I N F O R M A C J A O P R O D U K C I E - One Lambda

PROCEDURA
A. Dostarczone materiały
1. Siatka rozmieszczeń na płytce do typowania
2. Arkusze wzoru reakcji
3. Arkusze robocze, które identyfikują specyficzne cechy każdego odczynnika do typowania
4. Dopełniacz gotowy do użycia, składający się z nierozcieńczonej surowicy króliczej zsumowanej z dużej ilości, conajmniej 15
królików. Dostarczony dopełniacz nie może być rozcieńczony.
5. Wydrukowane etykiety na płytki
B. Materiały wymagane, ale nie dostarczone
1. Mikrostrzykawki
2. Insta-Seal (OLI Nr kat. TIS250U) i wazelina (Vaseline)
3. Odczynniki do barwienia i utrwalania:
a. Do testów na wykluczenie barwnika: eozyna Y (zasada sodowa) i formaldehyd lub Stain-Fix (OLI Nr kat. SF-500)
b. Do testów fluorescencyjnych: FluoroQuench AO/EB (OLI Nr Kat. FQAE-500) lub FluoroQuench EB (OLI Nr Kat.
FQEB-500) lub dodaj 1 ml roztworu zapasowego EB do 9 ml hemoglobiny lub 1% atrament (patrz poniższe
Materiały Nr 4 - 7 ).
4. Hemoglobin Quench
a. Liofilizowana wołowa
• Rozpuść 10 g hemoglobiny w 100 ml 5% roztworu EDTA PBS. Dodaj 1 ml 1% roztworu azydku sodu.
• Wiruj przez 45 minut z prędkością 1000 g. Przechowuj supernatant w temperaturze -20° C.
b. Z czerwonych ciałek krwi
• Roztwór zapasowy: Przemyj 3 razy roztworem soli zapakowane czerwone ciałka krwi. Przygotuj 70% hematokryt,
zamróź i rozmróź. Wiruj na ultrawirówce przez 45 minut, z prędkością 20,000 g. Dializuj przez 3 dni roztworem soli
fizjologicznej.
• Roztwór roboczy: Dodaj 10 ml 5% roztworu EDTA PBS. Dodaj 1 ml 1% roztworu ayzdku sodu do 89 ml
hemoglobiny. Przechowuj w temperaturze -20° C.
5. 1% Ink Working Quench
a. Rozpuść 1 gM albumenu surowicy krowiej (BSA) w 10 ml 5% roztworu EDTA PBS.
b. Do 9,8 ml roztworu BSA/5% EDTA/PBS dodaj:
• 100 µl 1% roztworu azydku sodu
• 100 µl Higgins Black Calligraphy Ink (e.g. czarnego tuszu kaligraficznego Higginsa)
6. 5% roztwór EDTA (dwusodowy) PBS
a. Rozpuść 5 gM roztworu EDTA w 90 ml PBS.
b. Przy użyciu 10M NaOH doprowadź do pH 7,2
c. Przy użyciu PBS doprowadź końcową objętość roztworu do 100 ml.
7. Bromek etydyny (EB) – roztwór zapasowy: Rozpuść 50 mg w 1 ml wody destylowanej. Dodaj 49 ml PBS. Ogrzewaj w łaźni
wodnej w temperaturze 56° C przez 30 minutes. Przechowuj w temperaturze -20° C.
8. Dwuoktan karboksyfluoresceiny (CFDA)
a. Roztwór zapasowy: W szklanej probówce rozpuść 10 mg CFDA w 1 ml acetonu . Przechowuj w temperaturze -20°C w
probówkach Beckmana.
b. Roztwór roboczy: Użyj jednego z podanych poniżej:
• Przygotowany w PBS o pH 7,2: Dodaj 30 µl roztworu zapasowego CFDA do 5 ml PBS (pH 7,2). Przechowuj w
temperaturze 2 - 5° C przez czas nie dłuższy niż 1 tydzień.
• Przygotowany w PBS o pH 5,5: Dodaj 30 µl roztworu zapasowego CFDA do 5 ml PBS (pH 5,5). Przechowuj w
temperaturze 2 - 5° C przez czas nie dłuższy niż 1 tydzień.
9. Ciężki olej mineralny (OLI Nr Kat. MO)
10. Jednostronna ostrze do usuwania zatyczek probówek do mikrowirówki.
11. 60- lub 72-studzienkowe płytki mikrotestujące
C. Procedura krok-po-kroku
Patrz poniższe “Wskazówki do użycia”.
Wskazówki użycia
Uwagi:
1. Dla wielu płytek testowych, odnieś się do arkusza roboczego po pozycje startowe próbek.
2. Dla metod izolacji limfocytów, odnieś się do Instrukcji procedur laboratoryjnych (ASHI
Laboratory Procedure Manual 5 ) , informacji o produkcie firmy One Lambda
FluoroBeads® lub metod izolacji limfocytów LymphoKwik®.
A. Przygotowanie do oznaczenia lub nakładania 100 µl surowicy na mikropłytki
1. Oznacz liczbę płytek (lub mikropłytek testujących) do użycia.
2. Umieść wydrukowane etykiety, które znajdują się w zestawie zawierającym 100 µl surowicy.
Korekta 0B: June 2004 Strona 2 z 5
SERA_SETS_PI_PL.doc