pobierz Informator (pdf - 6,3 MB) - Shiuz.com
pobierz Informator (pdf - 6,3 MB) - Shiuz.com pobierz Informator (pdf - 6,3 MB) - Shiuz.com
INFORMATOR Nr 50/3/2011 35-38°C), kontrolując przebieg ejakulacji, należy pobrać frakcję 120 ml. Uzyskaną frakcję objętościową ejakulatu inkubować 1 godz. w temperaturze pokojowej w celu obniżenia temperatury nasienia, a zarazem umożliwienia „opłaszczenia” plemników substancjami białkowymi plazmy nasienia. W okresie inkubacji nasienia należy przeprowadzić analizę jego jakości obejmującą mikroskopową ocenę ruchliwości i koncentracji plemników (wymagane zastosowanie komory „Burkera”), stopnia nasilenia zjawiska aglutynacji plemników oraz ich zmian morfologicznych. Kryterium kwalifikacyjnym porcji ejakulatu do kriokonserwacji jest występowanie co najmniej 70% ruchliwych plemników, zaś odsetek plemników morfologicznie zmienionych nie może przekraczać 15% (dyskwalifikować należy próbę nasienia zawierającą ponad 5% plemników z proksymalną lub dystalną kroplą protoplazmy). Spełnienie omawianych kryteriów jakościowych ejakulatu stanowi przesłankę do podjęcia etapu dializy. Jak już wcześniej sygnalizowano wprowadzenie do procedury metody dializy nasienia pozwala na redukcję stężeń niekorzystnych dla plemników substancji peptydowych oraz wolnych jonów nieorganicznych, w tym jonów cynkowych. Proces dializy ogranicza zmiany kriogeniczne/ kriobiochemiczne plemników, co przejawia się ich lepszą ruchliwością po rozmrożeniu, stabilnością plazmolemy i funkcjonalnością mitochondriów. Pozwala ponadto na zastosowanie kryterium kwalifikujące- 34 go knury produkujące ejakulaty o dobrej przydatności do technologii mrożenia nasienia metodą „kortowską”. Sposób prowadzenia dializy umożliwia jej zainicjowanie bezpośrednio w laboratorium przekazującym próbę ejakulatu do kriokonserwacji, a następnie jej kontynuację w czasie transportu (do 5 godz.) do laboratorium kriogenicznego, które przeprowadzi procedurę mrożenia nasienia. Pobraną porcję objętościową ejakulatu (120 ml) po okresie 1 godz. inkubacji w temperaturze pokojowej, umieszcza się w specjalnym worku dializacyjnym (wcześniej przygotowanym) o przepuszczalności dla cząsteczek o m.cz. 12-14 kDa, a następnie odpowiednio zakleszczając końce worka umieszcza się go w zlewce o pojemności 3 000 ml, wypełnioną odpowiednią objętością rozcieńczalnika Kortowo-3. Objętość rozcieńczalnika winna odpowiadać stosunkowi 1 część nasienia (tzn. 120 ml) : 10 części rozcieńczalnika. Dializowana próba nasienia (po ewentualnym transporcie z terenu) poddawana jest kolejnym etapom procedury obejmującej: • zagęszczenie prób nasienia przez ich odpowiednie odwirowanie, • rozrzedzenie osadu plemników rozcieńczalnikiem B (11% roztwór laktozy z dodatkiem 5% preparatu LPFo), • schładzanie prób (ekwilibracja) 3 godz. w temperaturze 5°C. Ważnym elementem tego etapu jest skorygowanie ostatecznej koncentracji plemników w próbie. Wynosić ona powinna 750 mln (750x10 6 ) plemników żywych w 1 ml przy końcowym stężeniu LPFo wynoszącym 5%. Etapami zamykającymi postępowanie laboratoryjne jest glicerolizacja, konfekcjonowanie nasienia w tuby aluminiowe i zamrożenie nasienia. Stężenie glicerolu oraz czas jego kontaktu z plemnikami są zasadniczymi czynnikami regulującymi proces dehydratacji i rehydratacji plemników knura poddawanych technologii zamrażania. W „kortowskiej” metodzie mrożenia jego końcowe stężenie w rozcieńczalniku laktoza- -LPFo wynosi 3%, zaś czas kontaktu skrócony jest do minimum związanego z wypełnieniem nasieniem tub aluminiowych, a następnie ich zamrożeniu. Na omawianym etapie niezbędne jest rygorystyczne przestrzeganie temperatury rozcieńczalnika, która winna wynosić 5°C. Po glicerolizacji nasienia końcowa koncentracja plemników winna wynosić 500 mln (500x10 6 ) w 1 ml. Mrożenie nasienia prowadzone jest w sterowanej komputerowo zamrażarce przy zastosowaniu opracowanego specjalnie dla metody „kortowskiej” programu. Po osiągnięciu w komorze zamrażarki temperatury mrożenia wynoszącej -160°C, tuby z próbami zamrożonego nasienia przenoszone są do kontenerów z ciekłym azotem. Kriokonserwowane nasienie knurów należy przechowywać w kontenerach o pojemności co najmniej 30 -50 litrów i średnicy wlewu 8-10 cm. Unasienianie loch nasieniem knura według metody „kortowskiej” prowadzone jest przez zastosowanie dwóch etapów przebiegu zabiegu insemina-
cyjnego: 1. Przedinseminacyjny wlew do układu płciowego lochy określonej objętości roztworu zawierającego substancję mobilizującą ruchliwość plemników i stymulującą skurcz macicy (tzw. „mobilizer”), którą stanowi 0,15% roztwór kofeiny. 2. Pozaszyjkowa inseminacja loch próbą nasienia rozmrożonego. Prezentowany przebieg zabiegu inseminacyjnego może być dokonany jedynie przy wykorzystaniu specjalnego katetera inseminacyjnego z wewnętrzną wkładką (kaniulą) o długości 72 cm i średnicy 3,5 mm. W pilotowym wdrożeniu inseminacji loch nasieniem kriokonserwowanym wg metody „kortowskiej” zastosowano kateter SOFT@QUICK catheter/cannula (Import Vet. S.A., Hiszpania). Technika zabiegu inseminacyjnego obejmuje następujące etapy: Rozmrożanie dozy nasienia kriokonserwowanego w tubach. Na zdjęciu widzimy moment odcięcia jednego z rogów tuby Fot. Archiwum Autora 1. Rozmrożenie odpowiedniej dozy nasienia kriokonserwowanego w tubach. Czas rozmrożenia tuby (po szybkim odcięciu jednego z jej rogów) w temperaturze 60°C wynosi 60 sek. (1 min.). 2. Preinseminacyjny wlew do układu płciowego lochy roztworu tzw. „mobilizera” przy użyciu katetera inseminacyjnego (bez wkładki). 3. Po skompletowaniu katetera przez wprowadzenie wewnętrznej wkładki dokonać wlewu dozy inseminacyjnej z uwzględnieniem wolnej techniki infuzji dawki nasienia do układu płciowego lochy. Uwzględniając koncentrację plemników w rozmrożonej tubie nasienia ostateczna doza inseminacyjna zawierać powinna 2 mld (2x10 9 ) plemników ruchliwych w końcowej objętości 80-100 ml rozcieńczalnika. Wysoką efektywność biologiczną inseminacji loch nasieniem kriokonserwowanym knura uzyskać można po 2-krotnym unasienianiu loch. Prezentowana, w sposób syntetyczny, technologia mrożenia nasienia knura metodą „kortowską”, uzupełniona wysoko specjalistycznymi analizami laboratoryjnymi, pozwala jednocześnie na selekcję osobników produkujących ejakulaty o dobrej przydatności do mrożenia (ang. good freezers) Romrażanie nasienia w tubie w łaźni wodnej INFORMATOR Nr 50/3/2011 oraz o przydatności ograniczonej (ang. poor freezers). Opracowanie kompleksowej technologii mrożenia nasienia knura metodą „kortowską”, stanowiącej główny problem badawczy projektu rozwojowego Narodowego Centrum Badań i Rozwoju było możliwe dzięki podpisaniu umowy o współpracy naukowo-technicznej ze Stacją Hodowli i Unasieniania Zwierząt Sp. z o.o. z siedzibą w Bydgoszczy oraz niezwykłemu zaangażowaniu pracowników 3 Stacji Unasieniania Loch: w Olecku, Pętkowicach i Sławęcinku. Uwzględniając dwa okresy sezonów roku (wiosna-lato; jesień-zima) zamrożono 117 ejakulatów (redukując ich objętość w czasie pobierania do 120 ml) pobranych od 25 knurów różnych ras. Uzyskano 313 porcji kriokonserwowanego nasienia konfekcjonowanego w 10 ml tubach aluminiowych (POLFA S.A.), które zmagazynowano w dwóch kontenerach stanowiących pierwszą formę 35 Fot. Archiwum Autora
- Page 1 and 2: ISSN 1508-1192 Nr 50/3/2011 Buhaje
- Page 3 and 4: Spis treści 4 Buhaje nowe oraz inn
- Page 5 and 6: 111 (10% indeksu ogólnego), i OMC
- Page 7 and 8: Nowości w naszej ofercie dr inż.
- Page 9 and 10: Buhaje MCB Sp. z o.o. w Krasnem i S
- Page 11 and 12: Oferta OFERTA dodatkowa DODATKOWA S
- Page 13 and 14: Powtarzalność oceny wartości hod
- Page 15 and 16: OHZ Mścice liderem nowoczesnych te
- Page 17 and 18: Fot. Archiwum Redakcji Prezes OHZ M
- Page 19 and 20: Sekwencjonowanie genomu Przełomowy
- Page 21 and 22: jest wyselekcjonowanie konkretnych
- Page 23 and 24: Wykres 1. Pogłowie trzody chlewnej
- Page 25 and 26: (model zwierzęcia) wprowadzono w P
- Page 27 and 28: Kriobank nasienia knura w Polsce -
- Page 29 and 30: serwacji nasienia knura. Plazmolema
- Page 31 and 32: Tabela 1. Rezultaty unasieniań loc
- Page 33: Główne etapy mrożenia nasienia k
- Page 37 and 38: Koniec lata i jesień w pasiece = p
- Page 39: INFORMATOR Nr 50/3/2011 Kursy insem
cyjnego:<br />
1. Przedinseminacyjny wlew<br />
do układu płciowego lochy<br />
określonej objętości roztworu<br />
zawierającego substancję<br />
mobilizującą ruchliwość<br />
plemników i stymulującą<br />
skurcz macicy (tzw. „mobilizer”),<br />
którą stanowi 0,15%<br />
roztwór kofeiny.<br />
2. Pozaszyjkowa inseminacja<br />
loch próbą nasienia rozmrożonego.<br />
Prezentowany przebieg zabiegu<br />
inseminacyjnego może<br />
być dokonany jedynie przy<br />
wykorzystaniu specjalnego katetera<br />
inseminacyjnego z wewnętrzną<br />
wkładką (kaniulą)<br />
o długości 72 cm i średnicy<br />
3,5 mm. W pilotowym wdrożeniu<br />
inseminacji loch nasieniem<br />
kriokonserwowanym wg metody<br />
„kortowskiej” zastosowano<br />
kateter SOFT@QUICK catheter/cannula<br />
(Import Vet. S.A.,<br />
Hiszpania).<br />
Technika zabiegu inseminacyjnego<br />
obejmuje następujące<br />
etapy:<br />
Rozmrożanie dozy nasienia kriokonserwowanego<br />
w tubach. Na zdjęciu widzimy<br />
moment odcięcia jednego z rogów<br />
tuby<br />
Fot. Archiwum Autora<br />
1. Rozmrożenie<br />
odpowiedniej<br />
dozy nasienia<br />
kriokonserwowanego<br />
w tubach.<br />
Czas rozmrożenia<br />
tuby<br />
(po szybkim<br />
odcięciu jednego<br />
z jej rogów)<br />
w temperaturze<br />
60°C wynosi<br />
60 sek. (1<br />
min.).<br />
2. Preinseminacyjny<br />
wlew do<br />
układu płciowego<br />
lochy<br />
roztworu tzw.<br />
„mobilizera”<br />
przy użyciu katetera inseminacyjnego<br />
(bez wkładki).<br />
3. Po skompletowaniu katetera<br />
przez wprowadzenie wewnętrznej<br />
wkładki dokonać<br />
wlewu dozy inseminacyjnej<br />
z uwzględnieniem wolnej<br />
techniki infuzji dawki nasienia<br />
do układu płciowego lochy.<br />
Uwzględniając koncentrację<br />
plemników w rozmrożonej tubie<br />
nasienia ostateczna doza<br />
inseminacyjna zawierać powinna<br />
2 mld (2x10 9 ) plemników<br />
ruchliwych w końcowej objętości<br />
80-100 ml rozcieńczalnika.<br />
Wysoką efektywność biologiczną<br />
inseminacji loch nasieniem<br />
kriokonserwowanym knura<br />
uzyskać można po 2-krotnym<br />
unasienianiu loch.<br />
Prezentowana, w sposób<br />
syntetyczny, technologia mrożenia<br />
nasienia knura metodą<br />
„kortowską”, uzupełniona wysoko<br />
specjalistycznymi analizami<br />
laboratoryjnymi, pozwala<br />
jednocześnie na selekcję osobników<br />
produkujących ejakulaty<br />
o dobrej przydatności do<br />
mrożenia (ang. good freezers)<br />
Romrażanie nasienia w tubie w łaźni wodnej<br />
INFORMATOR Nr 50/3/2011<br />
oraz o przydatności ograniczonej<br />
(ang. poor freezers).<br />
Opracowanie kompleksowej<br />
technologii mrożenia nasienia<br />
knura metodą „kortowską”, stanowiącej<br />
główny problem badawczy<br />
projektu rozwojowego<br />
Narodowego Centrum Badań<br />
i Rozwoju było możliwe dzięki<br />
podpisaniu umowy o współpracy<br />
naukowo-technicznej ze<br />
Stacją Hodowli i Unasieniania<br />
Zwierząt Sp. z o.o. z siedzibą<br />
w Bydgoszczy oraz niezwykłemu<br />
zaangażowaniu pracowników<br />
3 Stacji Unasieniania<br />
Loch: w Olecku, Pętkowicach<br />
i Sławęcinku.<br />
Uwzględniając dwa okresy<br />
sezonów roku (wiosna-lato;<br />
jesień-zima) zamrożono 117<br />
ejakulatów (redukując ich objętość<br />
w czasie pobierania do<br />
120 ml) pobranych od 25 knurów<br />
różnych ras. Uzyskano 313<br />
porcji kriokonserwowanego<br />
nasienia konfekcjonowanego<br />
w 10 ml tubach aluminiowych<br />
(POLFA S.A.), które zmagazynowano<br />
w dwóch kontenerach<br />
stanowiących pierwszą formę<br />
35<br />
Fot. Archiwum Autora
Change language