OPTICKÉ BIOSENZORY.pdf - FBMI

5. TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence =
fluorescence daná úplným vnitřním odrazem)
Metoda byla teoreticky objevena zhruba v polovině 70.tých let minulého
století.
Jako v ostatních druzích senzoru je jeden z reaktantů imobilizován na
povrchu vlnovodu, do kterého je laserem zavedeno světlo.
V případě TIRF může být interakční oblast větší - nejsme omezeni jen na
oblast vazebního členu. Druhý reaktant ovšem musí být v tomto případě
označkován nějakou fluorescenční látkou.
Pokud se tyto molekuly naváží na imobilizované látky na povrchu
vlnovodu, dostanou se do dosahu evanescentního pole a toto pole budí
fluorescenci daného labelu (značkovače).Ta je poté detekována CCD
kamerou, nebo konfokálním mikroskopem.
Výhodou tohoto uspořádání je, že nejsme omezení při detekci na úzkou
část senzoru.
Nevýhodou je nutnost použití fluorescenčních značkovačů, které zužují
možnost praktického použití.