Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...

STANOVENIE OXIDANÝCH PRODUKTOV OXIDU DUSNATÉHO V TELOVÝCH TEKUTINÁCH NA
ELEKTROFORETICKOM IPE
PETER TROŠKA 1* , MARIÁN MASÁR 1 , MICHAL HORIIAK 1 , RICHARD CHUDOBA 2 , DUŠAN
KANIANSKY 1
(1) Univerzita Komenského v Bratislave, Prírodovedecká fakulta, Katedra Analytickej chémie, Mlynská Dolina CH-2, 84215
Bratislava, Slovenská republika,
troska@fns.uniba.sk, michalhorciciak@gmail.com
(2) Univerzita Karlova v Praze, Pírodovedcká fakulta, Katedra fyzikální a makromolekulové chemie, Hlavova 8, 128 40
Praha 2, eská republika
Úvod
udský organizmus produkuje NO z aminokyseliny L-arginínu pomocou enzýmu NO-syntázy. NO-syntáza sa
nachádza v mnohých bunkách tela a jej lokalizácia odráža množstvo funkcií, ktoré NO vykonáva. Napríklad NO
syntetizovaný v nervových bunkách zabezpeuje prenos informácie a NO pochádzajúci z bielych krviniek uplatuje svoj
toxický efekt v boji proti mikroorganizmom a nádorovým bunkám. Najdôležitejšou funkciou tejto molekuly je však jej
schopnos rozširova priesvit ciev relaxovaním hladkých svalov v cievnej stene, a tým zabezpeova orgánom potrebné
prekrvenie a tiež znižova systémový tlak krvi.
Enzým NO-syntáza existuje vo viacerých izoformách. Dve z nich sú nízkoproduktívne, t.j. produkujú NO
kontinuálne a vo vemi malých množstvách (napríklad v nervových bunkách a vo vnútornej výstelke ciev). Nízke hladiny
NO majú signálny charakter, t.j. sprostredkovávajú prenos signálu medzi bunkami, keže malá molekula NO ahko
prestupuje cez bunkovú membránu. Naproti tomu, vysokoproduktívna tzv. induktívna NO-syntáza je schopná v krátkom ase
po špecifickom signáli syntetizova až tisíckrát viac NO, než jej konštitutívne izoformy. Pri relatívne vysokých množstvách
NO sa môže zaa uplatova jeho toxický úinok. Molekula NO má radikálovú povahu a voné radikály sú vemi reaktívne
látky schopné znii životne dôležité molekuly ako sú lipidy, bielkoviny a nukleové kyseliny. Práve na tomto princípe je
založená likvidaná schopnos bielych krviniek, ktoré obsahujú induktívnu NO-syntázu.
Dusinany a dusitany sú vo vekej miere používané ako indikátory vzniku NO. Oxidané produkty NO sú vo
zvýšenej miere obsiahnuté v mozgovomiechovom moku (celebrospinal fluid; CSF) pacientov so sklerózou multiplex [1].
Zvýšená hladina dusinanov a dusitanov v CSF bola nameraná pri zápale mozgových blán. Pacienti trpiaci Parkinsonovou
chorobou majú koncentrácie dusinanov a dusitanov v CSF nižšie.
Jednotlivé metódy stanovenia dusinanov a dusitanov v telových tekutinách možno všeobecne rozdeli na
separané a neseparané analytické metódy vyžadujúce rôzny stupe predúpravy vzoriek. Neseparané metódy, napríklad
kolorimetria, spektrofotometria, fluorimetria a elektrochemické metódy sú založené na redukcii dusinanov na dusitany,
ktoré sú následne stanovované a poskytujú informácie o NOx (celkovom stanovení dusinanov a dusitanov). Separané
analytické metódy stanovenia dusinanov a dusitanov, ako napríklad plynová chromatografia (GC), metódy vysokoúinnej
kvapalinovej chromatografie (HPLC) a kapilárna elektroforéza (CE) poskytujú komplexnejšie analytické informácie,
vyžadujú však implementáciu predúpravných a prekoncentraných techník vzhadom na nízke koncentrané úrovne
dusinanov a najmä dusitanov v komplexných matriciach [2].
Experimentálna as
Na ITP-CZE separácie bol použitý CE ip so spájanými kanálikmi (CC) a integrovanými vodivostnými senzormi
od firmy Merck (Darmstadt, Nemecko). Schéma ipu a rozmery jednotlivých kanálikov sú znázornené na obr. 1.
LE
BF
C-S
C-BE
D1
W
Obr. 1 Schéma PMMA ipu so spájaným separanými kanálikmi
C-LE - prvý (ITP) separaný kanálik naplnený vodiacim elektrolytom (4,5 l objem; 59 × 0,2-0,5 × 0,14-0,2 mm) s Pt
vodivostným senzorom D1; C-TE - kanálik naplnený zakonujúcim elektrolytom (0,8 l objem; 11 × 0,2-0,5 × 0,2-0,38 mm);
C-S - dávkovací kanálik (9,9 μl objem; 61 × 0,2-0,5 × 0,2-0,38 mm); C-BE - druhý (CZE) separaný kanálik naplnený
nosným elektrolytom (4,3 l objem; 56 × 0,2-0,5 × 0,14-0,2 mm) s Pt vodivostným senzorom D2; BF - bifurkaná oblas;
LE, TE, BE, S - vstupy pre roztoky vodiaceho, zakonujúceho a nosného elektrolytu a vzorky do jednotlivých kanálikov; W -
výstup z kanálikov do odpadovej nádobky.
Zborník príspevkov
z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie
"Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9
- 153 -
C-LE
S
D2
C-TE
BE
TE
hotel Falkensteiner, Bratislava
11. - 14. 10. 2010