pobierz Informator (pdf - 6,3 MB) - Shiuz.com
pobierz Informator (pdf - 6,3 MB) - Shiuz.com
pobierz Informator (pdf - 6,3 MB) - Shiuz.com
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Główne etapy mrożenia<br />
nasienia knura metodą<br />
„kortowską”<br />
Pobranie ejakulatu (120 ml)<br />
Inkubacja ejakulatu w temperaturze<br />
pokojowej (1 h)<br />
Dializa próby nasienia wobec<br />
rozcieńczalnika Kortowo 3<br />
(rozcieńczalnik A,<br />
5 h, temperatura pokojowa)<br />
Wirowanie<br />
(10 min, 800xg)<br />
Rozrzedzenie do odpowiedniej<br />
koncentracji plemników<br />
(rozcieńczalnik B)<br />
Schładzanie<br />
(+5°C, 3h)<br />
Glicerolizacja nasienia<br />
(rozcieńczalnik C)<br />
Pakowanie nasienia w tuby<br />
aluminiowe (10 ml)<br />
Zamrażanie do -180°C<br />
Przechowywanie prób w kontenerze<br />
z ciekłym azotem<br />
(-196°C)<br />
Rozmrażanie nasienia<br />
Źródło: opracowanie własne<br />
wodują zjawisko precypitacji<br />
w temperaturze poniżej<br />
10°C.<br />
4. Uwzględniając potrzebę<br />
uproszczenia sposobu konfekcjonowania<br />
określonej<br />
objętości nasienia przed jego<br />
zamrażaniem zastosowano<br />
tuby aluminiowe używane<br />
w przemyśle farmaceutycznym<br />
(POLFA S.A.). Zamrażana<br />
objętość nasienia, z reguły<br />
uzyskana z dwóch tub,<br />
stanowi pojedynczą dawkę<br />
inseminacyjną. Omawiany<br />
sposób konfekcjonowania<br />
w tubie aluminiowej pozwala<br />
na wyraźne i trwałe jej<br />
oznakowanie, z jednoczesną<br />
sprawną identyfikacją nasienia<br />
przeznaczonego do zabiegu<br />
inseminacyjnego.<br />
Metoda „kortowska” została<br />
dostosowana do cech biologicznych<br />
nasienia ras krajowych<br />
knurów. Obok klasycznego laboratorium<br />
oceny nasienia<br />
etap bezpośredniego zamrażania<br />
wymaga zastosowania zamrażarki<br />
sterowanej komputerowo<br />
(Ice Cube 1810 SYLAB,<br />
prod. Austria) zaś w celu magazynowaniakriokonserwowanych<br />
prób nasienia niezbędne<br />
są kontenery z szeroką szyjką.<br />
Główne etapy procedury przedstawiono<br />
na schemacie obok.<br />
Obejmuje ona:<br />
1. Pobranie określonej objętości<br />
ejakulatu (120 ml).<br />
2. Dializę próby nasienia wobec<br />
rozcieńczalnika Kortowo-3<br />
(rozcieńczalnik A).<br />
3. Zagęszczanie prób poprzez<br />
wirowanie, a następnie rozrzedzenie<br />
do odpowiedniej<br />
koncentracji plemników przy<br />
zastosowaniu rozcieńczalnika<br />
zawierającego preparat<br />
LPFo rozpuszczony w 11-procentowym<br />
roztworze laktozy<br />
INFORMATOR Nr 50/3/2011<br />
(rozcieńczalnik B).<br />
4. Schładzanie prób do temperatury<br />
5°C (etap 3 godz.<br />
ekwilibracji).<br />
5. Glicerolizacja nasienia z zastosowaniem<br />
tzw. „rozcieńczalnika<br />
glicerolowego” (rozcieńczalnik<br />
C).<br />
6. Natychmiastowe konfekcjonowanie<br />
nasienia w tuby aluminiowe<br />
(obj. 10 ml) wcześniej<br />
wyprofilowane na<br />
specjalnej matrycy, a następnie<br />
wysterylizowane w temperaturze<br />
160°C przez okres<br />
2 godz.<br />
7. Zamrażanie prób nasienia<br />
w tubach przy użyciu zamrażarki<br />
komputerowo sterowanej<br />
z zastosowaniem specjalnego<br />
programu mrożenia.<br />
8. Magazynowanie tub w kontenerach<br />
z ciekłym azotem.<br />
Szczegółowy opis poszczególnych<br />
etapów procedury<br />
zamrażania nasienia przedstawiono<br />
w instrukcji pt. Technologia<br />
mrożenia nasienia knura<br />
metodą „kortowską” oraz<br />
sposób jego użycia w praktyce<br />
inseminacyjnej, która jest dostępna<br />
po przesłaniu specjalnego<br />
zamówienia na adres e-<br />
-mail: strzezek@uwm.edu.pl.<br />
Praktyczną przydatność<br />
opracowanej technologii mrożenia<br />
nasienia knura, zwłaszcza<br />
w celu utworzenia, a następnie<br />
rozwoju kriobanku, określa<br />
fakt, że dwa pierwsze z prezentowanych<br />
etapów procedury<br />
mogą być realizowane bezpośrednio<br />
przez laboratorium,<br />
przy którym stacjonuje knur<br />
lub knury, których nasienie ma<br />
być kriokonserwowane. W tym<br />
celu, zachowując wszystkie<br />
wymogi sanitarno-higieniczne<br />
do plastikowej buteleczki z podziałką,<br />
umieszczonej w zbiorniczku<br />
z ciepła wodą (temp.<br />
33
Change language