Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...

Povrchov aktivní látka, polyethylenglykol (PEG) - Umožuje zvýšit viskozitu, což omezí elektroosmózu roztoku a dosažení
ostejších zón.
Vzorek – Nízkomolekulární syntetické barviva o pI 8,6, 7 a 6,2.
Pístroj - Izotachoforetický analyzátor Spišská Nová Ves, byl použit ve dvoukolonovém uspoádání. V horní tzv. separaní
kapiláe probhla fokusace a pedkoncentrování, ve spodní analytické kapiláe byl vzorek analyzován.
Konce každé kapiláry jsou pipojeny k elektrodovým komrkám, které obsahují vedoucí elektrolyt a koncový
elektrolyt (v horní ásti pístroje). Vzorek se dávkuje injekní stíkakou (v horní ásti pístroje). Zóna prochází pes
detektor, který vyhodnotí údaje a pošle elektrický signál do zapisovae. V jednotlivých kolonách jsme mli procházející
proud 250 μA a 75 μA.
Složení elektrolyt:
Vedoucí elektrolyty: L1: 0,01M NH4OH + 0,01M NH4Ac + 1% PEG + 400ppm povrchov aktivní látky, pH=8,62
L2: 0,01M NH4Ac + 1% PEG + 400ppm povrchov aktivní látky, pH=6,75
Zakonující a mobilizaní elektrolyt: 0,03M HAc, pH=3,12
Dávkovací elektrolyt: 0,002M HIS + 0,01M NH4Ac + vzorek amfolyt, pH=6,95
Vzorek: nízkomolekulární syntetické barvy o pI=8.6+7+6.2
Postup analýzy – Do spodní analytické kapiláry nalijeme vedoucí elektrolyt, do vrchní separaní kapiláry alkalický
fokusaní elektrolyt a do vrchní terminaní komrky dávkovací kyselý elektrolyt s velmi zedným roztokem vzorku. pH
dávkovacího elektrolytu upravíme tak, aby spolu s fokusaním elektrolytem vytvoil v kolon stojící rozhraní. Po zapnutí
proudu jsou pak, v prvním kroku jednotlivé ionty vzorku selektivn dávkovány prchodem elektrického proudu do
vytvoeného stojícího rozhraní, kde se mezi elektrolyty fokusují ve form iont s nulovým efektivní nábojem. Po
naakumulování dostateného množství vzorku, což je viditelné opticky, je ve druhém kroku analýzy vymnn elektrolyt
v horní elektrodové komrce pístroje za mobilizaní, konkrétn za kyselinu octovou. Psobením kyseliny dojde ke zmn
nulového efektivního náboje v zónách na pozitivní, které psobením elektrického proudu zvolna putují ve form ostrých zón
do separaní kapiláry. Ve tetím kroku se stává v separaní kapiláe mobilizaní elektrolyt terminaním a zóny podstupují
v ITP módu bžnou izatochoforetickou analýzu.
VÝSLEDKY A DISKUZE
ZÁVISLOST DÉLKY ZÓNY NA DÁVKOVACÍM ASE
Funknost metody byla ovena sestrojením kalibraní závislosti délky zóny na dávkovacím ase, která je rovnž
lineární - obr.4. Výsledné závislost délky zón na dávkovacím ase jsou uvedeny v tabulce 1. V zónách dochází k rozdílnému
zakoncentrování jednotlivých barevných amfolyt. Nejvíce je zkoncentrován amfolyt o pI 8,6, délka zóny je pímo úmrná
dávkovacímu asu. Barevný amfolyt o pI 7se zakoncentrovává již mén díky jeho nižšímu pI a amfolyt o pI 6,2 se
nezakoncentrovává již skoro vbec. Na obr. 5. jsou porovnány ITP záznamy analýzy vzork amfolyt bez fokusace - kivka
A a s fokusací 7000 sec. kivka B. Fotografický záznam fokusovaných zón je na obr. 6. Je patrné viditelné a ostré rozhraní
mezi jednotlivými zónami, vzniklé zóny jsou dokonale oddlené a isté.
Zborník príspevkov
z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie
"Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9
- 32 -
hotel Falkensteiner, Bratislava
11. - 14. 10. 2010