 70,98) što predstavlja jedinu anjonsku vrstu koja se može uočiti u ESI MS spektru, osim pika molekulskog jona. Sa druge strane, preliminarno ispitivanje, odnosno opredeljivanje pogodnog ESI moda je ukazalo da i pozitivan mod daje signifikantan spektar, suprotno očekivanjima za jako kiseli molekul ftalne kiseline. Pokazalo se da je nejonizovana ftalna kiselina dovoljno dobar nukleofil koji može da pri uslovima ESI jonizacije nagradi različite katjonske forme. ESI MS spektar u pozitivnom modu (→ Prilog) sadrži signale m/z 149 (protonovani anhidrid ftalne kiseline [M–H2O+H] + ), m/z 167 (protonovana ftalna kiselina [M+H] + ), m/z 189 (adukt ftalne kiseline i natrijuma [M+Na] + ), m/z 269 (adukt ftalne kiseline, kalijuma i metanola [M+2CH3OH+K] + ), m/z 355 (adukt dimera ftalne kiseline sa natrijumom [2M+Na] + ) itd. MS/MS spektar parent-jona [M–H] – m/z 165 na Ecoll = 27% pokazuje da ESI izvor u negativnom modu fragmentiše hidrogenftalat do benzoata (dekarboksilacija) dajući osnovni daughter-jon m/z 121, a daljim gubitkom CO2 nastaje daleko manje zastupljen karbanjon [C6H5] – m/z 77, energetski stabilizovan delokalizacijom π-elektrona. RT: 0,00 - 1,99 152 100 80 60 40 20 RT: 0,31 0 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 Time (min) LOOP Phtalic acid #26 RT: 0,30 AV: 1 NL: 1,01E6 T: - p Full ms [ 50,00-600,00] 165,1 100 80 60 40 20 0 Slika 4.2-12. ESI MS LOOP-hromatogram ftalne kiseline (bez prisustva hroma); c = 8,575 µmol/L, rastvarač CH3OH/H2O = 50/50, negativan jonizicioni mod, flow rate = 100 µL/min. NL: 7,34E6 m/z= 164,0-166,0 MS ICIS LOOP Phtalic acid 179,0 113,1 91,1 127,1 180,1 249,1 270,9 298,7 347,1 399,1 430,7 477,3 509,6 553,5 597,3 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 m/z Kvantifikacija ftalne kiseline je izvršena u negativnom ESI modu injektiranjem tačnih zapremina (20 μL) rastvora odgovarajućih koncentracija, primenom LOOP-a aparata. LOOPhromatogram je pokazao vrlo dobar integritet pika, kako za TIC, tako i za traženi opseg m/z 164 – 166 (slika 4.2-12). U spektru LOOP-hromatograma se uočava izražen pik jona [M–H] – m/z 165, dok su pri uslovima snimanja, potpuno potisnut signal jona [2M–H] – m/z 331. Izračunavanjem površine LOOP-hromatogram pikova za opseg m/z 164 – 166 algoritmom ICIS (EXCALIBURE ® program), dobijene su vrednosti koje su prikazane u tabeli 4.2-5. i na osnovu kojih je linearnim fitovanjem metodom najmanjih kvadrata izračunata kalibraciona prava (slika 4.2-13.).
Rezultati ispitivanja interakcije hroma sa antropogenim ligandima i model huminskim supstancama ESI-MS tehnikom Tabela 4.2-5. Površine ESI MS LOOP-hromatogramskih pikova za opseg m/z 164 – 166, u zavisnosti od koncentracije ftalne kiseline (bez prisustva hroma). Vreme LOOP-hromatogam analize 120 sekundi. Koncentracija ftalne kiseline, µmol/L Površina pika (abs. units), ×10 6 Srednja vrednost Serija A Serija B Serija C (A+B+C)/3 1,225 35,20 32,00 31,06 32,75 3,675 52,23 53,28 56,84 54,12 6,125 80,64 81,71 78,53 80,29 8,575 103,27 109,56 105,29 106,04 12,25 153,52 155,28 161,11 156,64 Povrsina pika (abs. units), ×10 6 160 140 120 100 80 60 40 20 Equation y = a + b*x Adj. R-Square 0,98917 Value Standard Error B Intercept 14,56937 4,35203 B Slope 11,20858 0,58564 P 1 = 981,99 0 0 2 4 6 8 10 12 c (ftalna kiselina), �mol/L Slika 4.2-13. Odnos koncentracije ftalne kiseline i površine pika ESI MS LOOP-hromatograma za m/z 164 – 166 (bez prisustva hroma); rastvarač CH3OH/H2O = 50/50, negativan jonizacioni mod. Integral ispod ekperimentalno dobijenih tačaka ima površinu P1 = 981,99. Dobijena prava y = 14,57 + 11,21x pokazuje, za uslove ESI MS, relativno dobru linearnost u primenjenom opsegu koncentracija ftalne kiseline od oko 1 – 12 μmol/dm 3 , sa koeficijentom determinacije R 2 = 0,9892. Koordinaciona interakcija hroma sa ftalnom kiselinom, odnosno slabljenje signala m/z 165 u LOOP hromatogramu je zatim određivano u okviru ovog linearnog opsega. 153
- Page 104 and 105: Eksperimentalni deo Za rad ESI MS s
- Page 106 and 107: Eksperimentalni deo 104 P2 � P4
- Page 108 and 109: Eksperimentalni deo liganada i njih
- Page 110 and 111: Eksperimentalni deo Kod dobijenih L
- Page 112 and 113: Eksperimentalni deo liganda, u odno
- Page 114 and 115: Eksperimentalni deo 112 Tabela 3.2-
- Page 117 and 118: 4.1 Rezultati UV/VIS analize intera
- Page 119 and 120: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 121 and 122: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 123 and 124: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 125 and 126: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 127 and 128: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 129 and 130: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 131 and 132: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 133 and 134: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 135 and 136: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 137 and 138: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 139 and 140: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 141 and 142: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 143 and 144: Rezultati UV/VIS analize interakcij
- Page 145 and 146: 4.2 Rezultati ispitivanja interakci
- Page 147 and 148: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 149 and 150: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 151 and 152: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 153: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 157 and 158: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 159 and 160: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 161 and 162: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 163 and 164: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 165 and 166: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 167 and 168: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 169 and 170: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 171 and 172: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 173 and 174: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 175 and 176: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 177 and 178: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 179 and 180: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 181 and 182: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 183 and 184: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 185 and 186: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 187 and 188: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 189 and 190: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 191 and 192: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 193 and 194: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 195 and 196: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 197 and 198: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 199 and 200: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 201 and 202: Rezultati ispitivanja interakcije h
- Page 203 and 204: Rezultati ispitivanja interakcije h
Rezultati i diskusija<br />
Za razliku od salicilne kiseline, ftalna kiselina pod datim uslovima jonizacije ne<br />
pokazuje dekarboksilaciju (gubitak CO2), niti tendenciju za građenje anjonskih adukta s<br />
prisutnim jonskim i neutralnim vrstama matriksa, ali je karakteristično građenje jednostruko<br />
deprotonovanog mononaelektrisanog dimera [2M<strong>–</strong>H] <strong>–</strong> na m/z 331 (rel. int. 70,98) što<br />
predstavlja jedinu anjonsku vrstu koja se može uočiti u ESI MS spektru, osim pika<br />
molekulskog jona.<br />
Sa druge strane, preliminarno ispitivanje, odnosno opredeljivanje pogodnog ESI moda<br />
je ukazalo da i pozitivan mod daje signifikantan spektar, suprotno očekivanjima za jako kiseli<br />
molekul ftalne kiseline. Pokazalo se da je nejonizovana ftalna kiselina dovoljno dobar<br />
nukleofil koji može da pri uslovima ESI jonizacije nagradi različite katjonske forme. ESI MS<br />
spektar u pozitivnom modu (→ Prilog) sadrži signale m/z 149 (protonovani anhidrid ftalne<br />
kiseline [M<strong>–</strong>H2O+H] + ), m/z 167 (protonovana ftalna kiselina [M+H] + ), m/z 189 (adukt ftalne<br />
kiseline i natrijuma [M+Na] + ), m/z 269 (adukt ftalne kiseline, kalijuma i metanola<br />
[M+2CH3OH+K] + ), m/z 355 (adukt dimera ftalne kiseline sa natrijumom [2M+Na] + ) itd.<br />
MS/MS spektar parent-jona [M<strong>–</strong>H] <strong>–</strong> m/z 165 na Ecoll = 27% pokazuje da ESI izvor u<br />
negativnom modu fragmentiše hidrogenftalat do benzoata (dekarboksilacija) dajući osnovni<br />
daughter-jon m/z 121, a daljim gubitkom CO2 nastaje daleko manje zastupljen karbanjon<br />
[C6H5] <strong>–</strong> m/z 77, energetski stabilizovan delokalizacijom π-elektrona.<br />
RT: 0,00 - 1,99<br />
152<br />
100<br />
80<br />
60<br />
40<br />
20<br />
RT: 0,31<br />
0<br />
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 1,6 1,8<br />
Time (min)<br />
LOOP Phtalic acid #26 RT: 0,30 AV: 1 NL: 1,01E6<br />
T: - p Full ms [ 50,00-600,00]<br />
165,1<br />
100<br />
80<br />
60<br />
40<br />
20<br />
0<br />
Slika 4.2-12. ESI MS LOOP-hromatogram ftalne kiseline (bez prisustva hroma); c = 8,575<br />
µmol/L, rastvarač CH3OH/H2O = 50/50, negativan jonizicioni mod, flow rate = 100 µL/min.<br />
NL:<br />
7,34E6<br />
m/z=<br />
164,0-166,0<br />
MS ICIS<br />
LOOP Phtalic<br />
acid<br />
179,0<br />
113,1<br />
91,1 127,1 180,1 249,1 270,9 298,7 347,1 399,1<br />
430,7 477,3 509,6 553,5 597,3<br />
100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600<br />
m/z<br />
Kvantifikacija ftalne kiseline je izvršena u negativnom ESI modu injektiranjem tačnih<br />
zapremina (20 μL) rastvora odgovarajućih koncentracija, primenom LOOP-a aparata. LOOPhromatogram<br />
je pokazao vrlo dobar integritet pika, kako za TIC, tako i za traženi opseg m/z<br />
164 <strong>–</strong> 166 (slika 4.2-12). U spektru LOOP-hromatograma se uočava izražen pik jona [M<strong>–</strong>H] <strong>–</strong><br />
m/z 165, dok su pri uslovima snimanja, potpuno potisnut signal jona [2M<strong>–</strong>H] <strong>–</strong> m/z 331.<br />
Izračunavanjem površine LOOP-hromatogram pikova za opseg m/z 164 <strong>–</strong> 166 algoritmom<br />
ICIS (EXCALIBURE ® program), dobijene su vrednosti koje su prikazane u tabeli 4.2-5. i na<br />
osnovu kojih je linearnim fitovanjem metodom najmanjih kvadrata izračunata kalibraciona<br />
prava (slika 4.2-13.).
Change language