Ivana Jovanovic MT.pdf (7089 KB) - Institut tehniÄkih nauka SANU

More documents

Recommendations

Info

<strong>Ivana</strong> Jovanović Magistarska teza a) b) c) d) e) f) Faktor oblika, f L Slika 4.50 Rezultati stereoloških merenja čestica praha PDLLA u kojem je inkorporiran protein HRP-serija 5. a) poprečni presek-A A , b) obim-L P , c) feret X, d) feret Y, e) maksimalni prečnik čestice-D max , f) faktor oblika-f L 92
<strong>Ivana</strong> Jovanović Magistarska teza 4.3.3 Rezultati SDS-PAGE elektroforeze prahova kompozita (PDLLA+BSA i PDLLA+HRP) Kvalitativna analiza kompozitnog praha sastavljanog od polimera PDLLA i proteina, BSA ili HRP, je urađena primenom elektroforeze. Za razdvajanje i karakterizaciju proteina korišćena je tehnika jednodimenzionalne elektroforeze u poliakrilamidnom gelu u prisustvu sodium-dodecilsulfata (SDS-PAGE) po modifikovanoj metodi Sambrook-a i sar. (1989) [118], koju je postavio Laemmli (1970) [119]. Ova metoda se zasniva na razdvajanju proteina na osnovu njihovih molekulskih masa, gde poliakrilamidni gel služi kao inertni matriks kroz čije se pore proteini kreću pod uticajem električnog polja. Veličina pora varira u zavisnosti od procenta akril- i bis-akrilamida u gelu i podešava se prema opsegu molekulskih masa proteina koji se razdvajaju. Negativno naelektrisani molekuli SDS-a, prisutni u rastvoru u kome se resuspenduju uzorci, vezuju se svojim hidrofobnim delom za hidrofobne delove molekula proteina. Pošto je količina SDS-a vezanog za jedinicu mase proteina konstantna (1.4 g SDS-a / 1 g proteina), šarža proteina je određena SDS-om a ne šaržama amino kiselina. Tako je veličina negativne šarže svakog proteina direktno proporcionalna njegovoj molekulskoj težini. U električnom polju, tokom elektroforeze, negativno naelektrisani proteini kreću se ka pozitivnom polu kroz poliakrilamidni gel koji služi kao molekulsko sito. Ovako se proteini razdvajaju u niz diskretnih traka koje postaju vidljive nakon bojenja gelova. U eksperimentima je kao gel za razdvajanje korišćen 12% poliakrilamidni gel sledećeg sastava: 11.7% akrilamid, 0.3% metilen-bis-akrilamid, 0.375 M Tris-HCl, pH 8.8, 0.1% SDS, 0.05% amonijum - persulfat i 0.05% TEMED (tetrametil-etilen-diamin). Preko polimerizovanog gela za razdvajanje u pločama, naliven je 4% gel za skoncentrisavanje uzoraka u sastavu: 3.9% akrilamid, 0.1% metilen-bis-akrilamid, 0.125 M Tris-HCl, pH 6.8, 0.1% SDS, 0.05% amonijum - persulfat, 0.1% TEMED. Proteini su pre nanošenja na elektroforezu rastvoreni u puferu za uzorke: 2% SDS, 0.0625 M Tris-HCl, pH 6.8, 5% β-merkaptoetanol, 8.8% glicerol i 0.05% bromfenol plavo. Kao pufer za elektroforezu korišćen je Tris-glicinski pufer, pH 8.8: 0.195 M glicin, 25 mM Tris-HCl, pH 8.8, 0.1% SDS. Kroz gel za skoncentrisavanje uzorci su putovali pri naponu 0.12 kV, a nakon ulaska u gel za razdvajanje napon je povećan na 0.15 kV. Elektroforeza je trajala jedan sat, odnosno do izlaska boje bromfenol plavo iz gela, a rađena je u mini Bio-Rad sistemu (Mini-PROTEAN II electrophoresis cell). Po završetku elektroforeze gelovi su bojeni Coomassie plavim. Bojenje proteina u poliakrilamidnom gelu Nakon elektroforeze proteini su bojeni potapanjem gela u rastvor: 0.2% Coomassie plavo (Coomassie Brilliant Blue R-250), 45% metanol i 10% glacijalna sirćetna kiselina, preko noći uz mešanje. Odbojavanje gelova, u cilju uklanjanja nespecifično vezane boje, vršeno je u smeši metanola, vode i glacijalne sirćetne kiseline u odnosu 4.5 : 4.5 : 1 (v/v). Sa gela elektroforeze se može potvrditi prisustvo proteina u različitim serijama. Trake predstavljaju serije koje su rađene pod različitim uslovima i navedene su u tabeli 3.3. Na osnovu 93
Page 2 and 3:
Istraživanja izvršena u okviru ov
Page 4 and 5:
Izvod U svetu trenutno postoji zna
Page 6 and 7:
Ivana Jovanović Magistarska teza 4
Page 8 and 9:
Ivana Jovanović Magistarska teza B
Page 10 and 11:
Ivana Jovanović Magistarska teza U
Page 12 and 13:
Page 14 and 15:
Ivana Jovanović Magistarska teza o
Page 16 and 17:
Ivana Jovanović Magistarska teza p
Page 18 and 19:
Ivana Jovanović Magistarska teza T
Page 20 and 21:
Ivana Jovanović Magistarska teza S
Page 22 and 23:
Ivana Jovanović Magistarska teza r
Page 24 and 25:
Ivana Jovanović Magistarska teza S
Page 26 and 27:
Ivana Jovanović Magistarska teza K
Page 28 and 29:
Ivana Jovanović Magistarska teza g
Page 30 and 31:
Tabela 1.4 Pregled dosadašnjih eks
Page 32 and 33:
Ivana Jovanović Magistarska teza D
Page 34 and 35:
Ivana Jovanović Magistarska teza n
Page 36 and 37:
Page 38 and 39:
Page 40 and 41:
Ivana Jovanović Magistarska teza k
Page 42 and 43:
Page 44 and 45:
Ivana Jovanović Magistarska teza P
Page 46 and 47: Ivana Jovanović Magistarska teza 3
Page 48 and 49: Ivana Jovanović Magistarska teza P
Page 54 and 55: Ivana Jovanović Magistarska teza r
Page 56 and 57: Ivana Jovanović Magistarska teza L
Page 60 and 61: Ivana Jovanović Magistarska teza S
Page 68 and 69: Ivana Jovanović Magistarska teza r
Page 88 and 89: Ivana Jovanović Magistarska teza a
Page 98 and 99: Ivana Jovanović Magistarska teza e
Page 104 and 105: Ivana Jovanović Magistarska teza T
Page 110 and 111: Ivana Jovanović Magistarska teza n
Page 112 and 113: Ivana Jovanović Magistarska teza h
Page 114 and 115: Ivana Jovanović Magistarska teza d
Page 116 and 117: Ivana Jovanović Magistarska teza F
Page 122 and 123: Ivana Jovanović Magistarska teza n
Page 124 and 125: Ivana Jovanović Magistarska teza [
Page 136: Nagrade • Nagrada za najbolji pos
show all

Ivana Jovanovic MT.pdf (7089 KB) - Institut tehniÄkih nauka SANU

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?

Ivana Jovanovic MT.pdf (7089 KB) - Institut tehniÄkih nauka SANU