Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...

a 3B) v headspace bunkách CALU-1 v porovnaní len s headspace prostredia. Tieto zlúeniny sú tie, ktoré boli detegované vo
všetkých sledovaných vzorkách rakovinových buniek, rovnako ako v prostredí. Ostatných 44 (= 60-16) identifikovaných
zlúenín sa podrobne nespomína, pretože sa objavili "nepravidelne", t.j. nie trvalo zvýšené alebo znížené s ohadom len na
prostredie. Jedinou výnimkou je 2-metyl-2-butenal, ktorý bol vždy nájdený > LOD v médiu bunkovej kultúry vzorky, zatia
o jeho koncentrácia bola nižšia ako LOD v každej vzorke bunky CALU-1.
Uskutonilo sa priame porovnanie koncentrácie prchavých organických zlúenín zistených v bunke a v okolí vzoriek.
Spomínali sme iba zlúeniny, ktoré sú prítomné v každej bunkovej vzorke CALU-1 vo vyššej (trvalej) alebo nižšej (trvalej)
úrovni, než v okolí každej vzorky. Pomery priemerných koncentrácii z oboch typov vzoriek sú uvedené v tabukách 2 a 3A-
B.
Po 4 hodinách inkubácie by mohla by vo fermentanej nádobe nájdená zvýšená koncentrácia izopropylalkoholu.
Avšak, koncentrácia 2-propanolu po 4 hodinách inkubácie sa zvýšila len v 3 zo 4 meraní, kým u vzoriek inkubujúcich sa 18 h
nie je žiadny významný rozdiel medzi meraným množstvo 2-propanolu v headspace rakovinových buniek a v headspace
prostredia. Po 18 hodinách inkubácie sa koncentrácie 2,3,3-trimetylpentánu (priemer ppb v bunkách/priemer ppb v okolí =
1,89), 2,3,5-trimetylhexánu (1,71), 2,4-dimetylheptánu (3,04) a 4-metyloktánu (1,71) výrazne zvýšili v headspace buniek
CALU-1 (obr. 2). Po 4 h inkubácie došlo k zníženiu koncentrácie u zlúenín metakroleín (0,10), 2-metylpropanal (0,08), 2metoxy-2-metylpropán
(0,39), 3-metylbutanal (0,01), 2-metyl-2-butenal (0) a n-butyl-acetát (0,14) v rakovinových bunkách
(obr. 3 a obr. 4A). Po 18 h inkubácie sa výrazne znížila koncentrácia acetaldehydu (priemer ppb v bunkách/priemer ppb v
okolí = 0,22), acetonitrilu (0,48), akroleínu (0,57), metakroleínu (0,12), 2-metylpropanalu (0,07), 2-butanónu (0,47), 2metoxy-2-metylpropánu
(0,41), 3-metylbutanalu (0,01), 2-metyl-2-butenalu (0), 2-etoxy-2-metylpropánu (0,40), hexanalu
(0,37) a n-butyl-acetátu (0,17) (obr. 3 a obr. 4B).
Diskusia
V našich experimentoch boli prchavé organické zlúeniny uvoované z línie buniek rakoviny púc CALU-1, odobraté
a koncetrované prostredníctvom adsorpcie na pevných sorbentoch s následnou termálnou desorpciou a analyzované pomocou
GC-MS. Vo výskumoch s líniou buniek CALU-1 boli testované dlhšie a kratšie inkubané asy (18 h a 4 h) vzhadom na to,
že v predchádzajúcich experimentoch museli by vyvinuté technické zariadenia a protokol pre toto experimentálne
nastavenie. Výsledky pokusov s bunkami CALU-1 potvrdzujú existenciu látok, ktoré sú bu uvoované alebo
spotrebované týmito bunkami. Spomínané sú len analyty, ktoré boli detegované vo všetkých vzorkách prostredia, ako aj v
rakovinových bunkách. alej sa uvádza, že uvoované zlúeniny môžu by detegované po dlhšej inkubanej dobe, ale
zatia nebolo sledované žiadne významné uvoovanie po 4 hodinách inkubácie. Na druhej strane, spotreba niekokých
aldehydov, ako aj n-butyl-acetátu a metyl-terc-butyléteru z headspace roztoku buniek by mohla by detegovaná už po krátkej
dobe inkubácie. Aj pre zlúeniny ako je acetaldehyd a najmä 3-metylbutanal a n-butyl-acetát, ktoré majú vysoké pozadie z
prostredia, bola pozorovaná silná redukcia koncentrácie už po 4 hodinách inkubácie (tabuka 3A). Vplyv inkubanej doby na
množstvo zistených látok je znázornený na obrázku 3. Vzhadom na veké rozdiely v meranej ploche píku acetaldehydu,
nebola potvrdená dôležitos pre túto látku po 4 h inkubácie.
Tabuka 1:
A: Súhrn všetkých látok potvrdených spektrálnou knižnicou a retenným asom
íslo Zlúenina t R [min] CAS
1 Metylalkohol 8,778 67-56-1
2 Dimetyléter 10,323 115-10-6
3 Acetaldehyd 11,936 75-07-0
4 Metántiol 13,130 74-93-1
5 Izobután 15,785 75-28-5
6 2-Metyl-1-propén 16,118 115-11-7
7 Etyl alkohol 16,517 64-17-5
8 Acetonitril (a) 17,423 75-05-8
9 2-Butén (Z alebo E izomér) 17,009 107-01-7
10 Bután 17,186 106-97-8
11 2-Butén (E alebo Z izomér) 17,360 115-11-7
12 2-Propénal (b) 19,310 107-02-8
13 Furán 19,741 110-00-9
14 Propanal 20,170 123-38-6
15 Acetón 20,469 67-64-1
16 Izopropylalkohol 21,720 67-63-0
17 2-Metylbután 23,229 78-78-4
18 Etyléter 23,503 60-29-7
19 1-Propanol 23,696 71-23-8
20 Pentán 24,224 109-66-0
Zborník príspevkov
z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie
"Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9
- 53 -
hotel Falkensteiner, Bratislava
11. - 14. 10. 2010