CamSep 7 1

More documents

Recommendations

Info

28 Do rozdzielania substancji o charakterze kwaśnym, jak ma to miejsce, np. w przypadku polifenoli, korzystne jest stosowanie kwasów, jako dodatku do fazy ruchomej, w celu obniżenia pH eluentu, tak by spełniony był następujący warunek pH < (pK a – 0,5 ÷ 1), jednakże przy zachowaniu wartości bezpiecznej dla fazy stacjonarnej – tzn. niepowodującej hydrolizy wiązań siloksanowych. W praktyce, za optymalną wartość uznaje się pH ≥ 2. Obniżenie wartości pH eluentu stosowanego do rozdzielania lub analizy związków chemicznych będących słabymi kwasami powoduje cofnięcie dysocjacji elektrolitycznej a w konsekwencji wzrost hydrofobowości i siły oddziaływań z fazą stacjonarną. W poniższej tabeli przedstawiono opisane w literaturze naukowej, przykładowe warunki chromatograficzne, stosowane do rozdzielania flawonoidów obecnych w ekstraktach roślinnych techniką RP -HPLC z wykorzystaniem różnych rodzajów kwasów jako modyfikator fazy ruchomej. Tabela 2. Zestawienie przykładowych warunków rozdzielania flawonoidów techniką RP-HPLC. Table 2. Summary of examples of chromatographic conditions for flavanoids separation using RP -HPLC. Ekstrahowany materiał Przygotowanie próbki/warunki Warunki chromatograficzne Przykład oznaczanych polifenoli Lit. ekstrakcji (Extracted material) Cynara cardunculus Oliwa z oliwek (Olive oil) Ilex paraguariens Zielona herbata (Green tea) (Sample preparation/extraction conditions) Ekstrakcja liści w 70% EtOH z dodatkiem kw asu mrów kowego (pH = 3,2) (Extraction of leaves with 70% EtOH and addition of formic acid, pH = 3,2) Ekstrakcja SPE, C 8, rozpuszczalniki (w kolejności użycia): n-heksan (elucja składników niepolarnych), acetonitryl, metanol oraz mieszanina metanol-w oda (1:1 v/v) (wymywanie kolejnych frakcji składników polarnych) (Extraction SPE, C 8; solvents, respectively, in the order: n-hexane (in order to remove the non-polar fraction) acetonitrile, methanol, methanolwater 1:1 v/v) (in order to gradually remove polar fractions) Ekstrakcja z w ykorzystaniem gorącej w ody (Extraction by the using a hot water) Ekstrakcja z w ykorzystaniem gorącej w ody (Extraction by the using a hot water) (Chromatographic conditions) Eluent A: H 2O (z dodatkiem HCOOH do pH = 3,2) Eluent B: CH 3CN Elucja gradientow a: 30 min: gradient liniow y od 0 do 100% B Kolumna: C 18 Temperatura: 27˚C V = 0,6 ml/min Detekcja: DAD Eluent A: H 2O/CH 3COOH (98:2 v/v)/ Eluent B: CH 3OH/ CH 3CN (1:1 v/v) Elucja gradientow a: 25 min: 95 – 70% A 10 min: 70 – 60% A 5 min: 60 – 52% A 10 min: 52 – 30% A 5 min: 30 – 0% A 10 min: 0 – 95% A 5 min: 95% A Kolumna: C 18 Temperatura: 25˚C V = 0,5 ml/min Detekcja: DAD Eluent A: H 2O/CH 3COOH (98:2 v/v) Eluent B: CH 3OH/CH 3COOH (98:2 v/v) Elucja gradientow a: 30 min: 15 – 40% B 10 min: 40 – 75% B 5 min: 75 – 85% B Kolumna: IB-SIL RP C 18 Temperatura: (nie podano) V = 1,2 ml/min Detekcja: DAD Eluent: H 2O/CH 3OH (70:30 v/v) + 0,1% CH 3COOH Kolumna: SB-C 18 Temperatura: (nie podano) V = 1 ml/min Detekcja: DAD (Example of analyzed polyphenols) Luteolina O-lukozyd; Luteolina 7-O-malonylglukozyd; Apigenina 7-O-rutynozyd; Kw as 3,4-dihydroksyfenylooctowy; Tyrosol; Oleuropeina; Rutyna; Pochodne kaw oilo; Procyjanidy; Epikatechina; Katechina; (Ref.) [12] [13] [14] [15] Vol. 7, No 1/2015 Camera Separatoria
29 Ekstrahowany materiał Przygotowanie próbki/warunki ekstrakcji Warunki chromatograficzne Przykład oznaczanych polifenoli Lit. (Extracted material) Suplementy diety zawierające polifenole (Dietary supplements containing polyphenols) Suplementy diety zawierające polifenole (Dietary supplements containing polyphenols) (Sample preparation/extraction conditions) Ekstrakcja z w ykorzystaniem metanolu (Extraction by the using a methanol) Ekstrakcja z w ykorzystaniem metanolu (Extraction by the using a methanol) (Chromatographic conditions) Eluent A: H 2O/CF 3COOH (99,95:0,05 v/v) Eluent B: CH 3CN Elucja gradientow a: 0,5 min: 95 – 80% A 1,5 min: 80 – 60% A 1,5 min: 60 – 10% A Kolumna: C 18 Temperatura: 25˚C V = 1 ml/min (t = 0 min); 0,5 ml/min (t = 0,5 min); 0,4 ml/min ( t= 2 min); 0,9 ml/min (t=3,5 min) Detekcja: DAD Eluent A: CH 3CN Eluent B: H 2O/CF 3COOH (99,95:0,05 v/v) Elucja gradientow a: 0,5 min: 8 – 13% A 0,5 min: 13 % A 1 min: 13 – 25% A 0,5 min: 25 – 35% A 0,5 min: 35% A 1 min: 35 – 70% A 1,5 min: 70 – 80% A 0,5 min: 80 – 8% A Kolumna: RP-18e Temperatura: 20˚C V = 1,3 ml/min (t = 0-1 min); 1,2 ml/min (t = 1-3 min); 1,3 ml/min (3- 4,5 min); 1,2 ml/min (4,5-5 min) Detekcja: DAD (Example of analyzed polyphenols) Rutyna; Kw ercetyna; Hesperydyna; Rutyna; Kw ercetyna; Hesperydyna; Neohesperydyna; Katechiny; (Ref.) [16] [17] Na podstawie zestawionych w tabeli nr 2 przykładów przytoczonych z literatury naukowej, można zauważyć, że istnieje wiele możliwości optymalizacji warunków rozdzielania chromatograficznego, tak aby wyizolować związki chemiczne z grupy polifenoli z materiał u roślinnego. Dotychczasowe rezultaty badań dotyczących rozdzielania mieszanin polifenoli [12-17] sugerują, że korzystniejsze jest użycie acetonitrylu który charakteryzuje się większą siłą elucji niż metanol co ma wpływ szczególnie na współczynnik retencji [16]. Zaobserwowano m.in. znaczące skrócenie czasu retencji składników mieszanin. Rezultaty innych badań dowodzą, że użycie dodatku do fazy ruchomej w postaci buforów może powodować rozkład izoflawonów o charakterze estrowym, dlatego tak istotne jest, by w tego typu rozdzieleniach zapewnić kwaśne środowisko fazy ruchomej [18]. Magiera i współpracownicy udowodnili również że wzrost pH od ok. 3 do 6 powodował zwiększenie stopnia rozmycia pików chromatograficznych, natomiast dla pH = 2,5÷3 uzyskali oczekiwany poziom rozdzielenia składników [16,17]. W większości przypadków zastosowań techniki RP, znacznie bardziej korzystne jest stosowanie elucji gradientowej, pozwalającej na uzyskanie wymaganego stopnia rozdzielenia oraz wyższej czułości. Tego typu rozdzielani a są zazwyczaj preferowane, gdy obecne w mieszaninie substancje charakteryzują się istotnymi różnicami w hydrofobowości. Jednakże do zastosowań na większą skalę (semi-preparatywną, preparatywną), realizacja rozdzielania w programie elucji gradientowej jest niekorzystna i może to powodować utrudnienia związane z realizacją procesu, głównie poprzez konieczność ścisłej kontroli składu eluentu oraz stosowanie dodatkowej aparatury. Należy nadmienić także, że w przypadku elucji gradientowej, proces recyrkulacji eluentu, a także regeneracji złoża kolumny jest znacznie bardziej utrudniony, niż w przypadku elucji izokratycznej, co także wywiera istotny wpływ na możliwość wykorzystania na skalę procesową. Ze względu na powyższe, w pracy badawczej przeprowadzono rozdzielania jedynie w warunkach izokratycznych z zastosowaniem ACN, jako organicznego składnika eluentu. Rozwiązanie to umożliwiło także na dokonanie jednoznacznej oceny wpływu dodatku kwasu na retencję składników (przy niezmiennej sile elucyjnej fazy ruchomej). Vol. 7, No 1/2015 Camera Separatoria
Page 1 and 2: Siedlce University of Natural Scien
Page 3 and 4: SPIS TREŚCI (CONTENTS) Prace przeg
Page 5 and 6: CAMERA SEPARATORIA Volume 7, Number
Page 7 and 8: 7 Norma WRI (World Resources Instit
Page 9 and 10: 9 temperaturze 15,6°C i mieszano 1
Page 11 and 12: 11 Tabela 3 Charakterystyka wyizolo
Page 13 and 14: 13 5. Wnioski końcowe 5. Conclusio
Page 15 and 16: 15 [39] M. Barcenas, E. Buenrostro-
Page 19 and 20: 19 wykorzystaniu parametrów chroma
Page 21 and 22: 21 w s - masa adsorbentu [g] R- sta
Page 23 and 24: 23 15. M. Momotko, G. Boczkaj, Use
Page 27: 27 1.2. Modyfikatory eluentów wyko
Page 31 and 32: 31 Zastosowano elucję izokratyczn
Page 33 and 34: 33 d) e) Rys. 3. Chromatogramy, otr
Page 35 and 36: 35 Na podstawie uzyskanych w trakci
Page 37 and 38: 37 Rys. 5. Chromatogramy, otrzymane
Page 39 and 40: 39 4. Podsumowanie (Summary) Wyniki
Page 43 and 44: 43 1 2 Rys. 1. Odległości przebyt
Page 45 and 46: 45 Tabela 3. Wartości współczynn
Page 47 and 48: 47 3.3. Dobór fazy ruchomej do roz
Page 49 and 50: k 49 Rys. 6. TLC chromatogram 1 mM
Page 51 and 52: 51 [10] P. Ionita, Is DPPH Stable F
Page 53 and 54: 53 The research was also aimed to d
Page 55 and 56: 55 siloksanowymi, na powierzchni po
Page 57 and 58: 57 Warto też zwrócić uwagę na k
Page 59 and 60: 59 b) "Specyficzne" metodyki wywoł
Page 61 and 62: 61 zawierające grupy karboksylowe
Page 63 and 64: 63 Rys. 8. Chromatogram TLC-FID otr
Page 65 and 66: 65 Uzyskane wyniki potwierdziły zn
Page 67 and 68: 67 Literatura (Literature) 1. Y. W.
Page 69 and 70: 69 47. M. Kamiński, J. Gudebska, T
Page 71 and 72: 71 Przeprowadzanie kontroli jakośc
Page 73 and 74: 73 Tab. 2. Zastosowanie impregnowan
Page 75 and 76: 75 W badaniach zastosowano następu
Page 77 and 78: 77 Poniżej zestawiono rezultaty ba
Page 79 and 80:
79 Tab. 4. Wartości współczynnik
Page 81 and 82:
81 wykluczanie steryczne. Świadczy
Page 83 and 84:
83 Tab. 8. Prawdopodobnie występuj
Page 85 and 86:
85 preparative separation of fats a
Page 87 and 88:
CAMERA SEPARATORIA Volume 7, Number
Page 89 and 90:
CPA DPPH• [GAE] 89 Oznaczanie ca
Page 91 and 92:
91 Wizualizacja za pomocą rodnika
Page 93 and 94:
93 4. Literatura (Literature) [1] G
Page 95 and 96:
95 gdzie: V R - objętość retencj
Page 97 and 98:
97 Zapory ghostwriting i guest-auto
Page 99:
99 the article after the reviewing
show all

CamSep 7 1

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?