Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
4.2.1. Reamplifikacija PCR<br />
Pri vzorcih pri katerih smo v prvem PCR pomnožili premalo količino DNA smo<br />
uporabili reamplifikacijo. To pomeni, da smo v PCR uporabili produkt prejšnjega<br />
PCR kot matrično DNA. V PCR smo dodali alikvot neprečiščenega PCR produkta<br />
5µl. Reamplifikacijo smo izvedli v vzorcih, ki se niso pomnožili v PCR z naslednjimi<br />
pogoji: temperatura naleganja 40º C, koncentracija MgCl 2 1,5 mM, koncentracija<br />
začetnih oligonukleotidov 0,5 µM, smo poskušali ponovno namnožiti v PCR, v<br />
katerem smo kot matrično DNA uporabili PCR produkt, ne pa izolirano DNA. Slika<br />
19 prikazuje reamplifikacijo vzorcev iz PCR reakcije (glej sliko 15). Za<br />
reamplifikacijo smo uporabili naslednje vzorce: 12/06/RH1, 12/06/RH2, 12/06/RH3,<br />
11/06/RH1, 11/06/RH2, 11/06/RH3, 11/06/RH4, 11/06/RH5, 11/06/RH6. Z<br />
reamplifikacijo smo uspeli v vseh vzorcih pomnožiti COI, vendar so se poleg DNA<br />
namnožili še krajši nespecifični produkti.<br />
Slika 19: Reamplifikacija COI s PCR v vzorcih velikega klobučnjaka iz Koprskega<br />
zaliva.<br />
Rezultat PCR reakcije vzorcev z oznakami (od leve proti desni): 12/06/RH1,<br />
12/06/RH2, 12/06/RH3, 11/06/RH1, 11/06/RH2, 11/06/RH3, 11/06/RH4, 11/06/RH5,<br />
11/06/RH6, velikostni standard 100bpDNA.<br />
Zaradi kratkoverižnih nespecifičnih produktov (Slika 19) je za nadaljno uporabo<br />
potrebno iz gela izolirati specifičen produkt. Tega v okviru diplomske naloge nismo<br />
opravili.<br />
41