Skripta - Departman za Biologiju i Ekologiju - Univerzitet u Novom ...
Skripta - Departman za Biologiju i Ekologiju - Univerzitet u Novom ...
Skripta - Departman za Biologiju i Ekologiju - Univerzitet u Novom ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
D.1.1.3. Markiranje i detekcija antigena u elijama i tkivima<br />
Za identifikaciju i separaciju pojedinih elijskih tipova iz tkivne ili elijske suspenzije veoma esto<br />
se koriste Ab specifina <strong>za</strong> Ag koji se ekspresuju na/u tim elijama. Za metode bazirane na ovom<br />
principu mogu se upotrebiti Ab koja su radioaktivno obeležena, ve<strong>za</strong>na <strong>za</strong> enzim ili fluorescentno<br />
obeležena.<br />
Imunofluorescencija je metoda kojom se utvruje prisustvo, lokali<strong>za</strong>cija i koliina<br />
specifinog antigena u nekom tkivu ili eliji na osnovi fluorescencije do koje dolazi kada željeni<br />
antigen stupi u reakciju sa specifinim antitelom obeleženim fluorescentnom bojom. Vizuali<strong>za</strong>cija<br />
se vrši fluorescentnim mikroskopom koji pomou svetlosti ekscitira fluorescentnu boju, koja <strong>za</strong><br />
uzvrat emituje svetlost, ali neke druge talasne dužine. Ovom metodom se mogu ispitivati sve<br />
elijske komponente <strong>za</strong> koje postoje antitela. Ispituju se enzimi, strukturni proteini, prisustvo<br />
virusa.<br />
Imunohistohemija kombinuje anatomske, imunološke i biohemijske tehnike <strong>za</strong><br />
identifikaciju specifinih tkivnih komponenti na osnovu reakcije antigen/antitelo pri emu je<br />
antitelo obeleženo vidljivim markerom. Najpopularnij imunohistohemijske metode su one kod<br />
kojih je enzim ve<strong>za</strong>n <strong>za</strong> Ab ili gde je Ab fluorescentno obeleženo. Protein ije se prisustvo želi<br />
ispitati predstavlja antigen, <strong>za</strong> koji postoji odreeno antitelo koje se može obeležiti enzimom. Posle<br />
reakcije Ag-Ab dolazi do aktivacije enzima koji reaguje sa supstratom i nastaje intenzivno obojen<br />
proizvod reakcije koji se može analizirati obinim svetlosnim mikroskopom.<br />
Protona citometrija (Flow cytometry) je metod <strong>za</strong> kvantifikaciju razliitih komponenti i<br />
strukturnih karakteristika elija. Koristi se <strong>za</strong> odreivanje fizikih i hemijskih karakteristika<br />
(veliina, oblik, granulacija elija), metabolikih i fizioloških karakteristika (aktivnost enzima,<br />
sinte<strong>za</strong> DNA). U te svrhe se koristi protoni citometar, iji su osnovni elementi: izvor svetlosti -<br />
laser, sabirna optika, elektronika i kompjuter koji prevodi signale u podatke. elije koje se<br />
analiziraju mogu biti žive ili fiksirane, ali je bitno da budu u monodisperziji, <strong>za</strong>to što se<br />
analiziraju jedna po jedna. elije u suspenziji kontinuirano protiu (flow) kroz laserski zrak i<br />
svaka od njih odbija odreenu koliinu laserskog zraka, a takoe i emituje fluorescentnu svetlost<br />
nastalu ekscitacijom pomou lasera (ako je fluorescentno obeležena). Citometar simultano meri<br />
nekoliko parametara: intenzitet svetlosti razliitih uglova odbijanja i intenzitet fluorescencije<br />
razliitih talasnuih dužina. Odbijanje pod malim uglom (0.5° -5°) govori o veliini elije, a veliki<br />
ugao odbijanja 15° -150° o granulaciji. Odbijeni i emitovani zraci dolaze do elektronskog detektora<br />
koji je pove<strong>za</strong>n sa kompjuterom.<br />
219
Change language