Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...
Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ... Zborník príspevkov z vedeckej konferencie - Department of ...
[8] S. Teklu, L.L. Gundersen, T. Larsen, K.E. Malterud, F. Rise, Bioorg. Med. Chem. 13 (2005) 3127. [9] H. Kubo, J. Kobayashi, K. Higashiyama, J. Kamel, Y. Fujii, S. Ohmiya, Biol. Pharm. Bull. 23 (2000) 1114. [10] A. Guarna, E.G. Occhiatro, F. Machetti, A. Trabocchi, D. Scarpi, G. Danza, R. Mancina, A. Comerci, M. Serio, Bioorg. Med. Chem. 9 (2001) 1385. [11] G.S. Harris, J.W. Kozarich, Curr. Opin. Chem. Biol. 1 (1997) 254. [12] A. Schmid, G. Romey, J. Barhanin, M. Lazdunski, Mol. Pharmacol. 35 (1989) 766. [13] P. Polster, B. Christophe, M. Van Damme, A. Houlliche, P. Chatelain, J. Pharm. Exp. Ther. 255 (1990) 593. [14] P. Šafa, J. Žúžiová, Š. Marchalín, N. Prónayová, . Švorc, V. Vrábel, S. Comesse, A. Daich, Tetrahedron Asymmetry, 21 (2010) 623. [15] Oxford Diffraction. CrysAlis CCD and CrysAlis RED. Oxford Diffraction Ltd, Abingdon, Oxfordshire, England, 2006. [16] G.M. Sheldrick, Acta Cryst. A64 (2008) 112. [17] M. Nardelli, PARST, A System of Computer Routines for Structure Analysis, University of Parma, Italy, 1984. [18] K. Brandenburg, DIAMOND (Version 2.1e.). Crystal Impact GbR, Bonn, Germany, 2001. [19] F.H. Allen, O. Johnson, G.P. Shields, B.R. Smith, M. Towler, J. Appl. Cryst. 37 (2004) 335. [20] D. Cremer, J.A. Pople, J. Am. Chem. Soc. 97 (1975) 1354. [21] M. .Nardelli, Acta Cryst. C39 (1983) 1141. Zborník príspevkov z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie "Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9 - 105 - hotel Falkensteiner, Bratislava 11. - 14. 10. 2010
ŠTÚDIUM MOŽNOSTI VYUŽITIA AFINITNEJ CHROMATOGRAFIE S IMOBILIZOVANÝMI IÓNMI KOVU NA FRAKCIONÁCIU HUMÍNOVÝCH LÁTOK RADOSLAV HALKO*, KATARÍNA KROVÁ, LUCIA KOZÁKOVÁ a MILAN HUTTA Katedra analytickej chémie, Prírodovedecká fakulta UK v Bratislave, Mlynská dolina CH-2, 842 15 BRATISLAVA e-mail: halko@fns.uniba.sk Úvod V súasnosti pri izolácii, frakcionácii a charakterizácii humínových látok (HL) sa využívajú viaceré analytické separané metódy. Významnú úlohu v tejto oblasti hrajú chromatografické separané metódy, z ktorých najširšie uplatnenie našla gélová chromatografia (SEC) [1]. Menej zriedkavým prístupom na frakcionáciu HL je využitie kvapalinovej chromatografie v systéme obrátených fáz (RP-HPLC) [2]. Jednou z potenciálnych možností je aj využitie afinitnej chromatografie s imobilizovanými iónmi kovu (IMAC) [3]. V IMAC, separaný mechanizmus je založený na špecifických interakciách medzi molekulami analytu v roztoku a iónmi kovu naviazanými na vhodné funkné skupiny nepohyblivej fázy. Molekuly analytov sú potom separované poda ich rozdielnej afinity ku chelatujúcim iónom kovov, t.j. ich funkné skupiny s elektrodonornými vlastnosami majú schopnos vytvára koordinané komplexy s iónmi kovov. Podmienkou IMAC separácie je, aby funkné miesta analyzovanej molekuly vytvárali s imobilizovanými iónmi kovu dostatone stabilné komplexy. Vzhadom na to, že štruktúra HL pozostáva z množstva funkných skupín (napríklad karboxylové, fenolové, aminoskupiny, at.), HL môžu poskytova miesta pre naviazanie iónov kovu a tým spajú spomenutú podmienku separácie látok v IMAC metóde. Vaka tomu, našla IMAC uplatnenie aj pri separácii a charakterizácii humínových látok. Cieom tejto práce bolo štúdium možností využitia IMAC metódy na frakcionáciu HL. Pre tento výskum bol zvolený model hlinitých iónov naviazaných na dve chelatotvorné ligandové skupiny: 1. kyselinu salicylovú (Salicyl) a 2. kyselinu dietyléntriamíntetraoctovú (DTTA). Experimentálna as Všetky vodné roztoky boli pripravené v demineralizovanej vode (Labconco, USA). Vodné octanové tlmivé roztoky s rôznymi hodnotami pH boli pripravené z 99% (v/v) kyseliny octovej (Merck, Darmstadt, Nemecko), z ktorej bol pripravený vodný roztok s koncentráciou 0,1 mol l -1 . Požadované pH bolo upravené titráciou s 25% (v/v) roztokom amoniaku (Merck) a odmerané na pH-metry WTW InoLab pH 730 (Wellhelm, Nemecko). 0,1 mol l -1 vodný roztok Al(III), okyslený 1 ml 0,01 mol l -1 roztokom HCl (Merck), bol pripravený z Al(NO 3) 3.9H 2O (Lachema, Brno, R) do 250 ml umelohmotnej nádoby. Sorpné charakteristiky Al(III) iónov pre chelataný sorbent boli merané dynamickou metódou pomocou peristaltickej pumpy PCR 01 a fotometra VD 104, VIS detektor (Labeco, Spišská Nová Ves, SR) s on-line pokolónovou spektrofotometrickou detekciou použitím chelataného inidla SPADNS (Lachema), ktoré s Al(III) vytváralo ervenofialový komplex v molovom pomere 1:1 ( max = 587 nm). Pracovný postup bol nasledujúci: 1. naplnenie (približne 200-250 mg sorbentu); 2. ekvalibrácia chromatografickej kolóny (5 ml vody a 10 ml octanového tlmivého roztoku); 3. imobilizácia iónov kovu (10 ml roztoku hlinitej soli); 4. on-line pokolónová derivatizácia (SPADNS) a 4. regenerácia kolóny 10 ml 0,05 mol l -1 roztoku EDTA (Lachema, Brno, R). Na naplnenie chelataným sorbentom Iontosorb Salicyl resp. Iontosorb DTTA (Iontosorb, s.r.o., Ústí nad Labem, R) boli použité sklenené chromatografické CGC kolóny (30 x 3 mm, Tessek, Praha, R). Na prípravu pracovných štandardov humínových kyselín boli použité vzorky humínových kyselín (HK): 1. štandard HK Aldrich (Sigma-Aldrich, Steinheim, Nemecko) a 2. HK izolované z rašeliny z oblasti Cerová, SR. Odvážené množstvo 10 mg vzorky HK Aldrich na analytických váhach AR 0640 (Ohaus, USA) sme rozpustili v 10 ml demineralizovanej vody. Odvážené množstvo 10 mg HK Cerová sme vzhadom na jej nižšiu rozpustnos vo vode rozpustili v 10 ml octanového tlmivého roztoku (pH = 3,0) a pridali 2 ml 0,5 mol l -1 NaOH. Takto pripravené vzorky boli homogenizované 5 min v ultrazvukovej vani UCM 9 (Ecoson, Nové Mesto nad Váhom, SR) a následne boli ich tuhé asti oddelené v centrifúge Janetzki T30 (Lipsko, Nemecko). Vodná as zmesi bola odobraná a prefiltrová cez 32 mm diskový filter s priemerom pôrov 0,2 m (Acrodisc, Pall, USA). Takto upravená vzorka bola použitá pre IMAC merania. Chromatografické analýzy boli robené na HPLC systéme Elite LaChrom (Merck–Hitachi, Darmstadt, Nemecko), ktorý sa skladal z nasledujúcich zariadení: L-2130 pumpa s kvartérnym nízkotlakovým gradientom s odplyovaom rozpúšadla, L-2200 automatický dávkova vzoriek, L-2455 DAD spektrofotometrický detektor, L-2300 termostat, organizér a PC s chromatografickým softvérom EZChrom Elite 3.1.7. Výsledky a diskusia V IMAC metóde má najväší vplyv na separáciu látok typ použitého chelataného sorbentu, imobilizovaného iónu kovu ako aj pH eluného prostredia. Vzhadom na to, že afinita komplexotvorných funkných skupín analytu ku imobilizovaným Zborník príspevkov z 18. medzinárodnej vedeckej konferencie "Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9 - 106 - hotel Falkensteiner, Bratislava 11. - 14. 10. 2010
- Page 62 and 63: koncentrácia niekokých alkánov a
- Page 64 and 65: Obrázok 4: A a B: Porovnanie konce
- Page 66 and 67: TEPLOTNE PROGRAMOVANÉ PLYNOVO CHRO
- Page 68 and 69: metyl x-metyl-y-oát OV 1 I P s OV
- Page 70 and 71: metyl x-metyl-y-oát OV 1 I P s OV
- Page 72 and 73: Fig. 1. Chromatogram GC separácie
- Page 74 and 75: OV 1 Obr. 3. Závislos homomorfnýc
- Page 76 and 77: Záver Namerali sa teplotne-program
- Page 78 and 79: modifier solutions for ensure homog
- Page 80 and 81: applied to attain a stabilization o
- Page 82 and 83: against aqueous standards with a pr
- Page 84 and 85: Ludrová (6). Maslo sa vyrobilo zmi
- Page 86 and 87: Tabuka 2. Zloženie mastných kysel
- Page 88 and 89: Tabuka 3. Obsah jednotlivých izom
- Page 90 and 91: [19] J. Blaško, R. Kubinec, I. Ost
- Page 92 and 93: 2. Experimental Instrumentation Flo
- Page 94 and 95: Analysis of real samples The boiler
- Page 96 and 97: a) b) 2 2 1 1 3 3 3 3 Fig. 1 The ex
- Page 98 and 99: Conclusion remarks The identificati
- Page 100 and 101: screening, possible interactions am
- Page 102 and 103: The design consists of a factorial
- Page 104 and 105: elative area 15 10 5 -1,68 -1,00 0,
- Page 106 and 107: It can be seen that the programms d
- Page 108 and 109: nevodíkovými atómami izotropne s
- Page 110 and 111: O22—C6—C7 109.57 (15) C10—C11
- Page 114 and 115: iónom kovu môže by ovplyvnená a
- Page 116 and 117: V alšej asti práce sme študovali
- Page 118 and 119: vzorky, pomer hmotností vzorky a s
- Page 120 and 121: literatúre nenašli informácie. M
- Page 122 and 123: Záver Pri úprave vzorky pôdy met
- Page 124 and 125: galactose-4-epimerase [6, 7]. First
- Page 126 and 127: Abundance Abundance Abundance 1x10
- Page 128 and 129: Galactitol [mmol/mol creatinine] 60
- Page 130 and 131: References [1] J.T.R. Clarke, Clini
- Page 132 and 133: structural information of the analy
- Page 134 and 135: (x10,000,000) 1.5 1:TIC (1.00) 1.4
- Page 136 and 137: 1 st fraction 1.5 1.0 0.5 (x10,000,
- Page 138 and 139: 1 st fraction 1.5 1.0 0.5 (x10,000,
- Page 140 and 141: RAPID LIQUID CHROMATOGRAPHY-MASS SP
- Page 142 and 143: the LC-ESI-IT-TOF MS analyzer. HPLC
- Page 144 and 145: (x10,000,000) 1:TIC (1.00) 4:TIC (1
- Page 146 and 147: Figure 5 is showing MS and MS/MS sp
- Page 148 and 149: Figure 7 present MS and MS/MS spect
- Page 150 and 151: MS and MS/MS spectra of potential m
- Page 152 and 153: DVOUROZMĚRNÁ KAPALINOVÁ CHROMATO
- Page 154 and 155: řřů ěř Pnčč ěě : ččěP2D
- Page 156 and 157: řěůčťě čě č ěě Obr. 6.
- Page 158 and 159: Obr. 9. Separaci metabolitů indolo
- Page 160 and 161: STANOVENIE OXIDANÝCH PRODUKTOV OXI
[8] S. Teklu, L.L. Gundersen, T. Larsen, K.E. Malterud, F. Rise, Bioorg. Med. Chem. 13 (2005) 3127.<br />
[9] H. Kubo, J. Kobayashi, K. Higashiyama, J. Kamel, Y. Fujii, S. Ohmiya, Biol. Pharm. Bull. 23 (2000) 1114.<br />
[10] A. Guarna, E.G. Occhiatro, F. Machetti, A. Trabocchi, D. Scarpi, G. Danza, R. Mancina, A. Comerci, M. Serio, Bioorg.<br />
Med. Chem. 9 (2001) 1385.<br />
[11] G.S. Harris, J.W. Kozarich, Curr. Opin. Chem. Biol. 1 (1997) 254.<br />
[12] A. Schmid, G. Romey, J. Barhanin, M. Lazdunski, Mol. Pharmacol. 35 (1989) 766.<br />
[13] P. Polster, B. Christophe, M. Van Damme, A. Houlliche, P. Chatelain, J. Pharm. Exp. Ther. 255 (1990) 593.<br />
[14] P. Šafa, J. Žúžiová, Š. Marchalín, N. Prónayová, . Švorc, V. Vrábel, S. Comesse, A. Daich, Tetrahedron Asymmetry,<br />
21 (2010) 623.<br />
[15] Oxford Diffraction. CrysAlis CCD and CrysAlis RED. Oxford Diffraction Ltd, Abingdon, Oxfordshire, England, 2006.<br />
[16] G.M. Sheldrick, Acta Cryst. A64 (2008) 112.<br />
[17] M. Nardelli, PARST, A System <strong>of</strong> Computer Routines for Structure Analysis, University <strong>of</strong> Parma, Italy, 1984.<br />
[18] K. Brandenburg, DIAMOND (Version 2.1e.). Crystal Impact GbR, Bonn, Germany, 2001.<br />
[19] F.H. Allen, O. Johnson, G.P. Shields, B.R. Smith, M. Towler, J. Appl. Cryst. 37 (2004) 335.<br />
[20] D. Cremer, J.A. Pople, J. Am. Chem. Soc. 97 (1975) 1354.<br />
[21] M. .Nardelli, Acta Cryst. C39 (1983) 1141.<br />
<strong>Zborník</strong> <strong>príspevkov</strong><br />
z 18. medzinárodnej <strong>vedeckej</strong> <strong>konferencie</strong><br />
"Analytické metódy a zdravie loveka", ISBN 978-80-969435-7-9<br />
- 105 -<br />
hotel Falkensteiner, Bratislava<br />
11. - 14. 10. 2010
Change language