Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...
Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ... Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...
2a.) 2b.) Obrázok 2.: RP - HPLC záznam vzorky HA DS I (3,00 mg/ml) - 2a.) a HA Aldrich (3,00 mg/ml) - 2b.), FLD detekcia (ex. = 470 nm, em. = 530 nm), dávkovaný objem 100 μl. íslicami 1 až 11 sú oznaené približné polohy odobratia jednotlivých frakcií. Pre druhý separaný stupe sme si zvolili chromatografickú metódu, ktorá pracuje na základe rozdielnych separaných princípov ako v prvom stupni používaná RP-HPLC metóda. Vybrali sme rozmerovo vyluovaciu chromatografiu (SEC), ktorá umožuje pomerne presne a správne uri distribúciu molovej hmotnosti jednotlivých vzoriek HL [2,15] a takisto ich frakcií získaných RP - HPLC metódou. Ako stacionárna fáza bol použitý gél Spheron HEMA 100 s vekosou astíc < 25 μm, ktorým bola naplnená kolóna s rozmermi (250 x 2,2) mm. Gély Spheron HEMA sa vyznaujú mimoriadnou mechanickou odolnosou, ktorá umožuje ich použitie pri kvapalinovej chromatografii pri vysokých tlakoch, bez rizika deformácie i rozpadnutia astíc, upchania kolóny a roztrhnutiu stpca gélu. Na kalibráciu použitej kolóny sme použili rôzne štandardy makromolekulových látok o známej relatívnej molovej hmotnosti. Spomedzi skúmaných kalibraných štandardov najlepšie vyhoveli polystyrénové štandardy (PS) najmä preto, lebo svoje absorpné maximum majú pri 270 nm a svojimi vlastnosami najviac spajú požiadavky vyplývajúce zo zloženia nami navrhnutého separaného systému. Zo získaných retenných údajov sme zostrojili kalibranú závislos (Obrázok 3.), ktorá znázoruje závislos logaritmu molovej hmotnosti (log MW) jednotlivých PS štandardov od ich retenného asu (tr), ktorú sme potom použili na stanovenie distribúcie relatívnych molových hmotností pre jednotlivé vzorky humínových látok a ich RP-HPLC frakcií. Obrázok 3.: Kalibrácia použitej kolóny Spheron HEMA 100 použitím polystyrénových štandardov s nominálnymi hodnotami relatívnych molových hmotností (900, 2600, 4000, 10000, 37000, 97000, 1200000). Zborník príspevkov z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie "Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9 - 201 - hotel Falkensteiner, Bratislava 11. - 14. 10. 2010
Frakcie odobrané v prvom separanom stupni sme alej analyzovali SEC metódou za aplikáciou rôznych kombinácií experimentálnych podmienok. Pri týchto experimentoch sme sledovali predovšetkým vplyv niektorých parametrov na priebeh separácie, ako napr. vplyv dávkovaného objemu, vplyv obsahu organickej zložky v mobilnej fáze a tiež vplyv rýchlosti prietoku mobilnej fázy. Po vyhodnotení výsledkov sme dospeli k názoru, že pre finálne experimenty budeme používa ako mobilnú fázu (MF) zmes so zložením 99% N,N-dimetylformamidu (DMF) a 1% fosforenanového tlmivého roztoku o pH 3.00. Vplyv zvýšeného obsahu DMF sa prejavilo najmä po porovnaní plôch píkov a iastone aj na vzhade chromatogramov, keže oproti záznamom získanými za podmienok použitia MF s nižším obsahom DMF boli plochy píkov v niektorých prípadoch niekokonásobne väšie. V prípade vplyvu množstva dávkovaného objemu sme navrhli sériu experimentov, pri ktorých sme si zvolili 20 μl, 50 μl a 100 μl objemy vzoriek, ktoré boli injektovaný do chromatografického systému. Z nameraných výsledkov vyplýva, že objem dávkovanej vzorky do chromatografického systému má vplyv na vzhad chromatografických záznamov. Po vyhodnotení a porovnaní plôch píkov prislúchajúcich jednotlivým frakciám na SEC záznamoch môžeme konštatova, že rozdiely v pomeroch plôch píkov v prípade jednotlivých RP-HPLC frakcií pri dávkovaní rôznych objemov vzorky sú výraznejšie v prípade frakcií, ktoré eluovali pri nižších obsahoch DMF v RP-HPLC systéme a postupne sa znižujú. V prípade dávkovania 100 μl vzorky do SEC systému sa už prejavili známky preaženia kolóny. Obrázok 4.: SEC profily RP-HPLC frakcií vzorky HA DS J (3,02 mg/ml), FLD detekcia (ex. = 470 nm, em. = 530 nm), dávkovaný objem 50 μl. Jednotlivé frakcie sú zoradené od frakcie11 po 2. Obrázok 5.: SEC profily RP-HPLC frakcií vzorky HA DS I (3,00 mg/ml), FLD detekcia (ex. = 470 nm, em. = 530 nm), dávkovaný objem 50 μl. Jednotlivé frakcie sú zoradené od frakcie11 po 1. Zborník príspevkov z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie "Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9 - 202 - hotel Falkensteiner, Bratislava 11. - 14. 10. 2010
- Page 158 and 159: Obr. 9. Separaci metabolitů indolo
- Page 160 and 161: STANOVENIE OXIDANÝCH PRODUKTOV OXI
- Page 162 and 163: e d c b a G NO - 3 NO - 2 NO - 2 NO
- Page 164 and 165: Na obr. 4b je elektroforeogram z IT
- Page 166 and 167: Vhodnos navrhnutého analytického
- Page 168 and 169: Experimentálna as CZE separácie b
- Page 170 and 171: Séria kalibraných meraní modelov
- Page 172 and 173: Výsledky a diskusia Na obr. 2 sú
- Page 174 and 175: Tab. 2: Parametre regresných rovn
- Page 176 and 177: Tab. 3: Opakovatenosti migraných a
- Page 178 and 179: chloridu, typickej makrozložky v C
- Page 180 and 181: kationického roztoku elektrolytu b
- Page 182 and 183: Tab. 2: Stanovenie aniónov a kati
- Page 184 and 185: CHARAKTERIZÁCIA RP-HPLC FRAKCIONOV
- Page 186 and 187: Obr. 2. RP-HPLC profil vzorky HK Al
- Page 188 and 189: Obr. 6. RP-HPLC profily frakcií vz
- Page 190 and 191: Zoznam použitej literatúry [1] Ha
- Page 192 and 193: a druhá kolóna kontaktným vodivo
- Page 194 and 195: c b a 1000 1500 tm [s] 2000 Obr. 3:
- Page 196 and 197: Záver ITP-CZE uskutonená použit
- Page 198 and 199: Automatizácia je založená na po
- Page 200 and 201: e d c b a 20mAu t CZE (min) 2 4 6 8
- Page 202 and 203: kyselina; mandlová kyselina (3,75
- Page 204 and 205: Literatúra [1] Th.P.E.M. Verheggen
- Page 206 and 207: Z uvedeného vyplýva, že je stál
- Page 210 and 211: Porovnaním chromatogramov frakcií
- Page 212 and 213: Práca vznikla za podpory grantov V
- Page 214 and 215: Vznik a funkcia humínových látok
- Page 216 and 217: celkového náboja jedného gramu p
- Page 218 and 219: Vzorky pôd a ich charakterizácia
- Page 220 and 221: Zborník príspevkov z 18. medziná
- Page 222 and 223: Obrázok 11: Kruhové diagramy perc
- Page 224: [23] D. Gondar, R. Lopez, S. Fiol,
Frakcie odobrané v prvom separanom stupni sme alej analyzovali SEC metódou za aplikáciou rôznych kombinácií<br />
experimentálnych podmienok. Pri týchto experimentoch sme sledovali predovšetkým vplyv niektorých parametrov na<br />
priebeh separácie, ako napr. vplyv dávkovaného objemu, vplyv obsahu organickej zložky v mobilnej fáze a tiež vplyv<br />
rýchlosti prietoku mobilnej fázy. Po vyhodnotení výsledkov sme dospeli k názoru, že pre finálne experimenty budeme<br />
používa ako mobilnú fázu (MF) zmes so zložením 99% N,N-dimetylformamidu (DMF) a 1% fosforenanového tlmivého<br />
roztoku o pH 3.00. Vplyv zvýšeného obsahu DMF sa prejavilo najmä po porovnaní plôch píkov a iastone aj na vzhade<br />
chromatogramov, keže oproti záznamom získanými za podmienok použitia MF s nižším obsahom DMF boli plochy píkov v<br />
niektorých prípadoch niekokonásobne väšie. V prípade vplyvu množstva dávkovaného objemu sme navrhli sériu<br />
experimentov, pri ktorých sme si zvolili 20 μl, 50 μl a 100 μl objemy vzoriek, ktoré boli injektovaný do chromatografického<br />
systému. Z nameraných výsledkov vyplýva, že objem dávkovanej vzorky do chromatografického systému má vplyv na<br />
vzhad chromatografických záznamov. Po vyhodnotení a porovnaní plôch píkov prislúchajúcich jednotlivým frakciám na<br />
SEC záznamoch môžeme konštatova, že rozdiely v pomeroch plôch píkov v prípade jednotlivých RP-HPLC frakcií pri<br />
dávkovaní rôznych objemov vzorky sú výraznejšie v prípade frakcií, ktoré eluovali pri nižších obsahoch DMF v RP-HPLC<br />
systéme a postupne sa znižujú. V prípade dávkovania 100 μl vzorky do SEC systému sa už prejavili známky preaženia<br />
kolóny.<br />
<br />
Obrázok 4.: SEC pr<strong>of</strong>ily RP-HPLC frakcií vzorky HA DS J (3,02 mg/ml), FLD detekcia (ex. = 470 nm, em. = 530 nm),<br />
dávkovaný objem 50 μl. Jednotlivé frakcie sú zoradené od frakcie11 po 2.<br />
<br />
Obrázok 5.: SEC pr<strong>of</strong>ily RP-HPLC frakcií vzorky HA DS I (3,00 mg/ml), FLD detekcia (ex. = 470 nm, em. = 530 nm),<br />
dávkovaný objem 50 μl. Jednotlivé frakcie sú zoradené od frakcie11 po 1.<br />
<strong>Zborník</strong> <strong>príspevkov</strong><br />
z 18. medzinárodnej <strong>vedeckej</strong> <strong>konferencie</strong><br />
"Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9<br />
- 202 -<br />
hotel Falkensteiner, Bratislava<br />
11. - 14. 10. 2010
Change language