Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...

Po týchto skúsenostiach sme sa rozhodli použi na separáciu menšiu, nami naplnenú kolónu, s rozmermi 30 x 3 mm.
Použitý sorbent bol HEMA BIO 1000 Q s tým rozdielom, že tento mal šes krát väšie rozmery astíc (60 m). Vekos
medziasticových pórov sa taktiež zväšila, o znamenalo zmenšenie tlaku za použitia vysokých prietokov (0,5 – 2 ml/min).
Tomuto mala pomôc aj menšia džka kolóny. Do takejto kolóny sa sa zmestilo menej sorbentu a tým sme zmenšili aj
množstvo funkných skupín, kvartérnych amínov, schopných interagova s funknými skupinami HL. Oakávali sme menšiu
retenciu humínových látok. Ukázalo sa že výber bol správny. Pre alšie optimalizovanie separaných podmienok, sme si
zvolili nasledujúce kritéria: teplota, rýchlos analýzy a rozlíšenie jednotlivých zložiek humínových látok pri využití
skokových gradientov.
Obr.11: Vplyv teploty na separáciu zložiek HA ALDRICH, použitá kolóna HEMA BIO 1000 Q (30 x 3 mm), použité teploty
40; 55 a 70°C, Skokový gradient ..., MF: A = 500 mmol/L EDTA, pH 12; D = 5 mmol/L EDTA, pH 12, Rýchlos
prietoku MF = 0,5 ml/ min, spektrofluorimetrická detekcia (ex. 480 nm; em. 530 nm).
Vplyv teploty separaného prostredia na správanie sa humínových látok bol skúmaný za použitia gradientu .1 na
chromatografickej kolóne Separon HEMA BIO 1000 Q (30 x 3 mm) a Separon HEMA BIO 1000 DEAE (30 x 3 mm) pri
prietoku mobilnej fázy 0,5 ml/min na vzorkách HA Aldrich a alších humínových kyseín. Skúmali sme vplyv teplôt 40; 55
a 70 °C. Z nameraných záznamov je vidie, že pri zvyšovaní teploty sa retencia látok prakticky nemení a tvar
chromatografického záznamu je ovplyvnený len málo.
Vplyv prietoku mobilnej fázy na správanie sa humínových látok bol skúmaný za použitia gradientu .1 na
chromatografickej kolóne Separon HEMA BIO 1000 DEAE (30 x 3 mm) pri prietoku mobilnej fázy 0,5; 1; 1,5 a 2 ml/min,
na vzorkách HA Aldrich, HA Ekohum, HA Cerová a HA Suchá Hora. Pracovali sme pri teplote vybranej z vyhodnotení
z predošlých pokusov a to pri 40°C. Celkový as analýzy bol 38 min. Elúciu látok sme detekovali s FLD.
Obr.12: Vplyv prietokovej rýchlosti mobilnej fázy na chromatografické profily HA ALDRICH.
Po prevedení pokusov sme zistili, že zmena rýchlosti prietoku mobilnej fázy má zásadný vplyv na retenciu humínových
látok za popísaných podmienok. Zvyšovanie rýchlosti prietoku mobilnej fázy má za následok zníženie retenných asov pre
každú z našich použitých vzoriek HL. Priom popri znižovaniu retenných asov nastáva aj znižovanie plochy jednotlivých
Zborník príspevkov
z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie
"Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9
- 27 -
hotel Falkensteiner, Bratislava
11. - 14. 10. 2010