GJ - Privredna komora Srbije

Fiziološki testovi
Sposobnost rasta izolata na razliĉitim pH vrednostima testirana je na YEM podlozi u kojoj je pH bio 5,5; 7 I
8,5. Sposobnost hidrolize uree testirana je na YEM podlozi sa 2% (vt/wt) uree I 0,012% fenol crvenog kao
indikatora da je urea hidrolizirana (Lindstrom and Lehtomaki, 1988). Obrazovanje bele zone oko kolonija na
Hofer podlozi bila je pozitivna reakcija na taloţenje kalcijum-glicerofosfata (Hofer, 1941).
Izolati su testirani na sposobnost rasta na YEM agaru u prisustvu 8% KNO 3 (Drayfus et al., 1988). Sojevi
Rhizobium sp. testinirani su na sposobnost upotrebe razliĉitih ugljanih hidrata kao izvora ugljenika. Na YEM
agaru, ali bez manitola upotrebljena su sledeća jedinjenja: skrob, glicerol, Na-acetat, sorbitol, dekstrin,
maltoza, laktoza, salicin. Sve koncentracije ugljenih hidrata bile su 1% (w/v) (Vincent, 1970). U cilju
procene otpornosti sojeva Rhizobium sp. na razliĉite antibiotike korišćena je metoda difuzije u agaru s filterdiskovima
koja se koristi u bakteriologiji (Hajsig et al., 1992.; Martensson, 1992). U petri kutije s
bakterijskom kulturom na YMA podlozi stavljaju se razliĉiti komercijalni antibiotski diskovi. U ovom
istraţivanju su korišteni antibiotski diskovi sledećih antibiotika: Streptomycin, Lincomycin, Neomycin,
Chloramphenicol, Erytromycin i Penicilin. Sva ispitivanja izvršena su u tri ponavljanja.
Numerička analiza
Rezultati fizioloških testova oznaĉeni su kao - = nijedan izolat nema pozitivnu reakciju, + = svi izolati su sa
pozitivnom reakcijom i 1,2,3…n = broj izolata sa pozitivnom reakcijom. Svi naĊeni izolati svrstani su u šest
klastera prema mestu uzorkovanja. Za odreĊivanje mere udaljenosti/sliĉnosti izmeĊu klastera korišćena je
UPGMA - unweighted pair-group method using arithmetic averages ili average linkage between groups.
Metoda definiše udaljenost izmeĊu dva klastera kao prosek udaljenosti izmeĊu svih parova koji se mogu
definisati izmeĊu dva objekta. Npr. ako klaster A ĉine objekti 1 i 2, a klaster B
objekti 3,4 i 5, udaljenost izmeĊu klastera A i B moţemo odrediti kao prosek udaljenosti izmeĊu sledećih
parova objekata: (1,3), (1,4), (1,5), (2,3), (2,4), (2,5). Tih unakrsnih udaljenosti ima k A x k B. Ovo je
standardna metoda u programu SPSS.
REZULTATI
Pepeo termoelktrana u Kostolcu je nastao sagorevanjem uglja u kotlovima termoelktrana i u prvom periodu
posle deponovanja je lišen normalne mikrobiološke zajednice karateristiĉne za plodna zemljišta u okolini.
Pored toga pepeo kao supstrat za rast mikroorganizama predstavlja ekstremofilno stanište (visok pH,
odsustvo organskog azota, prisustvo teških metala, bor). Mikroorganizmi naseljavaju pepeo i njihova
brojnost je sa godinama povećava. Na sveţim deponijama pepela koje se nalaze u fazi zasnivanja
biopokrivaĉa radi spreĉavanja erozije, na rezervnim kasetama oubiĉajna mera je setva leguminoza
(Medicago sativa i Lotus corniculatus) kao zelenišnog Ċubriva. Na korenovima pomenutih leguminoza nisu
naĊene kvrţice sa rizobijalnim bakterijama, pa zakljuĉujemo da u pepelu nema inokuluma bakterija. Kvţice
su pronaĊene na spontano kolonizovanim uzorcima leguminoze Vicia craca, a izolati su oznaĉeni sa RL01,
RL02 i RL03. Na zatvorenim deponijama pepela se posle trideset godina od rekultivacije razvija livadska
zajednica u kojoj egzistiraju posejane i spontano nikle leguminoze. Posle humifikacije, Ċubrenja i
navodnjavanja i fiziĉko-hemijski uslovi na pepelu se menjaju u smislu normalizacije vrednosti pH, bolje
obezbedjenosti makroelementima, i odsustva nekih toksikanata. U takvim uslovima Vicia craca, Medicago
sativa, Lotus corniculatus, Trifolium repens i T. pratense stupaju u simbiozu sa specifiĉnim, autohtonim i
superiornim sojevima bakterija Rhizobium sp.. na starim deponijama pepela otkriveno je 6 izolata bakterija
oznaĉenih sa RL04-09 (Tabela 2).
Sveţe deponije jalovine sa površinskog kopa uglja Drmno sponatano naseljavaju razliĉite vrste korovskoruderalne
vegetacije. Na uzorcima spontano nikle Vicia craca, u jednom uzorku pronaĊena je simbioza sa
kvrţiĉnim bakterijama (izolat RL10). Izgleda da se izolati bakterija rano pojavljuju na deponijama jalovine
gde uslovi nisu tako ekstremni kao na pepelu, ali da njihovo prisustvo nije do sada istraţivano. Na
deponijama jalovišta u Drmnu koje su u postupku rekultivacije za poljoprivrednu proizvodnju (mesto RDJ)
nadjena je simbioza izmedju kvrţiĉnih bakterija I lucerke (Medicago sativa) kao I spontano nikle Vicia
craca. Stare deponije jalovine izmeĊu površinskih kopova Kostolac i Klenovnik pre tri decenije su
rekultivisane šumskom i zeljastom vegetacijom. Na ovim lokacijama naĊena je simbioza Rhizobium sp.
(izolati sa leguminozama Medicagi sativa, Lotus corniculatus, Trifolum repens i T. pratense. Na ravnim
deposolima spoljnog odlagališta kopa Ćirikovac zapoĉela je i uspešno uraĊena rekultivacija za
poljoprivrednu proizvodnju pre 25 godina. Na korenovima leguminoza Medicago sativa, Lotus corniculatus,
Trifolum repens i T. pratense nadjena je simbioza sa kvrţiĉnim bakterijama (RL19-RL23). Uslovi za pojavu
292