CamSep 1

Rys. 18. Przykłady reprezentowanych rezultatów uzyskanych podczas doboru optymalnych warunków
wypełnienia kolumn preparatywnych o średnicy 32-52 mm, wykonanych z zastosowaniem
mieszaniny dwóch różnobarwnych frakcji żelu krzemionkowego o zakresie wielkości ziaren
22 do 45 μm (frakcja bezbarwna: 22 do 35 μm i frakcja zabarwiona: 30 do 45 μm)
z uwzględnieniem kształtów stref barwnika Sudan I „zatrzymanego” w przekroju poprzecznym
wypełnienia kolumny oraz odpowiadające tym kolumnom kształty pików chromatograficznych
na chromatogramach testowych.
Warunki wypełniania kolumn: A, B, C – wypełnianie na sucho metodą udarową z równomiernym
doprowadzeniem sorbentu do kolumny podczas wypełniania w warunkach, odpowiednio:
A – optymalnych (prędkość narostu złoża podczas wypełniania (u ι - ok. 1 cm/min) – cyfrą „1”
oznaczono wygląd przekroju wypełnienia obserwowany również niekiedy w optymalnie wypełnionej
kolumnie),
B – przy zbyt szybkim doprowadzaniu sorbentu do kolumny (u ι - ok. 3 cm/min),
C – przy zbyt powolnym doprowadzaniu sorbentu do kolumny (u ι - ok. 0,22 cm/min),
D, D’, E – wypełnianie kolumny na mokro, odpowiednio: metodą filtracyjną lub tłokową w warunkach
optymalnych (przykłady D, D’) i sedymentacyjno-wibracyjną (przykład E), (w przypadku
D’ zastosowano głowicę dystrybucyjną zapewniającą realizację warunków nieskończonej średnicy
w kolumnie (S=50%) wypełnionej w tych samych warunkach jak w przykładzie D). Długości
warstwy wypełnienia w kolumnach: 15-25 cm
Na rys. 19 pokazano schematycznie kilka alternatywnych sposobów
wypełniania „na mokro” kolumn preparatywnych HPLC. Warto zwrócić uwagę
na metodę pokazaną na rys. 19b, nie tyle dlatego, że jest oryginalna i autor
nie spotkał w literaturze propozycji jej stosowania, ale przede wszystkim
dlatego, że jest prosta w realizacji, bardzo skuteczna w praktyce i może zostać
zastosowana w każdym laboratorium, które ma możliwość wykonania
w warsztacie mechanicznym kilku prostych metalowych elementów oraz po-
108