reaktsioonitingimuste optimeerimine soovitud produktide sünteesiks

Joonis 9. FOS-ide koguse ja spektri sõltuvus reaktsiooniajast ja sahharoosi
kontsentratsioonist. Kahel sahharoosi kontsentratsioonil (300 mM ja 1200 mM) erinevateks
aegadeks (1 h, 3 h, 6 h, 20 h) sünteesitud fruktooligosahhariidide (DP 3, DP 4, DP 5, DP 6,
DP 7) koguhulk ja spekter. Proovid analüüsiti HPLC-ga (lisa 1).
2.3.4. Levaani sünteesi kineetilised parameetrid
Et uurida sahharoosi kontsentratsiooni mõju levaani tekkele, analüüsisime Lsc3 valgul levaani
sünteesi kineetilisi parameetreid (K m , V max ). His-märgiseta Lsc3 valgu K m sahharoosi
lõhustamiseks on 20.6 2.1 mM ja His-märgisega valgul 18.5 2.5 mM (Visnapuu et al.,
2008; Visnapuu et al., 2011). Vastavad tulemused on mõõdetud sahharoosist glükoosi
eraldumise järgi. Käesolevas töös soovisime määrata His-märgisega Lsc3 valgu K m ja V max
sahharoosile, mõõtes levaani teket. Selleks mõõtsime levaani tekke algkiirusi erinevatel
sahharoosi kontsentratsioonidel (40-400 mM). Ensüümi kogus reaktsioonisegus oli 7.2 g/ml
ja temperatuur 30ºC. Töötlesime andmeid Michaelis-Menten’i võrrandi alusel ja leidsime, et
K m sahharoosile levaani tekkeks oli 24.7 5.1 mM (vt. joonis 10), mis on veidi kõrgem kui
vastav väärtus sahharoosi lõhustamise reaktsioonil. Lsc3 valgu levaani sünteesi
maksimaalkiirus oli 32.2 1.2 mg levaani mg valgu kohta minutis.
27