Optické mikroskopy

Odpružené objektivy. Výstupní čočka objektivů s velkým zvětšením je při zaostření na preparát velmi
blízko krycímu sklu a může dojít k mechanickému dotyku. Proto jsou objektivy s velkým zvětšením
vybaveny pružným uložením vstupní čočky, která se při dotyku krycího skla částečně zasune do
pouzdra, čímž je objektiv chráněn před poškozením. Takovým objektivům se říká “odpružené”.
Objektivy pro speciální pracovní postupy. Jak jsme se již zmínili, některé metody vyžadují
objektivy, upravené pro tyto metody. Sem patří fázový kontrast, Hoffmanův kontrast, případně
Nomarského diferenciální interferenční kontrast (DIC). Objektivy pro DIC musí být doplněny
hranoly v revolverovém nosiči objektivů a v kondenzoru. Dříve bylo pro metodu DIC nutné používat
speciální objektivy, avšak NIKON CFI Plan Fluor DLL je univerzální objektiv, který lze použít k běžným
postupům i pro tuto náročnou metodu.
Metody různých fázových kontrastů nacházejí svoje uplatnění při pozorování objektů, které nelze
barvit, jako např. při fertilizaci in vitro (metoda
tzv. asistované reprodukce, umělé oplodňování).
Pozorování v polarizovaném světle. Mikroskop může též sloužit pro pozorování v polarizovaném
světle. Tato metoda – pokud se používá pro kvantitativní stanovení polarizačního úhlu – vyžaduje
speciální okuláry a objektivy, které nemají vlastní polarizační účinky (bez vnitřního pnutí). Mikroskop
musí být doplněn o polarizátor a analyzátor, může být vybaven kruhovým otočným stolkem se
stupnicí. Kvalitativní polarizace v procházejícím světle se provádí s běžnými objektivy a s jednoduchou
výbavou. K polarizačním mikroskopům se užívají kruhové stolky.
Osvětlovací souprava mikroskopů střední a vyšší kvality je založena na principu Köhlerova
osvětlení. Úplné Köhlerovo osvětlení se skládá ze zdroje světla, kolektorové
čočky a irisové clony (je
to dříve zmíněná polní clona). Pro naše účely stačí nastavit do optimální polohy clonu osvětlovacího
systému, clonu kondenzoru (“aperturní” clona) a polohu kondenzoru. Jednoduché stativy mikroskopů
mohou být vybaveny jen částečným Köhlerovým osvětlení, většinou nemají polní clonu a kolektorovou
čočku.
1. Umístíme preparát a zaostříme s objektivem 1:20.
2. Uzavřeme clonu svítícího pole (polní clona).
3. Kondenzor zvyšujeme nebo snižujeme tak dlouho, až je obraz svítícího pole ostře
ohraničený. To nastává většinou v případě, když
je kondenzor značně vysoko.
4. Obraz svítícího pole posuneme (centrovacími šrouby kondenzoru) do středu zorného
pole
5. Clonu svítícího pole (polní clonu) otevřeme tak, až se okraje jejího obrazu právě shodují s
okrajem zorného pole.
6. Vyjmeme z tubusu okulár a pozorujeme clonu kondenzoru (aperturní clonu), kterou
uzavřeme tak, aby zůstalo
osvětleno ještě 2/3 průměru výstupní clony objektivu.
Nemá-li mikroskop polní clonu, nastavujeme jen polohu kondenzoru a aperturní clonu. Kondenzor
může být pevně uložen při výrobě, pak toto nastavení odpadá.
Barevné a neutrální filtry. Součástí osvětlovací soustavy jsou filtry, které se vkládají do dráhy světla.
Mohou se pokládat na výstupní čočku osvětlovací soustavy ve stativu
mikroskopu, nasazovat na
kondenzor nebo jsou uloženy ve stativu a vkládány pomocnými mechanizmy (páčkou apod.).
Filtry můžeme rozdělit na pestré (barevné) a nepestré (neutrálně šedé). Barevné filtry mění
chromatičnost pozorovaného obrazu. Běžný je modrý filtr, používaný při pozorování i při fotografické
dokumentaci (označený běžně jako filtr pro "denní světlo") a zelený interferenční filtr (označovaný
zkratkou "GIF"), velmi prospěšný při pozorování ve fázovém kontrastu. Nepestré - neutrálně šedé
-
filtry slouží k zeslabení intenzity osvětlení (podobně jako "polní" clona), přitom se však nemění
chromatičnost. NIKON označuje tyto filtry počátečními písmeny ND ("neutral density").
24