Skripta - Departman za Biologiju i Ekologiju - Univerzitet u Novom ...

hromatografija; dok je Western blotting tehnika koja se naješe koristi za utvrivanje prisustva i
veliine proteina u biološkim uzorcima.
Imunoprecipitacija i afinitetna hromatografija (Slika D.2., A i B) predstavljaju metode koje se
koriste za izolaciju odgovarajueg Ag (proteina) iz smeše, pomou Ab specifinih za dati Ag
(protein).
Slika D.2. Izolacija antigena imunoprecipitacijom (A) i afinitetnom hromatografijom (B).
A - IMUNOPRECIPITACIJA Odreeni antigen se može izdvojiti iz mešavine razliitih antigena , koji se nalaze u serumu ili nekom drugom rastvoru. Antigen se
može purifikovati (izdvojiti) dodavanjem u rastvor antitela specifinih za taj antigen, koja su vezana za nerastvorna zrnca (beads). Antigeni koji se nisu vezali se
isperu, a željeni Ag odvaja se od antitela promenom pH ili neke druge osobine eluenta koje time smanjuju afinitet Ag za vezivanje. Imunoprecipitacija može
omoguiti purifikaciju, kvantifikaciju ili identifikaciju odreenih Ag. Antigeni purifikovani imunoprecipitacijom se naješe analiziraju SDS-PAGE elektroforezom.
B - AFINITETNA HROMATOGRAFIJA Bazira se na istim principima kao i imunoprecipitacija, s tom razlikom što su antitela fiksirana za nerastvorni matriks
ili gel, obino na koloni. Ova metoda se naješe koristi za izolaciju rastvorljivih antigena ili za izolaciju antitela specifinih za antigene koji su imobilisani.
217