Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici

More documents

Recommendations

Info

Slika 4: Shematski prikaz verižne reakcije s polimerazo (Vir: K. Drobnič.Ugotavljanje identitete posameznika z uporabo genetskih informacij, metode verižne reakcije s polimerazo in računalniško podprte tehnologije). 2.8. Postopek ugotavljanja nukleotidnih zaporedij (sekvenciranje) Za pripravo sekvenčne reakcije uporabljamo metodo asimetrični PCR. Z njo pomnožimo tarčno DNA in produkt takega pomnoževanja so enoverižne DNA, ki jih nato ločimo na visokoločljivostnih gelih. V PCR uporabimo le en začetni oligonukleotid, s čimer dosežemo, da se pomnožuje le ena veriga. Nukleotidi, ki jih damo v PCR so mešanica nukleotidov, ki so fosforilirani in nefosforilirani in le ti so označeni z fluorescentnim barvilom. Pomnoževanje se ustavi tam, kjer Taq polimeraza doda nefosforiliran označen nukleotid. Tako nastanejo različno dolge verige, ki se med seboj ločijo za en nukleotid. Nastale verige DNA ločimo na visokoločljivem gelu, kjer lahko ločimo verige DNA na en nukleotid natačno. Poznamo več tehnik sekvenciranja s PCR, poleg omenjene, kjer v reakcijo PCR damo nefosforilirane nukleotide s fluorokromi ali je s fluorokromom označen začetni nukleotid. 2.9. Agarozna elektroforeza Agarozna elektroforeza je metoda, s katero specifično ločujemo nukleinske kisline na podlagi velikosti, naboja in drugih lastnosti (Bodlaj, 2001). Pri tem vzorec 12
nanesemo na gel, ki je pripravljen iz agaroze v ustrezni koncentraciji v elektroforetskem pufru. Agarozni gel igra vlogo »molekularnega sita«, skozi katerega se prebijajo makromolekule. Nanešen vzorec izpostavimo električnemu polju določene napetosti in jakosti električnega toka. Nukleinske kisline zaradi različne molekulske mase ter oblike potujejo po gelu z različno hitrostjo. Nukleinske kisline obarvamo z fluorokromi, ki se vežejo na verigo ali med verigi (v primeru dvojnovijačne DNA). Pod svetlobo kratke valovne dolžine postanejo nukleinske kisline vidne zaradi flourescence vgrajenih barvil. 13
Page 1: UNIVERZA V NOVI GORICI FAKULTETA ZA
Page 5 and 6: POVZETEK Meduze velikega klobučnja
Page 7 and 8: OKRAJŠAVE IN SIMBOLI A............
Page 9 and 10: KAZALO VSEBINE ZAHVALA.............
Page 11 and 12: KAZALO SLIK Slika 1: Osnovna zgradb
Page 13 and 14: 1. UVOD Klobučnjaki (Scyphozoa) so
Page 15 and 16: 2. TEORETIČNE OSNOVE 2.1. Ožigalk
Page 17 and 18: spremembe v daljšem časovnem obdo
Page 19 and 20: sod., 2005). Na osnovi primerjalne
Page 21 and 22: 2.5. Uporaba mitohondrijske DNA v f
Page 23: starejšimi morfološkimi študijam
Page 27 and 28: 10-krat koncentrirani PCR-pufer (Fe
Page 29 and 30: Black Sea Adriatic Sea Mediterranea
Page 31 and 32: smo si gel ogledali na transilumina
Page 33 and 34: GenBank. Za iskanje podobnih nukleo
Page 35 and 36: DATUM VZORČENJA MESTO VZORČENJA O
Page 37 and 38: Slika 7: DNA izolacija iz velikega
Page 39 and 40: Slika 9: DNA izolacija iz velikega
Page 41 and 42: Priporočena količina tkiva za izo
Page 43 and 44: Najprej smo pripravili ustrezne red
Page 45 and 46: Slika 11: Pomnoževanje COI s PCR v
Page 49 and 50: COI smo uspešno pomnožili (glej s
Page 53 and 54: 4.2.1. Reamplifikacija PCR Pri vzor
Page 55 and 56: COI smo uspešno pomnožili (glej s
Page 57 and 58: 11 98 RH805 RH811 RH807 RH808 RH703
Page 59 and 60: 5. ZAKLJUČKI Od leta 2003 so v Tr
Page 61 and 62: Dawson M.N., 2003. Macro-morphologi
Page 63 and 64: Lynam C.P., Gibbons M.J., Axelsen B
Page 65: PRILOGE 53
Page 68 and 69: tttaaacttncagggtgaccaaaaaatcaaaataa
Page 71: Priloga B: Poravnava nukleotidnih z
Page 75 and 76:
Priloga D: Podobnost med nukleotidn
show all

Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?