CamSep 1
Rodniki hydroksylowe są wyjątkowo reaktywne. Dlatego też są stosunkowo często oznaczane i pośrednio świadczą o całkowitym stresie oksydacyjnym. Ponieważ są one wyjątkowo nietrwałe, do ich oznaczania stosuje się metodę pułapki spinowej. Polega ona na wprowadzeniu do materiału biologicznego względnie nietoksycznych związków aromatycznych i oznaczaniu produktów ich reakcji (substytucja wolnorodnikowa lub nukleofilowa) z rodnikiem hydroksylowym. Jako pułapkę spinową wykorzystuje się naturalnie występującą fenyloalaninę, kwas tereftalowy lub egzogenne pochodne aspiryny. W przypadku fenyloalaniny (D-izomer) jej produktami reakcji z rodnikami hydroksylowymi są tyrozyny [24]. Produkty ich reakcji z rodnikiem hydroksylowym oznaczane są chromatograficznie. Aspiryna (kwas o-acetylosalicylowy) jest lekiem powszechnie stosowanym m.in. przy leczeniu stanów zapalnych i złogów naczyń krwionośnych. W organizmach jest ona bardzo szybko hydrolizowana do kwasu salicylowego (rys. 9). Kwas ten w warunkach fizjologicznego pH = 7,4 reaguje z rodnikami hydroksylowymi dając trzy produkty reakcji: kwasy 2,3- (49%) i 2,5-dihydroksybenzoesowe (40%) (DHBA) oraz o-katechol (11%). Pułapkowanie rodników hydroksylowych kwasem salicylowym zostało wielokrotnie opisane w literaturze [24]. Kwas ten (ok. 5 mM) wprowadzany jest dootrzewnowo lub stereotaktycznie dokomorowo do komory mózgowej. Stężenie 2,5-DHBA może być powiązane ze stężeniem cytochromu P-450. Zmiany stężenia 2,3-DHBA są zaś bezpośrednio powiązane ze zmianami stężenia rodników hydroksylowych. Kwasy te oznaczane są zwykle chromatograficznie w układzie faz odwróconych [25], jak przedstawiono to na rys. 6. Rys. 6. HPLC chromatogram 1 mM standardów kwasów (1) - 2,5-, (2) - 2,3-dihydroksybenzoesowych oraz (3) - kwasu salicylowego. Warunki chromatograficzne: kolumna - 250x4 mm śr. wew. Zorbax ODS 5 μm (Knauer); faza ruchoma - bufor octanowocytrynianowy pH = 4,3, 1 mM KCl, 0,25 mM EDTA, 5% MeOH, 3 mM TBAP; temp. - 20ºC; szybkość przepływu - 0,9 ml/min; detektor - UV-205 nm 56
Pułapka salicylanowa posiada szereg wad [26]: a) problematyczne jest oznaczanie kwasu 2,5-dihydroksybenzoesowego gdyż może on występować endogennie, np. wskutek działania cytochromu P-450, b) czułość układu jest zmniejszona na skutek tworzenia się dwóch produktów reakcji, c) pochodne aspiryny mogą występować w pożywieniu, a jej nieuzasadnione podawanie wpływa na stany zapalne. Aby uniknąć tych trudności SteMarie i wsp. zaproponowali zastąpienie salicylanów kwasem p-hydroksybenzoesowym [26]. Chociaż kwasy te oznaczać można fotometrycznie to zwykle stosuje się znacznie bardziej czułą (1 pg dla DHBA, 100 pg dla kwasu salicylowego) detekcję elektrochemiczną (elektroda pracująca: węgiel szklisty; 0,8 V vs Ag/AgCl) [25]. Rys. 7. Chromatogram jonowo-wykluczający kwasów 3,4-dihydroksybenzoesowego oraz kwasu p-hydroksybenzoesowego. Warunki chromatograficzne: kolumna - 300x7,8 mm śr. wew. TSK-GEL SCX(H + ) (TosoHaas); faza ruchoma - 1 mM H 2 SO 4 , 1 mM KCl, 0,25 mM EDTA, 13% ACN; detektor elektrochemiczny Rys. 8. Hydrodynamiczne woltamogramy 1 mM kwasów 3,4-dihydroksybenzoesowego i p-hydrosybenzoesowego. Warunki chromatograficzne jak na rysunku powyżej 57
- Page 5 and 6: PRZEDMOWA Postępy Chromatografii t
- Page 7 and 8: Piotr M. SŁOMKIEWICZ 1 , Zygfryd W
- Page 9 and 10: W komorze 2 znajduje się pojemnik
- Page 11 and 12: czyna przypływać przez komorę 2
- Page 13 and 14: 4 C napięcie [mV] 3 Rys. 6. Chroma
- Page 15 and 16: Bronisław K. GŁÓD 1 , Paweł PIS
- Page 17 and 18: Rys. 1. Metabolizm dopaminy L-dopa
- Page 19 and 20: Dopamina, której niedobór w czę
- Page 21 and 22: katecholowej oraz kompleksowaniu ż
- Page 23 and 24: typu skonstruowano w Instytucie Ele
- Page 25 and 26: takich jak zmęczenie czy stres. Dr
- Page 27 and 28: CPA SUROWICY KRWI PACJENTÓW Z CHOR
- Page 29 and 30: mo wyższych stężeń w surowicy e
- Page 31 and 32: LITERATURA 1. C. Courderot-masuyer,
- Page 33 and 34: Monika ASZTEMBORSKA Instytut Chemii
- Page 35 and 36: (CD), dyspersja zdolności skręcaj
- Page 37 and 38: METODY SEPARACYJNE Z ZATRZYMANYM PR
- Page 39 and 40: • pomiary mogą być prowadzone w
- Page 41 and 42: Bronisław K. GŁÓD 1 , Paweł PIS
- Page 43 and 44: Rys. 1. Schemat transportu elektron
- Page 45 and 46: •− 3+ 2+ (2) Fe + O2 = Fe + O2
- Page 47 and 48: eperujących DNA (polimerazy) aktyw
- Page 49 and 50: 2.1.1. Dysmutaza ponadtlenkowa (SOD
- Page 51 and 52: z jednej strony ich zużywaniem si
- Page 53 and 54: Jednym z najpowszechniejszych oznac
- Page 55: czułość, test kwasu tiobarbituro
- Page 59 and 60: ków aromatycznych i oznaczaniu pro
- Page 61 and 62: antocyjany. Do tych ostatnich nale
- Page 63 and 64: 7. B.K. Głód, J.C. Kowalski, J. L
- Page 65 and 66: 65. M. Tanaka, A. Sotomatsu, H. Kan
- Page 67 and 68: Józef RZEPA Instytut Chemii, Zakł
- Page 69 and 70: Ketoprofen O O OH CH 3 Naproksen CH
- Page 71 and 72: w strumieniu azotu. Anality eluowan
- Page 73 and 74: 73
- Page 75 and 76: Ciekawą rolę pełnią zbiorniki w
- Page 77 and 78: Stosowana w badaniach procedura ana
- Page 79 and 80: Marian KAMIŃSKI Politechnika Gdań
- Page 81 and 82: W chromatografii analitycznej celem
- Page 83 and 84: Rys. 1. Zestawienie typowych chroma
- Page 85 and 86: dzielania, przechodząc do stosowan
- Page 87 and 88: lowarstwowej, gdy charakter izoterm
- Page 89 and 90: wiednie między-frakcje. Trzeba dod
- Page 91 and 92: nie substancji w eluacie, można uz
- Page 93 and 94: danych składników. Zwiększenie d
- Page 95 and 96: dozowanej próbki albo zmniejszenie
- Page 97 and 98: - W przypadku rozdzielania substanc
- Page 99 and 100: Na rys. 9 i 10 pokazano przykłady
- Page 101 and 102: Rys. 11. Schematy ideowe różnych
- Page 103 and 104: nakże, w kolumnach preparatywnych
- Page 105 and 106: Można stwierdzić, że w praktyce,
Rodniki hydroksylowe są wyjątkowo reaktywne. Dlatego też są stosunkowo<br />
często oznaczane i pośrednio świadczą o całkowitym stresie oksydacyjnym.<br />
Ponieważ są one wyjątkowo nietrwałe, do ich oznaczania stosuje<br />
się metodę pułapki spinowej. Polega ona na wprowadzeniu do materiału biologicznego<br />
względnie nietoksycznych związków aromatycznych i oznaczaniu<br />
produktów ich reakcji (substytucja wolnorodnikowa lub nukleofilowa) z rodnikiem<br />
hydroksylowym. Jako pułapkę spinową wykorzystuje się naturalnie występującą<br />
fenyloalaninę, kwas tereftalowy lub egzogenne pochodne aspiryny.<br />
W przypadku fenyloalaniny (D-izomer) jej produktami reakcji z rodnikami<br />
hydroksylowymi są tyrozyny [24]. Produkty ich reakcji z rodnikiem hydroksylowym<br />
oznaczane są chromatograficznie.<br />
Aspiryna (kwas o-acetylosalicylowy) jest lekiem powszechnie stosowanym<br />
m.in. przy leczeniu stanów zapalnych i złogów naczyń krwionośnych.<br />
W organizmach jest ona bardzo szybko hydrolizowana do kwasu salicylowego<br />
(rys. 9). Kwas ten w warunkach fizjologicznego pH = 7,4 reaguje<br />
z rodnikami hydroksylowymi dając trzy produkty reakcji: kwasy 2,3- (49%)<br />
i 2,5-dihydroksybenzoesowe (40%) (DHBA) oraz o-katechol (11%). Pułapkowanie<br />
rodników hydroksylowych kwasem salicylowym zostało wielokrotnie<br />
opisane w literaturze [24]. Kwas ten (ok. 5 mM) wprowadzany jest dootrzewnowo<br />
lub stereotaktycznie dokomorowo do komory mózgowej. Stężenie<br />
2,5-DHBA może być powiązane ze stężeniem cytochromu P-450. Zmiany<br />
stężenia 2,3-DHBA są zaś bezpośrednio powiązane ze zmianami stężenia<br />
rodników hydroksylowych. Kwasy te oznaczane są zwykle chromatograficznie<br />
w układzie faz odwróconych [25], jak przedstawiono to na rys. 6.<br />
Rys. 6. HPLC chromatogram 1 mM standardów kwasów (1) - 2,5-,<br />
(2) - 2,3-dihydroksybenzoesowych oraz (3) - kwasu salicylowego. Warunki chromatograficzne:<br />
kolumna - 250x4 mm śr. wew. Zorbax ODS 5 μm (Knauer); faza ruchoma - bufor octanowocytrynianowy<br />
pH = 4,3, 1 mM KCl, 0,25 mM EDTA, 5% MeOH, 3 mM TBAP; temp. - 20ºC;<br />
szybkość przepływu - 0,9 ml/min; detektor - UV-205 nm<br />
56
Change language