Postepy nauk rolniczych - Instytucja Naukowa - Polska Akademia ...

Alternaria solani – patogen pomidora … 61z opcjonalnym dodaniem niewielkiej iloœci detergentu w celu zwiêkszenia wydajnoœciprocesu i delikatne zdrapuje za pomoc¹ szkie³ka mikroskopowego lub pêdzelka,a nastêpnie przefiltrowuje zawiesinê w celu usuniêcia pozosta³oœci grzybni. Ostatecznierozcieñcza siê mieszaninê do wymaganego stê¿enia. Stwierdzono ¿e najlepszeefekty sztucznej inokulacji uzyskuje siê przy stê¿eniu1×10 4 –1×10 5 konidiów w 1 mlzawiesiny.Shahin i Shepard [35] opracowali metodê pozwalaj¹c¹ na szybkie (4 do 6 dni)uzyskanie zarodnikowania grzyba. Polega ona na zastosowaniu ró¿nych po¿ywek dlahodowli kultury grzyba i do indukcji sporulacji. Kulturê patogena prowadzi siêpocz¹tkowo na po¿ywce PDA w 25°C, w ciemnoœci. Indukcji zarodnikowaniadokonuje siê 48–72 godziny póŸniej, ale przed uformowaniem powietrznej grzybni.Wycina siê wtedy 4 mm 2 bloczki po¿ywki przeroœniêtej przez grzybniê i przenosi je napo¿ywkêSopH7,4isk³adzie: 20 g sacharozy, 30 g CaCO 3 , 20 g agaru w 1 litrze wodydestylowanej. Bloczki zalewa siê steryln¹ wod¹ destylowan¹ tak, by zosta³y czêœciowopokryte. Przygotowany w ten sposób materia³ inkubuje siê przez 18–24 h w 18°C,w ciemnoœci. Na tym etapie zaczynaj¹ powstawaæ konidia, które po 48–72 h pokrywaj¹ju¿ ca³¹ powierzchniê po¿ywki, natomiast grzybnia wrasta w po¿ywkê S, co jestrównoznaczne z brakiem grzybni powietrznej. Efektu powstawania grzybni powietrznejnie eliminuj¹ inne metody. Tak przygotowane kultury grzyba przep³ukujesiê wod¹ destylowan¹, a nastêpnie przefiltrowywuje siê i rozcieñcza do wymaganegostê¿enia. Dla spowodowania powtórnej indukcji zarodnikowania kultury grzybaumieszcza siê ponownie w 18°C, w ciemnoœci. Metoda ta jest pracoch³onna i znacznaczêœæ badaczy do pozyskania konidiów kultury A. solani utrzymuje na po¿ywce V8w 12-godzinnym fotoperiodzie z zastosowaniem promieni UV.Stopieñ odpornoœci roœlin na alternariozê okreœla siê w testach szklarniowychi polowych. Wykonywane s¹ tak¿e testy listkowe, w których pojedyncze kropleinokulum nanosi siê na odciête listki pomidora umieszczone w komorze z podwy¿szon¹wilgotnoœci¹. Jako pierwszy taki test przeprowadzi³ Locke [20]. Czêœæbadaczy prowadz¹cych analizy t¹ metod¹ otrzyma³o jednak wyniki odmienne i niekoreluj¹cez rezultatami uzyskanymi innymi metodami [11, 22]. Zjawisko to t³umaczysiê nierównomiernym roz³o¿eniem hormonów i enzymów w listkach u³o¿onychw ró¿nych partiach roœliny. Zmodyfikowana procedura z zastosowaniem przemywanialistków w 10,7μM NAA lub 4,0 μM 2,4-D zwiêksza powtarzalnoœæ wyników[6]. Metoda ta zastosowana by³a na ziemniakach i nale¿a³oby przeprowadziæ analogicznetesty tak¿e na pomidorach, aby potwierdziæ ich przydatnoœæ.Testy szklarniowe przeprowadza siê na 4–5-tygodniowych roœlinach. Stosowanes¹ dwa sposoby inokulacji roœlin zawiesin¹ zarodników: poprzez opryskiwanie roœlinoraz nanoszenie kropli [7, 27]. Pierwsza z nich polega na opryskaniu roœlin zawiesin¹o stê¿eniu1×10 4 –1×10 6 konidióww1mlzapomoc¹ opryskiwacza i umieszczeniuroœlin siê w plastikowych komorach o wilgotnoœci wzglêdnej 100% z 12 godzinnymfotoperiodem i temperatur¹ 24/18°C – dzieñ/noc. Przed³u¿enie czasu inkubowania