Skripta - Departman za Biologiju i Ekologiju - Univerzitet u Novom ...

D.1.3. Transgeni miševi i »knock-out« ciljnih gena
Dve veoma važne metode za ispitivanje funkcionalnih efekata specifinih genskih produkata in
vivo su: stvaranje transgenih miševa koji overekspresuju pojedine gene u odreenom tkivu i
stvaranje »gene knockout« miševa u ijim genomima se prekidi ili mutacije pojedinanih gena
koriste za ustanovljavanje obligatorne funkcije tih gena in vivo. Obe metode imaju široku primenu
u izuavanju velikog broja bioloških fenomena, meu kojima su i maturacija, aktivacija i
tolerancija limfocita.
»Gene knockout« tehnika bazirana je na fenomenu homologih rekombinacija. Ubacivanjem
stranog gena u eliju može doi do njegove sluajne inkorporacije u elijski genom. Ukoliko strani
gen sadrži sekvence koje su homologe genima domaina prvenstveno e se rekombinovati i
zamenjivati sa datim sekvencama. Fragment homologe DNK koji treba da se ubaci u eliju (Slika
D.7A.), prethodno se smešta u vektor koji sadrži gen za rezistenciju na neomicin (neo) i gen za
tiamidin kinazu (tk). Ovaj vektor je tako konstruisan da se pri homologim rekombinacijama neo
gen uvek inkorporira u hromozomalnu DNK, dok se tk gen gubi.
Slika D.7A. Formiranje »gene knockout« ciljnih gena
ES-Embrionalne stem elije; neo-gen rezistencije na neomicin; tk-gen za tiamidin kinazu.
224