M E D I C U S - Shoqata e Mjekëve Shqiptarë të Maqedonisë-Hipokrati
M E D I C U S - Shoqata e Mjekëve Shqiptarë të Maqedonisë-Hipokrati
M E D I C U S - Shoqata e Mjekëve Shqiptarë të Maqedonisë-Hipokrati
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Cel na na{ata studija e da vovede metod za definirawe na ovoj<br />
genetski enitet na AML so {to }e se ovozmo`i optimalna klini~ka<br />
stratifikacija vo terapiskite protokoli na ovie pacienti.<br />
MATERIJAL I METODI<br />
Studijata e postavena kako prospektivna studija i vo nea se vklu~eni<br />
76 posledovatelni pacienti, dijagnosticirani kako akutna leukemija na<br />
Univerzitetskata Klinikata za hematologija. Srednata vozrast na<br />
pacientite e 52,2 godini (opseg 16 do 80 godini). Dijagnozata kaj sekoj<br />
pacient e postavena so pomo{ na standardni morfolo{ki i citohemiski<br />
analizi na aspirati od koskenata srcevina spored kriteriumite na<br />
Francusko-amerikansko-britanskata (FAB) studiska grupa i potvrdena so<br />
imunolo{ki studii so proto~en citometar vo primeroci od periferna<br />
krv/ili koskena srcevina spored preporakite na Evropskata grupa za<br />
imunolo{ka klasifikacija na leukemiite (EGIL) i Britanskiot komitet<br />
za standardi vo hematologijata(BCSH)(8). Morfolo{kite i citohemiskite<br />
analizi na malignite kletki se izveduvaa vo koskeni aspirati oboeni po<br />
metodot May Gruenwald Giemza (MGG) i mieloperoksidaza(POX),<br />
nespecifi~na esteraza(EST) i PAS. Procentot na pozitivni kletki za<br />
sekoe boewe poodelno, se analizira{e vo nad 200 neeritroidni kletki (8).<br />
Imunolo{kite analizi se sostoea vo multiparametarska<br />
imunofenotipizacija so proto~en citometar vo primeroci od polna krv<br />
i/ili koskena srcevina, prethodno tretirani so rastvor za lizirawe na<br />
eritoricitite (BD-Biosciensies, San Jose.CA. USA).<br />
Imunofenotipizacijata se izveduva{e so proto~en citometar<br />
CyAnADP (DAKO-Cytomation) na Institutot za Imunobiologija i humana<br />
genetika, Medicinski fakultet, Skopje. Dobienite rezultati gi<br />
analiziravme so poseben kompjuterski softver (Summit-Cytomation,<br />
koristej}i ja CD 45 gejting strategijata (8).<br />
Sekoj testiran primerok od koskena srcevina sodr`e{e pove}e od<br />
20% blastni kletki (najgolem broj imaa >50% blasti). Primeroci od<br />
pacientite so AML bea evaluirani za prisustvo na fuzionite traskripti<br />
AML1/ETO i CBF /MYH11 so molekularnata analiza ‖Real time‖<br />
kvantitativna - polimeraza veri`na reakcija (RQ-PCR) (9).<br />
Izdvojuvaweto na mononuklearnite kletki, izoliraweto na RNK i<br />
sintezata na komplementarnata DNK (kDNK) se izveduva{e spored<br />
standardnite protokoli za za rabota vo Centarot za bio-molekularni nauki,<br />
pri Farmacevtskiot fakultet, Skopje. RQ-PCR analizata se izveduva{e<br />
vo smesa so vkupen volumen od 25µl od koi 5µl bea kDNK(ekvivalent na<br />
100ng na RNK) (7), 12.5µl TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems,<br />
Foster City, CA, USA), 300nM prajmeri i 200nM TaqMan probi. Paralelno so<br />
fuzioniot genski transkript amplificiravme i kontrolen genski<br />
transkript, so cel korekcija na varijaciite vo kvalitetot i kvantitetot na<br />
RNK. Kako kontrola go koristevme Abelson (ABL) genot, ~ie nivo na
Change language