Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Rhizostoma pulmo - Univerza v Novi Gorici
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Slika 4: Shematski prikaz verižne reakcije s polimerazo<br />
(Vir: K. Drobnič.Ugotavljanje identitete posameznika z uporabo genetskih informacij, metode verižne reakcije s<br />
polimerazo in računalniško podprte tehnologije).<br />
2.8. Postopek ugotavljanja nukleotidnih zaporedij (sekvenciranje)<br />
Za pripravo sekvenčne reakcije uporabljamo metodo asimetrični PCR. Z njo<br />
pomnožimo tarčno DNA in produkt takega pomnoževanja so enoverižne DNA, ki jih<br />
nato ločimo na visokoločljivostnih gelih. V PCR uporabimo le en začetni<br />
oligonukleotid, s čimer dosežemo, da se pomnožuje le ena veriga. Nukleotidi, ki jih<br />
damo v PCR so mešanica nukleotidov, ki so fosforilirani in nefosforilirani in le ti so<br />
označeni z fluorescentnim barvilom. Pomnoževanje se ustavi tam, kjer Taq<br />
polimeraza doda nefosforiliran označen nukleotid. Tako nastanejo različno dolge<br />
verige, ki se med seboj ločijo za en nukleotid. Nastale verige DNA ločimo na<br />
visokoločljivem gelu, kjer lahko ločimo verige DNA na en nukleotid natačno.<br />
Poznamo več tehnik sekvenciranja s PCR, poleg omenjene, kjer v reakcijo PCR<br />
damo nefosforilirane nukleotide s fluorokromi ali je s fluorokromom označen začetni<br />
nukleotid.<br />
2.9. Agarozna elektroforeza<br />
Agarozna elektroforeza je metoda, s katero specifično ločujemo nukleinske kisline<br />
na podlagi velikosti, naboja in drugih lastnosti (Bodlaj, 2001). Pri tem vzorec<br />
12
Change language