Zde - 2. lékařská fakulta - Univerzita Karlova

12. DYNAMIKA A VÝVOJ PRELEUKEMICKÉHO KLONU U POMALU NASTUPUJÍCÍCH LEUKÉMIÍZimmermannová O. 1,2 , Hrušák O. 1,2 , Froňková E. 1,2 , Kubričanová Žaliová M. 1,2 , Mejstříková E. 1,2 ,Mužíková K. 1,2 , Zemanová Z. 3 , Malinová E. 3 , Starý J. 2 , Zuna J. 1,21 CLIP – Childhood Leukemia Investigation Prague; 2 Klinika dětské hematologie a onkologie, 2.LF UK;3 Cenrum nádorové cytogenetiky ÚKBLD 1.LF UKŠkolitel: Doc. MUDr. Jan Zuna, PhD.Úvod: Akutní lymfoblastická leukémie (ALL) se u 1-2% dětí manifestuje již před diagnózou obdobíminiciální pancytopenie a útlumu kostní dřeně následovaným spontánní tranzientní remisí.Cíl: Našim cílem bylo sledovat vývoj budoucího leukemického klonu, dynamiku jeho velikosti a změnyvedoucí k obrazu klinicky aktivní leukémie v prediagnostickém období.Materiál a metody: Získali jsme vzorky z preleukemické fáze ALL od 5 pacientů, u nichž vlastnídiagnóze předcházelo období anémie (1,4 - 6,1 měsíce). V kostní dřeni jsme kvantifikovalipreleukemické buňky pomocí klonálně specifických přestaveb genů pro imunoglobuliny (Ig) a T-buněčné receptory (TCR) a analýzou leukemospecifických aberací metodami SNP array a FISH. Prozpětnou detekci blastů v prediagnostických vzorcích byly použity různé přístupy – qPCR, FISH a nextgeneration sequencing (NGS).Výsledky: U všech pacientů (n=5) byly detekovány přestavby genů pro Ig/TCR pomocí qPCR vdiagnostickém materiálu. Nejméně jeden preleukemický klon byl nalezen ve všech prediagnostickýchvzorcích (řádově v rozmezí 10-1 až 10-6). U tří pacientů, s možností vyšetřit více než jedenpreleukemický vzorek, jsme pozorovali překvapivou dynamiku ve velikosti aberantního klonu. Oprotiočekávanému pozvolnému nárůstu jsme zaznamenali vysoké iniciální hladiny preleukemických buněk,následované dočasným výrazným poklesem v době 1 - 3 měsíce před diagnózou. Dva pacienti bylivyšetřeni metodou NGS. Získaná data korelovala s výsledky backtrackingu pomocí qPCR a přineslapodrobnější informace o spektru přestaveb a možném imunologickém pozadí progrese preleukémie vklinicky aktivní onemocnění. Vyšetření dále odhalilo významné zastoupení nemaligního T buněčnéhoklonu s identickou přestavbou Vg9-Jg1.2, kterému je přisuzována role v antimikrobiální aprotinádorové imunitě. Dynamika tohoto klonu navíc negativně korelovala s hladinami leukemickýchbuněk.U pacienta s ETV6/RUNX1 pozitivní leukémií jsme pomocí SNP array určili přídatné aberace anásledně je analyzovali pomocí FISH. Jedna z aberací (delece 1p33) byla přítomna ve všechleukemických buňkách při diagnóze, zatímco 3 měsíce před diagnózou byl tento úsek deletovánpouze u minoritního klonu buněk s přestavbou ETV6/RUNX1.Závěr: Preleukemické buňky nejsou jen pomalu narůstajícím klonem, ale mají svou specifickoudynamiku. Ještě poměrně krátkou dobu před vlastním nástupem leukémie pak dochází ke klonálnímuvývoji či selekci leukemických buněk vedoucí k progresi do klinicky aktivního onemocnění.Podpora projektu: IGA-MZ NT/12428-5, GAUK 61821220