Sborník příspěvků z workshopu MICROMYCO 2008 - Ústav půdní ...

Byla hodnocena aktivita následujících enzymů: amyláza, pektindepolymeráza (PP),
pektintranselimináza (PE), celulázy a ureáza.
V případě aktivita amylázy byl jako standard použit kmen Trametes versicolor ze
sbírky CCBAS. Jak kmeny C. acutatum, tak Trametes versicolor byly pěstovány na Czapek-
Doxově tekutém mediu při 22 ºC jako třepané kultury, přičemž zdrojem organického uhlíku
byl škrob. Měření bylo provedeno po 8 dnech růstu jednotlivých izolátů a aktivita enzymu
byla vyjádřena jako µg glukózy ve filtrátu /µg proteinů po inkubaci 30 min. při 24 ºC.
Aktivita enzymu byla stanovena spektrofotometricky při 650 nm.
Pro stanovení aktivity celuláz byly kmeny C. acutatum pěstovány na tekutém Czapek Dox
mediu, zdrojem organického uhlíku byla buď krystalická celulóza (Avicel) nebo
karboxymetylcelulóza (CMC). Aktivita byla stanovována v supernatantu spektrofotometricky
při 650 nm. Měření bylo provedeno po 8 dnech růstu jednotlivých izolátů a aktivita enzymu
byla vyjádřena jako µg glukozy ve filtrátu /µg proteinů po inkubaci 30 min. při 24 ºC. Jako
standard na byl použit kmen Trametes versicolor ze sbírky CCBAS.
Pro zjištění aktivita ureázy byly kmeny C. acutatum pěstován na tekutém Czapek-Doxově
mediu, kde sacharóza byla nahrazena močovinou. Aktivita ureázy byla stanovována
v supernatantu kolorimetricky při 540 nm. Jako standardní producent ureázy pro porovnání
byl použit kmen druhu Cladosporium herbarum.
Aktivita PP a PE byla sledována podle metodiky UNTERTAINER et MALLOCH (1999) a to
na agarových plotnách na mediu dle HANKIN et AAGNOSTAKIS (1975). Substrátem byl pektin
a pro stanovení aktivity pektindepolymerázy bylo medium adjustováno na pH 5, pro stanovení
aktivity pektintranseliminázy bylo médium adjustováno na pH 7. Jako standard na byl použit
kmen Trametes versicolor ze sbírky CCBAS. Kmeny C. acutatum i standard byly pěstovány
v termostatu při 22ºC. Pro hodnocení bylo použito 6 opakování u každé varianty. Aktivita
enzymu byla vyjádřena v mm vytvořených průsvitných zón po inkubaci 1 hod při 22 ºC, pro
vyvolání vytvořených zón použit 1% vodný roztok HDTAB (hexadecyltrimethylamonium
bromid).
Výsledky a diskuse
Konidie pozorovaných kmenů C. acutatum byly válcovité, (11,3-) 12,76-18,45 (-23) µm
dlouhé, (3,6-) 3,92-5,14 (-5,5) µm široké, poměr jejich šířky a délky byl (2,47-) 2,65-4,19 (-
4,63) µm. Mezi změřenými konidiemi u jednotlivých kmenů bylo 0-8 % konidií s oběmi
oblými konci, 16-48% konidií s jedním oblým a jedním špičatým koncem a 44-78% konidií s
oběmi špičatými konci.
Tab. 1. Srovnání velikosti kolonií C. acutatum na vybraných agarových médiích (uvedeno v mm).
Médium/ dny 5 7 10 14
MA2F 34,55 49,03 61,61 74,94
PDAO 37,34 52,08 62,85 73,41
BDA 42,99 60,13 73,27 81,64
OA 37,36 51,81 67,39 82,53
PCA 31,02 44,75 56,39 73,45
V8 42,43 57,54 68,64 75,31
MA01+LUP 37,83 51,59 62,72 75,08
65