Optické mikroskopy

1.5. Zvětšení mikroskopu
Zvětšení obrazu mikroskopem je dáno zvětšením okulárů a zvětšením objektivu. Okuláry
mikroskopu během pokusu neobměňujeme, nejčastěji používáme okuláry zvětšující 20x -
25x.. Pro zobrazení buněk a hrotu elektrody si však s jedním objektivem nevystačíme a
musíme použít postupně aspoň dva objektivy. Pro první pohled na buněčný preparát a
nastavení elektrod používáme objektiv s menším zvětšením, nejčastěji objektiv zvětšující 10x.
Pak musíme nad vybraným místem nastavit objektivem o větším zvětšení, obyčejně
používáme objektiv 40x nebo 60x, pod kterým již vidíme jednotlivé buňky a provádíme
měření. Maximální užitečné zvětšení mikroskopu je však určeno i rozlišovací schopností
objektivu. Za podmínek, kdy je minimální vzdálenost dvou rozlišitelných bodů srovnatelná
s rozlišovací schopností lidského oka, obraz se nezlepší ani při použití silně zvětšujících
okulárů, kdy dostaneme jen rozměrnější obraz bez nových detailů.
1.6.Numerická apertura objetivu
Odhad minimální vzdáleností dvou rozlišitelných bodů (Ymin) je dán vztahem::
Ymin = konst.(λ/n.sinυ), kde λ je vlnová délka světla ve vákuu, n je index lomu prostředí před
objektivem, a υ je polovina vrcholového úhlu kužele paprsků, které mohou vstoupit do
objektivu. Veličina (n.sinυ) je tzv. numerická apertura objektivu, NA. U nejkvalitnějších
imerzních objektivů bývá NA ~ 1.3 až 1.4. Pro nejkratší vlnové délky viditelného záření (λ≅
400 nm) se pak rozlišovací schopnost těchto objektivů blíží hodnotě 0,17 µm.
31