Zde - 2. lékařská fakulta - Univerzita Karlova

P-58. VÝZNAM HYPOXIE A HIF-1α PRO VZNIK CHEMOREZISTENCE U BUNĚČNÝCH LINIÍODVOZENÝCH OD LIDSKÉHO NEUROBLASTOMUMaříková H. 1 , Hraběta J. 1 , Groh T. 1,2 , Rahman M.A. 1 , Cipro Š. 3 , Eckschlager T. 11 Klinika dětské hematologie a onkologie UK 2. LF a FN Motol Praha; 2 Katedra biochemie PřF UK vPraze; 3 Ústav patologie a molekulární medicíny UK 2. LF a FN Motol PrahaŠkolitel: prof. MUDr. Tomáš Eckschlager, CScÚvod: Hypoxie je charakteristickým znakem mikroprostředí solidních nádorů. Adaptace nádorovýchbuněk na hypoxické podmínky má řadu významných biologických dopadů, podílí se na agresivnějšímchovaní nádorů, jejich dediferenciaci a je jednou z příčin snížení apoptózy indukované cytostatiky azvýšení genetické nestability nádorových buněk. Hlavním faktorem, který adaptaci na hypoxicképrostředí ovlivňuje, je tzv. hypoxií indukovaný transkripční faktor (HIF-1α). HIF-1α transaktivuje vícenež 100 genů, které zprostředkovávají adaptivní odpověď nádorových buněk na hypoxii. Mezi tytogeny patří například gen pro vaskulární endotheliální růstový faktor (VEGF), erythropoetin (EPO) aglukosový transporter 1 (SLC2A1). Pochopení regulačních mechanismů HIF-1α proto může mít velkývýznam při vývoji léčby zhoubných nádorů. Předpokládá se, že HIF a jeho kaskády jsou zodpovědnéza vznik chemo- a radiorezistence hypoxických nádorových buněk.Cíl: Cílem projektu je zjistit, jaké mechanismy jsou zodpovědné za vznik chemorezistence u buněkneuroblastomu v hypoxii, jaký podíl má na jejím vzniku transkripční faktor HIF-1α a jakým způsobemlze tuto hypoxií indukovanou chemorezistenci potlačit.Materiál a metody: Buněčné linie odvozené od lidského neuroblastomu – SK-N-AS, UKF-NB-4, UKF-NB-3, SH-SY5Y a IMR-32. Rezistence buněk na cisplatinu a ellipticin byla sledována MTT testem,stanovením aktivity kaspázy 3 a vazbou Annexinu V. HIF-1α byl inhibován nízkomolekulární inhibitorychetominem, YC-1 a LW6. Buněčná linie SK-N-AS byla transfekována siRNA. Pomocí qRT-PCR bylau transfekovaných buněk zjišťována exprese HIF-1α cílových genů VEGFA a SLC2A1. Protein HIF-1αbyl detekován pomocí Western blotu.Výsledky: U všech námi studovaných linií dochází i k normoxické expresi HIF-1α. V hypoxii jsmepozorovali rezistenci na cytostatika cisplatinu a elipticin a prokázali jsme, že inhibicí HIF-1α je možnétuto rezistenci hypoxických nádorových buněk k cytostatikům snížit.Závěr: Bylo prokázáno, že inhibicí HIF-1α je možné snížit rezistenci hypoxických nádorových buněkna cisplatinu, ale ne ji zcela potlačit. Pro další sledování vlivu HIF-1α na hypoxickou rezistenci u NBLlinií se budeme snažit vytvořit stabilní linie s potlačenou expresí HIF-1α a jeho homologu HIF-2α. Tytovýsledky jsou nezbytné pro další studium proteinu HIF-1α a jeho vlivu při působení cytostatik vhypoxických oblastech nádorů.Podpora projektu: Projekt byl podpořen Grantovou agenturou Univerzity Karlovy GA UK 620612.90