Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici

Priporočena količina tkiva za izolacijo s kitom DNeasy Blood & Tissue Kit ( QIAGEN)
je 25mg in se nanaša na vrsto tkiva. Vsa omenjena tkiva vsebujejo večje število
celic in zaradi tega več DNA. Klobučnjaki imajo v telesu meduze v glavnem
mezoglejo, ki pa vsebuje zelo majhno število celic. Prav tako imajo klobučnjaki
veliko vsebnost vode v telesu. Pri izolaciji smo morali zagotoviti zadosti tkiva, da
pridobimo zadovoljivo količino DNA za nadaljne manipulacije, kakor tudi paziti, da s
preveliko količino tkiva ne onemogočimo adsorbcije DNA na silikatno kolono.
4.1.3. Rezultati spektrofotometričnih meritev genomske DNA
Koncentracijo DNA smo ovrednotili na podlagi meritve absorbcije pri 260 nm in 280
nm. Vzorce smo redčili v razmerju 1 proti 100 v pufru 10 mM Tris (pH 8,0). Iz
vrednosti absorbcije pri 260 nm smo po opisani formuli izračunali koncentracijo
DNA. Koncentracijo DNA smo podali v ng v enem mikrolitru. Izmerjene
koncentracije so nizke. To smo nekako tudi pričakovali, saj je celotna meduza
zgrajena v glavnem iz mezogleje, ki ne vsebuje veliko celic. Količina DNA v vzorcih
je v razponu od najvišje vrednosti 4100ng/µl do 3,07 ng/µl. Izplen DNA iz roba
klobuka meduze je mnogo manjši v primerjavi z izplenom iz drugih tkiv bolj bogatih s
celicami, kadar uporabimo kit DNeasy Blood & Tissue Kit ( QIAGEN). Z istim kitom
lahko iz tkiv, ki so bogata s celicami, izoliramo do 40 µg DNA iz 25 mg repka
podgane ali do 30 µg DNA iz možgan. Izplen DNA iz plavutke ribe (pribl. 20 mg) z
istim kitom znaša 10 do 20 µg DNA. Majhna količina DNA pomeni tudi manj možnih
manipulacij, zato priporočamo zaradi majhnega izplena DNA iz roba klobuka, da se
pri vzorčenju odvzame več koščkov tkiva. Tako je kasneje možno izpeljati več
izolacij iz DNA istega osebka in pridobiti zadosti DNA za nadaljne delo.
Zgodi se, da se DNA ne raztopi, ampak ostane neraztopljena v topilu. Zato je tudi
možno, da vzamemo alikvot, v katerem ni veliko raztopljene DNA. Razlog, da se
DNA ne raztopi popolnoma v topilu je predvsem v nečistočah, ki so vezane na DNA
in so povezane z vrsto tkiva, iz katerega jo izoliramo ali pa na okolje, v katerem je
tkivo kot na primer izolacija DNA iz mikrobnih vzorcev sedimenta, vampa ali prsti
(Roe in sod., 1996).
29