Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
3. EKSPERIMENTALNI DEL<br />
Eksperimentalni del naloge smo razdelili na več delov: vzorčenje na terenu,<br />
postopek izolacije DNA, pomnoževanje COI s PCR, agarozna elektroforeza in<br />
določanje nukleotidnega zaporedja ter filogeografska obdelava podatkov.<br />
3.1. Označevanje vzorcev<br />
Vzorce smo označili tako, da je iz oznake razvidno leto in mesec vzorčenja, vrsta<br />
klobučnjaka (RH- <strong>Rhizostoma</strong> <strong>pulmo</strong>) ter zaporedna številka osebka.<br />
.<br />
Primer: 06/05/RH43<br />
06- leto vzorčenja<br />
05- mesec vzorčenja<br />
RH- <strong>Rhizostoma</strong> <strong>pulmo</strong><br />
43- zaporedna številka osebka<br />
3.2. Recepti za pripravo osnovnih raztopin in njihove koncentracije<br />
Raztopina za shranjevanje tkiv (20% DMSO nasičen z NaCl)<br />
DMSO 20 ml<br />
EDTA 50 ml 0,5M EDTA, pH 8,0<br />
NaCl 5,06g<br />
H 2 O do volumna 100 ml<br />
10 mM TRIS-Cl, pH 8,0l<br />
121, 1 g TRIS baze<br />
Dodamo dvakrat destilirano vodo do 800 ml in umerimo pH s koncentrirano HCl, ter<br />
dodamo destilirano vodo do 1000 ml<br />
3.2.1. Puferske raztopine<br />
> Shranjevalni pufer za Taq DNA-polimerazo (Fermentas)<br />
• 20 mM Tris-HCl (pH 8,0)<br />
• 0,1 mM EDTA<br />
• 100 mM KCl<br />
14
Change language