Zde - 2. lékařská fakulta - Univerzita Karlova

05. AKTIVACE TH17 DRÁHY U PACIENTŮ S DIABETEM 1.TYPU A JEJICH PRVOSTUPŇOVÝCHPŘÍBUZNÝCHVčeláková J, Petruželková L, Koloušková S, Šťavíková V, Ulmannová T, Labiková J, Štechová KPediatrická klinika, 2.lékařská fakulta, Karlova Univerzita, Praha, ČRŠkolitel: doc. MUDr. Kateřina Štechová, Ph.D.Úvod: Diabetes mellitus 1. typu (DM1) je onemocnění, které se vyznačuje zánikem beta-buněkpankreatu vedoucím k absolutnímu nedostatku inzulínu. Preklinickou fázi onemocnění je možnérozpoznat měsíce i roky před samotnou manifestací pomocí asociovaných autoprotilátek. DM1 jeautoimunitní onemocnění na jehož vzniku se podílí především pomocné T lymfocyty (Th) aprozánětlivé nastavení imunitní odpovědi.Cíl: Zaměřili jsme se na efekt diabetogenních autoantigenů a jejich vliv na mononukleární buňkyperiferní krve (PBMC) s cílem identifikovat buněčné procesy asociované s prediabetickou adiabetickou fází onemocnění.Materiál a metody: Periferní krev byla odebrána od prvostupňových příbuzných s DM1 (DRL), čerstvěmanifestovaným pacientů s DM1 a od zdravých kontrol (ZK). Vyizolované PBMC byly inkubovány 72hodin v médiu s/bez diabetogenních autoantigenů. Poté byla z kultury vyizolovaná total RNA aprovedena analýza u 43 probandů pomocí vysokodenzitní „Phalanx arrays“ (DM1 n=12, DRLprotilátkově negativní(Abs-) n=9, DRL protilátkově pozitivní(Abs+) n=9 a ZK n=13).Následně jsme pomocí qRT-PCR měřili genovou expresi IL-6, -17, -23, TGFbeta, RORC, FOXP3 aSTAT3. Data byla normalizována vůči GUSB a B2M. qRT-PCR data byla měřena na nezávislé kohortě50 probandů (DM1 n=15, DRL-Abs- n=13, DRL-Abs+ n=11 a ZK n=11) pomocí „TaqMan GeneExpression arrays“.Výsledky: V „čipové studii“ bylo nejvíce signifikantně změněných imunologických drah (24%)nalezeno po porovnání DM1 a ZK. Na 1.místě byla antigenní prezentace přes MHC II.třídy. Na 2.místěbyla dráha pro prozánětlivou Th17 diferenciaci.Po zaměření na Th17 dráhu pomocí qRT-PCR jsme zjistili signifikantní změny především mezi DM1 aDRL-Abs-. Zde byla u DM1 zvýšená genová exprese IL-6 (p=0,007) , -17 (p=0,005), -23 (p=0,046) aTGFbeta (p=0,042), což jsou základní cytokiny účastnící se Th17 diferenciace. Zároveň DM1 měli izvýšené hladiny transkripčních faktorů FOXP3 (p=0,022), STAT3 (p=0,019) a RORC (p=0,086).Podobný trend byl patrný i mezi DM1 a ZK. Při porovnání mezi DM1 a DRL-Abs+ jsme nenalezližádné signifikantní změny, což svědčí o obdobném prozánětlivém nastavení.Závěr: U čerstvě manifestovaných pacientů s DM1 je zvýšená prozánětlivá Th17 odpověď. Zároveňvidíme aktivaci regulačních mechanismů v podobě zvýšení FOXP3 a TGFbeta. Z našich výsledků jemožné říci, že se organismus pravděpodobně snaží regulovat přítomný zánět a je patrná aktivaceTh17 i Tregs drah.Podpora projektu: Podpořeno projektem MZ00064203 (FN MOTOL) a IPL 699 001 (Pediatrickáklinika, 2.LF, UK, Praha)13