Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...

Jsou-li analyzované amfolyty pítomny v ásti elektrolytového systému- v tzv. dávkovacím elektrolytu, pak jsou
prchodem elektrického proudu kontinuáln elektromigran dávkovány do rozhraní, kde se selektivn fokusují - akumulují
do stojících zón, jejichž efektivní náboj je nulový. Po naakumulování dostateného množství analytu jsou zóny mobilizovány
a analyzovány. Selektivita fokusace je dána rozdílným pI jednotlivých amfolyt a zvoleným pH obou krajních elektrolyt,
tvoících neutralizaní rozhraní - pH skok. Z matematického modelu popisujícího neutralizaní rozhraní vyplývá, že v
doposud popsané elektrolytové systémy, založené na jednoduchých anorganických solích, musí mít symetrický rozsah pH
krajních elektrolyt se stedem pH 7,12. Pro zvýšení selektivity pedkoncentrace jsme vyvinuli elektrolytový systém
s nízkomolekulárním amfolytem, který umožuje použít asymetrický rozsah pH krajních elektrolyt se stedem v kyselé
oblasti pH. Na obrázku 1. je znázornn typický prbh gradientu pH v klasickém uspoádání izoelektrické fokusace
s amfolyty - A, prbh symetrického gradientu pH v uspoádání izoelektrické fokusace bez amfolyt –B a modifikovaná
metoda izoelektrické fokusace v nesymetrickém skokovém gradientu pH.
Obrázek 1. Prbh gradientu pH pro jednotlivé typy izoelektrické fokusace. A - klasická fokusace v pítomnosti amfolyt,
B- fokusace bez amfolyt CAF-IEF, C – fokusace ve skokovém gradientu pH.
MATERIÁL A METODIKA
Elektrolyty - Elektrolyty byly vyvinuty a pufrovány protiionty tak, aby mobilita H + a OH - iont v kyselém a alkalickém
prostedí byla menší než u ostatních iont stejného náboje. To umožnilo korektní migrace iont a také následné použití H + a
OH - iont jako terminátoru pi mobilisaci. Zvolené pH bylo nastaveno s ohledem na nejlepší pufrovací schopnost na hodnotu
pK protiionu.
Základní elektrolyty pro tvorbu neutralizaního rozhraní se skládají z alkalické a kyselé ásti. Jako alkalický základní
elektrolyt byl zvolen octan amonný upravený hydroxidem amonným na pH=8,62. Kyselá ást elektrolytu - octan amonný
upravený kyselinou octovou má mít standardn hodnotu pH 5,4. Pi tchto hodnotách pH elektrolyt jsou velikosti opaných
tok H + a OH - iont v rovnováze a neutralizaní rozhraní stojí. Pídavkem vhodné koncentrace aminokyseliny histidinu do
kyselého elektrolytu dojde ke zvýšení pH na hodnotu 6,95 a zárove k vázání solvolytického toku H + iontu na histidinový
kation, pi zachování jeho velikosti a smru pohybu. To umožní i pi zmn pH jednoho elektrolytu zachovat stojící
neutralizaní rozhraní. Místo H + iont jsou neutralizovány histidinové kationy za tvorby zvitteriontového histidinu
s efektivním nulovým nábojem. Schematický popis situace na rozhraní je znázornn na obr. 2.
Zborník príspevkov
z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie
"Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9
- 30 -
hotel Falkensteiner, Bratislava
11. - 14. 10. 2010