Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici

DATUM VZORČENJA MESTO VZORČENJA OZNAKA VZORCA
01.02.2007 Koprski zaliv 14/07/RH8
01.02.2007 Koprski zaliv 14/07/RH9
01.02.2007 Koprski zaliv 14/07/RH10
4.1. Rezultati izolacije DNA iz tkiva velikega klobučnjaka
DNA smo izolirali iz roba klobuka meduze velikega klobučnjaka po navodilih
proizvajalca s kitom DNeasy Blood & Tissue Kit (QIAGEN). Kvaliteto in količino DNA
smo preverili na 1,2-dstotnem agaroznem gelu. Velikost izolirane DNA smo določili s
primerjavo z velikostnim standardom Hind III λ marker (Fermentas). S primerjavo
jakosti obarvanih fragmentov DNA smo približno določili njihovo koncentracijo.
Rezultati izolacije DNA so prikazani na slikah: slika 6, slika 7, slika 8 in slika 9 .
4.1.1. Izolacija DNA iz vzorcev nabranih v severnem Jadranskem morju
Slika 6 prikazuje rezultat izolacije DNA iz 9 vzorcev, ki so bili nabrani v Piranskem in
Koprskem zalivu (glej Tabelo 2) v obdobju od decembra 2006 do februarja 2007.
Izolacijo DNA smo opravili iz roba klobuka. Izolacija DNA (prikazana na sliki 6) je
bila uspešna v 8 primerih (11/06/RH3, 11/06/RH4, 11/06/RH5, 11/06/RH6,
11/06/RH2, 12/06/RH1, 12/06/RH2, 12/06/RH3). Na stezi, kjer je nanešen vzorec
11/06/RH1, ni vidna DNA, a smo s spektrofotometričnim merjenjem ugotovili, da je v
vzorcu vseeno DNA v zelo nizki koncentraciji 30ng/µl (Tabela 3). Agarozna
elektroforeza nam omogoča, da lahko ocenimo kakšne velikosti je izolirana DNA in
približno oceno koncentracije DNA v vzorcu. Na sliki vidimo, da smo uspeli izolirati
visoko molekularno DNA, katere velikost smo ocenili na 23 000 bp. Izolirana DNA je
tudi delno razgrajena, kar je videti kot razmaz na stezi
pod visoko molekularno DNA. Količina vzorca, ki smo jo nanesli v luknjico v gelu, je
5 µl. Količina izolirane DNA med vzorci je različna in je odvisna predvsem od
količine tkiva, ki je bila uporabljena za izolacijo.
23