You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
produkciu potravín živočíšneho pôvodu. Zákaz používania<br />
rastových promótorov (hormónov a β-agonistov) je<br />
ustanovený v smernici Rady 96/22/EC o zákaze<br />
používania určitých látok s hormonálnym alebo<br />
tyreostatickým účinkom a beta-agonistov pri chove<br />
dobytka. Smernica bola doplnená a pozmenená smernicou<br />
Európskeho parlamentu a Rady č. 2003/74/ES z 22.<br />
septembra 2003. Smernica Európskeho parlamentu a Rady<br />
2008/97/ES mení a dopĺňa uvedenú smernicu obmedzením<br />
jej pôsobnosti iba na zvieratá určené na výrobu potravín,<br />
zrušením zákazu vo vzťahu k spoločenským zvieratám<br />
a upravením vymedzenia pojmu terapeutické ošetrenie.<br />
Smernicou Rady 96/23/EC je uvedený návod na kontroly<br />
rezíduí veterinárnych liečiv u zvierat a v ich produktoch<br />
s detailne rozpracovaným postupom pre jednotlivé členské<br />
štáty pri tvorbe Národných plánov kontroly.<br />
V analýze rezíduí veterinárnych liečiv je možné pozorovať<br />
dva základné trendy. Prvým je výber vhodnej matrice na<br />
zistenie ilegálneho podávania liečiva, druhým je výber<br />
spoľahlivých a dostatočne citlivých analytických metód.<br />
V minulosti sa na detekciu ilegálneho použitia β–agonistov<br />
v chovoch hospodárskych zvierat sa používali hlavne<br />
konvenčné matrice – moč, pečeň a krvná plazma (Boyd et<br />
al., 1996; Benjamin et al., 1997), neskôr boli publikované<br />
práce s detekciou β–agonistov v srsti a v retine (Popot et<br />
al., 2001; Stachel et al., 2003). Po posledných škandáloch<br />
spojených s mäsom a mäsovými produktmi sa do popredia<br />
dostáva konzumácia alternatívnych potravín (vajcia, ryby,<br />
mlieko, med), čo zvyšuje nároky na kontrolu rezíduí aj<br />
v týchto komoditách. Publikácie venované stanoveniu β–<br />
agonistov v mlieku sú pomerne zriedkavé (Jones et al.,<br />
1999) a uvádzané detekčné limity pre jednotlivé analyty sú<br />
vysoko nad stanovenými hodnotami MRPL.<br />
V rámci EÚ nie je povinné používať na kontrolu rezíduí u<br />
zvierat produkujúcich potraviny, v potravinových<br />
produktoch živočíšneho pôvodu a v krmivách<br />
štandardizované analytické metódy a na ich výber sa<br />
uplatňuje pomerne vysoký stupeň flexibility. Na výber<br />
reziduálnych metód sú však technické kritériá a<br />
požiadavky na ich pracovné charakteristiky ako úroveň<br />
detekcie, selektivita, špecificita, ako aj kritériá pre<br />
konfirmačné metódy sú striktne ustanovené v Rozhodnutí<br />
Komisie 2002/657/EC (Stolker et al., 2007).<br />
Kontrola látok skupiny A, do ktorej patria aj β-agonisti, je<br />
najviac kritická, nakoľko ide o zakázané látky a tým<br />
vzrastá potreba uplatnenia najcitlivejších a zároveň<br />
dostatočne spoľahlivých metód za účelom dosiahnutia čo<br />
najnižších detekčných limitov. Pozitívne výsledky<br />
dosiahnuté skríningovými metódami musia byť potvrdené<br />
vhodnými konfirmačnými metódami.<br />
Niektoré analyty nie je možné stanoviť dostupnými<br />
skríningovými testami (ELISA, RIA, biosenzory) buďto<br />
vôbec alebo sú ich detekčné limity na neakceptovateľne<br />
vysokých koncentračných úrovniach. V týchto prípadoch<br />
je potrebné použiť vhodné inštrumentálne analytické<br />
techniky ako GC/MS/MS alebo LC/MS/MS ako na<br />
konfirmačné, tak aj na skríningové účely (Van Hoof et al.,<br />
2005, Stachel et al., 2003).<br />
V súčasnosti je v oblasti kontroly rezíduí veterinárnych<br />
liečiv trend vývoja skríningových a konfirmačných metód<br />
na princípe LC/MS/MS (Stolker and Brinkman, 2005;<br />
<strong>Potravinárstvo</strong><br />
De Brabander et al., 2007) Jednostupňové LC/MS<br />
analýzy sa používajú na skríningové účely, kým QqQ-MS<br />
techniky (techniky na princípe trojitého kvadrupólu) sú<br />
mimoriadne vhodné na konfirmáciu látok hlavne<br />
v komplexných matriciach.<br />
LC/MS/MS metódy využívajúce ionizačné techniky ako<br />
elektrospray (Debrauwer et al., 1992; Polettini et al.,<br />
1995; Stachel et al., 2003, Thevis et al., 2005) alebo<br />
chemickú ionizáciu za atmosferického tlaku (Doerge et<br />
al., 1993; Doerge et al., 1995; Doerge et al., 1996; Van<br />
Hoof et al., 2005;) boli mnohými autormi publikované<br />
a používajú sa v systéme kontroly rezíduí veterinárnych<br />
liečiv v širokom meradle.<br />
Nakoľko analytické techniky LC/MS/MS sú finančne<br />
veľmi náročné, výrazným trendom je vývoj<br />
multireziduálnych metód (Churchwell et al., 2005; Nielen<br />
et al., 2008). Pri vysokom počte analytov a iónových<br />
prechodov je potrebné rozdeliť monitoring špecifických<br />
prechodov do niekoľkých špecifických okien, daných<br />
retenčným časom. V každom okne sú monitorované<br />
špecifické prechody a ich celkový počet v danom okne nie<br />
je väčší ako 10. Týmto spôsobom je možná selektívna a<br />
citlivá analýza veľkého počtu látok (100-120) jednou<br />
multireziduálnou LC/QqQ-MS metódou.<br />
V rámci štruktúry Smernice Rady 96/23/EC, Rozhodnutia<br />
Komisie 2002/657/EC a ISO/IEC 17025:2005 je dané, že<br />
v úradnej kontrole rezíduí v potravinách a krmivách sa<br />
môžu používať výlučne validované metódy. Validáciou<br />
analytických metód sa má dokázať, že použité analytické<br />
postupy sú v zhode s kritériami príslušných pracovných<br />
charakteristík.<br />
Podľa Prílohy č. 8 Nariadenia vlády SR č. 320/2003 Z. z.<br />
z 9. júla 2003 o monitorovaní určitých látok a ich rezíduí v<br />
živých zvieratách a v produktoch živočíšneho pôvodu sú<br />
na účely výberu a validácie analytických metód na<br />
kontrolu rezíduí definované pojmy a limity pracovných<br />
charakteristík:<br />
Podľa Rozhodnutia Komisie 2002/657/EC sa na<br />
konfirmáciu látok používa systém identifikačných bodov.<br />
Na konfirmáciu jednotlivých sledovaných analytov je<br />
potrebný špecifický počet identifikačných bodov (IPs). Pri<br />
konfirmácii nepovolených, ilegálnych alebo zakázaných<br />
látok (látky skupiny A) je požadovaný počet minimálne<br />
IPs, čo pre hmotnostné spektrometrické detekcie znamená<br />
stanovenie jedného prekurzorového iónu (1 IP) a dvoch<br />
dcérskych iónov (2x1,5 IP). Ako doplňujúce kritérium sa<br />
pri konfirmačných analýzach využíva pomer plôch dvoch<br />
dcérskych iónov (primárneho a sekundárneho). Tento<br />
pomer musí byť v rozpätí ± 20 % v porovnaní<br />
s priemernou hodnotou pomerov vypočítaných<br />
z matricovej kalibrácie.<br />
Ako pomocné kritérium sa využíva relatívny retenčný čas,<br />
pomer retenčného času sledovaného analytu a retenčného<br />
času príslušného vnútorného štandardu. Rozdiel medzi<br />
relatívnym retenčným časom analytu vo fortifikovanej<br />
matrici a v analyzovanej vzorke môže kolísať do ± 2,5 %.<br />
METODIKA PRÁCE<br />
LC/MS/MS metódu sme využili v úradnej kontrole<br />
prítomnosti rezíduí 10 β-agonistov (cimaterol, cimbuterol,<br />
zilpaterol, terbutalín, salbutamol, ractopamín, clenbuterol,<br />
ročník 4 91 1/2010
Change language