Download (534Kb) - Repozitorij Medicinskog fakulteta Sveučilišta u ...

Denmark), gdje se odvija denaturacija na +82ºC, 5 minuta, a zatim slijedi hibridizacija na+45ºC, preko noći. Slijedeći dan rezovi se ispiru tri puta: u prethodno ugrijanom puferu0.0003% Tween / 0.4xSSC na +72ºC, 2 minute; u prethodno ugrijanom puferu 0.0001%Tween / 2xSSC na +72ºC, 2 minute i na sobnoj temperaturi u 2xSSC, 2 minute. Završno,rezovi tkiva se prekrivaju s 10µl Vectashield sredstva za uklapanje (Vector LaboratoriesInc., USA) koje sadrži 10 -5 g/L 4',6-diamidino-2-fenil-indol (DAPI) fluorescirajuće boje(Serva, Germany) za kontrastiranje DNA.3.4.2 ProbeLSI IGH/BCL2 dual color, dual fusion translocatione probe je dizajnirana za detekcijujukstapozicije lokusa teškog lanca imunoglobulina (IgH) i sekvence BCL2 gena uključeneu t(14;18)(q32;q21) (194,195). Proba sadrži LSI IgH probu (slika 1) obilježenu saSpectrumGreen, veličine otprilike 1.5 Mb, homologne sekvence s cijelim IgH lokusom i sdijelom sekvence veličine 300 kb uz 3' kraj IgH lokusa. LSI BCL2 proba (slika 2)obilježena je sa SpectrumOrange i pokriva regiju veličine otprilike 750 kb, koja uključujecijeli BCL2 gen s dodatnim sekvencama ukupne veličine 250 kb distalno i proksimalnood BCL2 gena. Rezultat hibridizacije u normalnoj jezgri s LSI IgH/ BCL2 probom su dvanarančasta i dva zelena signala (2O2G uzorak). U jezgri s t(14;18)(q32;q21) najčešćiuzorak je jedan narančast, jedan zeleni signal, predstavljajući normalne homologe i dvanarančasto/zelena (žuta) fuzijska signala, predstavljajući recipročnu translokaciju(1O1G2F uzorak) (194).