Ivana Jovanovic MT.pdf (7089 KB) - Institut tehničkih nauka SANU

Ivana Jovanović
Magistarska teza
razdvajanje proteina od ostalih agregata ili od lipida. Kovalentne S-S veze između različitih lanaca
se kidaju dodatkom redukcionog sredstva (ß-merkaptoetanola ili ditiotreitola).
U toku elektroforeze, smeša ovih kompleksa se kreće kroz poliakrilamidni gel. Svi proteini
su pokriveni molekulima SDS-a, tako da su svi jako negativno naelektrisani, zbog čega se svi
"kompleksi" kreću ka pozitivnoj elektrodi. Manji molekuli se kreću brže (manji otpor sredine) kroz gel
i, za isto vreme, pređu duži put od većih molekula. Na kraju elektroforeze proteini su razdvojeni u
diskretne trake po opadajućoj masi (veličini molekula), od mesta nanošenja do kraja gela.
Pokretljivost se izražava preko R f vrednosti.
Bojenjem organskim bojama ili srebrom omogućava se da se po pojedinačnoj traci proteina
detektuje od 0.5 μg do 0.5 ng proteina. Lakoća rada, efikasnost i osetljivost čine ovu metodu
najosetljivijom i najčešće korišćenom u analizi složenih proteinskih smeša.
3.2.6 Skenirajuća elektronska mikroskopija
Veličina i oblik čestica prahova PLLA i PDLLA (bez i sa inkorporiranim proteinom)
određivani su skenirajućom elektronskom mikroskopijom. Elektronski mikroskop služi za dobijanje
uvećane slike objekta difrakcijom visoko energetskih elektrona, a istovremeno predstavlja metodu
koja se koristi za ispitivanje topografije površina čvrstih, neisparljivih materijala, direktnim
posmatranjem ili proučavanjem fotografski snimljenih objekata. Uzorci za SEM moraju biti
neisparljivi, da bi se unutar mikroskopa mogao održati visoki vakuum. Uzorci moraju biti
elektroprovodni, jer se uzorci koji nemaju provodljivost sa upadnim snopom elektrona statički
naelektrišu, zbog čega elektronski snop "beži" sa mesta koje se posmatra, što onemogućuje
posmatranje. Za karakterizaciju uzoraka PLLA i PDLLA (bez i sa inkorporiranim proteinom) korišćen
je elektronski mikroskop marke JEOL-JSM-6460LV (Japan), sa energijom elektrona od 10 do 50
KeV-a. Uzorci su naparavani zlatom pomoću uređaja za naparavanje 3ΔL-TEC SCD005, pomoću
struje od 30 mA sa udaljenosti od 50 mm tokom 180 s. Karakteristična SEM fotografija mikrosfera
PDLLA bez inkorporiranog proteina je prikazana na slici 3.6. Sa SEM fotografija prahova PLLA i
PDLLA (bez i sa inkorporiranim proteinom) određivane su površinska morfologija i veličina čestica.
Slika 3.6 SEM fotografija praha PDLLA bez proteina
50