bak práce - komplet - DSpace UTB

UTB ve Zlíně, Fakulta technologická 35
Složení dekarboxylačního média
Pepton
Yeast extrakt
Bromkresolpurpur 0,2% v 50% alkoholu
Příslušná L-aminokyselina
Destilovaná voda
0,5 g
0,3 g
1 ml
0,75 g
150 ml
pH 5 – 5,3
Příprava média: Bylo naváženo příslušné množství jednotlivých složek půdy a vše bylo
rozpuštěno ve 150 ml destilované vody. pH roztoku bylo upraveno na 5 – 5,3; pH indikátor
bromkresolpurpur byl přidán až nakonec. Následně bylo 5,0 ml média autoklávováno
v uzavřených zkumavkách (121 °C 15 min).
4.4.2 Zjišťování produkce biogenních aminů v dekarboxylačním médiu
Produkce biogenních aminu byla sledována v mikrotitračních destičkách. Do každé
jamky mikrotitrační destičky bylo napipetováno 150 µl dekarboxylačního média obohaceného
o příslušnou aminokyselinu a 5 µl 24 hodinové suspenze daného mikroorganizmu.
Poté byly všechny jamky zakápnuty 1 kapkou parafínového oleje pro vytvoření anaerobního
prostředí. Destičky byly vloženy do sáčku a kultivovány při teplotě 30 °C po dobu 48
hodin. Pozitivní reakce se projevovala změnou barvy média z oranžovohnědé na fialovou.
4.5 Stanovení biogenních aminů iontově-výměnnou chromatografií
Produkce 8 biogenních aminů (histaminu, fenyletylaminu, tyraminu, putrescinu, kadaverinu,
agmatinu, spermidinu a sperminu) byla zjišťována pomocí iontově-výměnné
chromatografie (Automatický analyzátor aminokyselin AAA400, Ingos Praha, Česká republika).
Stanovená byla provedeny podle prací Hlobilové [44] a Buňkové et al (2010) [1].