Skripta - Departman za Biologiju i Ekologiju - Univerzitet u Novom ...

D.1.1.4. Odredjivanje/merenje interakcije antigen-antitelo
U veini situacija, veoma je važno poznavanje afiniteta antitela za odgovarajui antigen, i za male
antigene, kao što su hapteni, može se meriti direktno, tzv. ekvilibrijum dijaliza metodom (Slika
D.5.).
Slika D.5. Analiza Ag-Ab vezivanja ekvilibrijum dijaliza metodom.
U prisustvu antitela (B) koliina antigena unutar dijaliza membrane je vea, u odnosu na odsustvo antitela (A). Razlika je posledica
vezivanja antitela za antigen (samo slobodan antigen može da difunduje kroz membranu), što se koristi za merenje afiniteta antitela za
antigen. Ova metoda se može primenjivati samo u sluajevima kada su antigeni male molekule, sposobne da prolaze kroz dijaliza
membranu koja je semipermeabilna (Semipermeabilna u ovom kontekstu podrazumeva da kroz svoje pore propušta male molekule,
kao što su antigeni, dok antitela, kao vee molekule, ne prolaze)
D.1.2. Analiza genske strukture i ekspresije
U narednom tekstu se daje kratak opis metoda molekularne genetike koje se naješe koriste u
imunologiji.
D.1.2.1. »Southern Blot« hibridizacija
Pod pojmom Southern blotting podrazumeva se prenos DNK fragmenta sa gela na postojani nosa
i predstavlja jedan deo eksperimentalnog procesa DNK-DNK hibridizacije u in vitro uslovima.
Southern blot se koristi za detekciju fragmenta DNK u uzorku. DNK fragment koji se detektuje
može biti jedan jedini gen ili može biti deo veeg molekula DNK, kao što je na primer virusni
genom. Osnova metode je hibridizacija koja predstavlja proces formiranja dvolananog DNK
molekula od jednolanane probe i jednolanane ciljne DNK. Reakcija hibridizacije je strogo
221