Pokaż cały numer - FPN - Farmaceutyczny PrzeglÄ d Naukowy

Farm Przegl Nauk, 2010, 12
Ryc. 3. Relatywna ilość białka syncytyny I w odniesieniu do ilości
białka beta-aktyny w próbkach linii HEK293 zakażonej wirusami
PERV po określonej liczbie pasaży komórkowych. Wartości dla poszczególnych
próbek oznaczają stosunek pola powierzchni pod pikiem
wykresu gęstości optycznej dla syncytyny I do pola powierzchni pod
analogicznym pikiem dla beta-aktyny.
rek linii nerki świni PK-15 jest opisywana wielokrotnie w literaturze
[18]. Prace te nie podają jednak wprost, po jakim
czasie od momentu zakażenia sekwencje PERV były wykrywane
w zakażanych komórkach techniką detekcji materiału
genetycznego (PCR lub RT-PCR w przypadku detekcji
wirusowego RNA). Kuddus i wsp. w swoich badaniach za
zakażone i przeznaczone do dalszych analiz uznaje komórki
HEK293 po 17 pasażu od zakażenia PERV [18]. W naszym
eksperymencie istotne było ustalenie, kiedy zintegrowane
z genomem komórek HEK293 wirusy PERV są możliwe do
wykrycia techniką PCR, ponieważ obecność prowirusowego
DNA świadczy jednoznacznie o zajściu zakażenia. W przypadku,
gdy przedmiotem detekcji jest wirusowe RNA (materiał
genetyczny wirusa) nie ma pewności, czy wykrywa
się wirusy potomne czy są to PERV pozostałe w hodowli
po procedurze zakażania. Nasze badania wskazują, że prowirusy
PERV pojawiają się w komórkach HEK293 w ilości
pozwalającej na ich detekcję po 5 pasażu komórkowym
licząc od momentu zakażenia. Jednak ilość uzyskanego
DNA gag PERV (intensywność prążka na żelu) wskazuje,
że wyjściowa liczba cząsteczek prowirusów jest niższa
w porównaniu z próbkami kontrolnymi- linii PK15 oraz
trwale zakażonej linii HEK293/CIRCE (na rycinie 1. por.
nr 4-7 z nr 3 i 8).
Dane literaturowe wskazują, że ekspresja endogennych
retrowirusów człowieka z rodziny HERV-W ma miejsce
18
w licznych tkankach i liniach komórkowych. Niestety,
szczegółowe badania opisane przez Yi i wsp.
(2004) wskazujące, że gen env HERV-W ulega
ekspresji w kilku badanych liniach komórkowych,
nie obejmują linii HEK293 [21]. Ekspresja env
HERV-W została natomiast potwierdzona w linii
U-31, która podobnie jak HEK293, została wyprowadzona
z komórek nerki człowieka [21]. Z kolei
badania Nellaker i wsp. [22] wykazały obecność
transkryptów HERV-W również w linii HEK293.
Dowodzi to, że linia HEK293 jest obiektywnym
wyborem do analizy ekspresji genu env HERV-W.
W przedstawionym przez nas eksperymencie,
we wszystkich badanych próbkach komórek linii
HEK293 wykazano ekspresję białka syncytyny I.
Wstępna analiza wariancji wykazała, że pomiędzy
wszystkimi badanymi próbkami z linii HEK293
istnieją istotne statystycznie różnice w ekspresji
syncytyny I (p