Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici

OZNAKA
VZORCA
REDČITEV
MATRIČNE
DNA
KONCENTRACIJA
REDČENE DNA
(NG/ΜL)
KOLIČINA
MATRIČNE
DNA (µL)
KONCENTRACIJA
MATRIČNE DNA V
PCR (NG)
07/05/RH3 1:10 0 5 0 -
08/05/RH16 292 5 1460 -
08/05/RH B 1 5 5 -
08/05/RH H 4100 5 20500 -
08/05/RH N 970 5 4851 -
08/05/RH27 1:10 78 10 787 -
08/05/RH31 1:10 15 10 153 -
08/05/RH33 1:10 18 10 188 -
08/05/RH C 1:10 61 10 613 -
08/05/RH D 1:10 11 5 59 -
08/05/RH E 1:10 15 5 76 -
08/05/RH G 1:10 99 5 499 -
11/06/RH7 10 - -
11/06/RH1 29 10 297 -
11/06/RH2 54 10 544 -
12/06/RH1 148 10 1485 -
12/06/RH2 232 10 2326 -
12/06/RH3 193 10 1930 +
14/07/RH1 212 1 212 +
14/07/RH3 247 1 247 +
14/07/RH7 237 1 237 -
14/07/RH8 242 1 242 +
14/07/RH11 7 - +
14/07/RH12 7 - +
14/07/RH14 7 - +
14/07/RH15 10 - +
14/07/RH16 10 - -
Legenda
: + uspešno pomnožen COI,
- neuspešno pomnožen COI
USPEŠNOST
POMNOŽEVAN
JA COI
Rezultati pomnoževanja COI so prikazani na spodnjih slikah. Produkte
pomnoževanja smo nanesli na 1,8 % agarozni gel, ki smo ga pripravili, kot je
opisano v poglavju 3.4.1 in 3.4.2.
COI smo uspeli pomnožiti v vzorcih (glej sliko 10): 06/05/RH43, 06/05/RH46,
07/05/RH3, 08/05/RH16, 08/05/RH B, 08/05/RH H, 08/05/RH N. Jakost pomnoženih
fragmentov je bila različna, učinkovitost pomnoževanja v PCR je bila verjetno
odvisna od količine in kvalitete izolirane DNA. Vzorci 08/05/RH16, 08/05/RH B,
08/05/RH H, 08/05/RH N, 07/05/RH3 imajo na agaroznem gelu zelo močan signal,
zato lahko sklepamo na visoko koncentracijo pomnoženega produkta. V vsak vzorec
smo dodali 5µl matrične DNA.
COI v vzorcih 06/05/RH43, 06/05/RH46 smo pomnožili v PCR pri naslednjih pogojih:
temperaturi naleganja 40º C, koncentracija MgCl 2 je bila 1,5 mM ter koncentracija
obeh začetnih oligonukleotidov je znašala 0,5µM.
32