Plankton i bentos - Agronomski fakultet - Sveučilište u Zagrebu
Plankton i bentos - Agronomski fakultet - Sveučilište u Zagrebu
Plankton i bentos - Agronomski fakultet - Sveučilište u Zagrebu
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
<strong>Agronomski</strong> <strong>fakultet</strong><br />
<strong>Sveučilište</strong> u <strong>Zagrebu</strong><br />
PLANKTON I BENTOS<br />
U KOPNENIM VODAMA<br />
Skripta za vježbe<br />
Doc. dr. sc. Piria Marina<br />
Zagreb, 2006
SADRŽAJ<br />
1. UVOD .....................................................................................................................................2<br />
2. PLANKTON.............................................................................................................................4<br />
2.1. Fitoplankton .....................................................................................................................5<br />
2.1.2. Metode uzorkovanja fitoplanktona ...........................................................................28<br />
2.1.2.1. Uzorkovanje u tekućim vodama........................................................................29<br />
2.1.2.1.1. Selekcija mjesta uzorkovanja ....................................................................29<br />
2.1.2.1.2. Metode uzorkovanja..................................................................................30<br />
2.1.2.2. Uzorkovanje u jezerima i stajaćim vodama .......................................................34<br />
2.1.2.2.1. Selekcija mjesta uzorkovanja ....................................................................34<br />
2.1.2.2.2. Metode uzorkovanja..................................................................................35<br />
2.1.2.3. Učestalost i vrijeme uzorkovanja fitoplanktona..................................................37<br />
2.1.3. Metode uzorkovanje perifitona.................................................................................37<br />
2.1.3.1. Uzimanje uzoraka sa prirodnih supstrata ..........................................................38<br />
2.1.3.2. Uzimanje uzoraka sa umjetnih supstrata ..........................................................39<br />
2.1.4. Laboratorijska obrada sakupljenih uzoraka ..............................................................41<br />
2.1.2.1. Kvantitativna analiza fitoplanktona....................................................................41<br />
2.1.4.2. Kvantitativna analiza perifitona .........................................................................46<br />
2.1.5. Odreñivanje biomase fitoplanktona..........................................................................48<br />
2.1.6. Odreñivanje saprobnog stanja vode ........................................................................51<br />
2.1.4. VJEŽBE - FITOPLANKTON ....................................................................................54<br />
Vježba 1: Upoznavanje sa glavnim skupinama fitoplanktonskih organizama..............55<br />
Vježba 2: Kvalitativno uzorkovanje i determinacija fitoplanktona................................60<br />
Vježba 3: Kvantitativno uzorkovanje i determinacija fitoplanktona..............................63<br />
Vježba 4: Uzorkovanje i determinacija perifitona .......................................................64<br />
Vježba 5: Pantle – Buckov indeks saprobnosti ..........................................................67<br />
Vježba 6: Klorofil a....................................................................................................69<br />
2.2. Zooplankton ...................................................................................................................71<br />
2.2.1. Izbor mjesta uzorkovanja zooplanktona ...................................................................73<br />
2.2.2. Metode uzorkovanja zooplanktona ..........................................................................74<br />
2.2.3. Odreñivanje biomase zooplanktona.........................................................................76<br />
2.2.4. Odreñivanje trofije vode pomoću planktonskih račića...............................................76<br />
2.2.5. Raznolikost zajednica..............................................................................................78<br />
2.2.5. VJEŽBE - ZOOPLANKTON.....................................................................................79<br />
Vježba 1: Prepoznavanje glavnih skupina zooplanktona............................................80<br />
Vježba 2: Kvalitativno uzorkovanje i determinacija zooplanktona...............................83<br />
Vježba 3: Kvantitativno uzorkovanje i determinacija zooplanktona.............................85
Vježba 4: Odreñivanje raznolikosti zajednica.............................................................86<br />
3. MAKROZOOBENTOS...........................................................................................................87<br />
3.1. Selekcija mjesta uzorkovanja..........................................................................................97<br />
3.2. Metode uzorkovanja .......................................................................................................97<br />
3.3. Procjena biomase <strong>bentos</strong>a ...........................................................................................102<br />
3.4. Odreñivanje kvalitete vode pomoću organizama indikatora ...........................................103<br />
3.4.1. Biološka procjena onečišćenja tekućih voda ......................................................103<br />
3.5. Raznolikost zajednica...................................................................................................106<br />
3.6. VJEŽBE - MAKROZOOBENTOS..................................................................................110<br />
Vježba 1. Uzimanje uzoraka <strong>bentos</strong>a i determinacija...............................................112<br />
Vježba 2. Odreñivanje mase i brojnosti vrsta...........................................................112<br />
Vježba 3: Biotički bodovni indeks ............................................................................113<br />
Vježba 4: Family biotic indeks.................................................................................116<br />
Vježba 5. Pantle – Buckov indeks saprobnosti ........................................................118<br />
Vježba 6. Indeks raznolikosti...................................................................................120<br />
Vježba 7: Simpsonov indeks raznolikosti.................................................................121<br />
Vježba 8: Shanen Wienerov indeks raznolikosti ......................................................122<br />
Vježba 9: Indeks sličnosti po Sorenesenu i Jaccardov indeks..................................123<br />
4. SEMINARSKI RADOVI........................................................................................................124<br />
5. LITERATURA......................................................................................................................127<br />
6. INDEKS ..............................................................................................................................130
1. UVOD<br />
Slatke vode naseljava veliki broj biljnih i životinjskih organizama, koji su usko<br />
vezani na odreñene životne prostore u kojima vladaju odreñeni ekološki uvjeti.<br />
Prema načinu života živi svijet u vodama dijelimo na nekoliko grupa:<br />
- <strong>Plankton</strong>- organizmi koji lebde u vodi i čija vlastita snaga nije dovoljna da se<br />
odupru strujanju vode<br />
- Nekton – snagom vlastitih mišića se mogu oduprijeti strujanju vode (ribe)<br />
- Neuston – naseljavaju područje napetosti mirnih voda<br />
- Perifiton – organizmi koji se prihvaćaju za razne predmete u vodi, kao i za<br />
biljke<br />
- Stigoritron ili psamon – zajednica organizama koji žive u području 1-4 m<br />
(intersticijal) od obale, a obala je redovito navlaživana vodom<br />
- Bentos – zajednica organizama koji naseljavaju bental<br />
U ovoj skripti proučavanja ćemo usmjeriti na plankton, u koji ćemo uvrstiti i sitnije<br />
perifitonske organizme i <strong>bentos</strong>.<br />
<strong>Plankton</strong> je jedna od najvažnijih grupa vodenih organizama. Sačinjavaju ga biljni i<br />
životinjski organizmi, koji su vidljivi najčešće pod lupom ili mikroskopom. Ti<br />
organizmi lebde slobodno u vodi ili bar aktivni dio svog životnog ciklusa provode<br />
na taj način. <strong>Plankton</strong>ski organizmi crpe iz vodene sredine sve što im je za život<br />
potrebno, a isto tako ispuštaju u vodu produkte svog metabolizma. <strong>Plankton</strong> je<br />
jedan od odlučujućih faktora na temelju kojih možemo ocijeniti produktivnost<br />
neke vode. On reagira kvalitativno i kvantitativno na svaku promjenu hranidbene<br />
baze vodene sredine, a isto tako i na fizikalna i kemijska svojstva vode. U<br />
ribnjacima počevši od primarne produkcije preko fitoplanktona razvija se<br />
produkcioni lanac koji konačno dovodi do prirasta ribljeg mesa. <strong>Plankton</strong>ski<br />
organizmi većinom nemaju posebne ureñaje za plivanje, a ako ih imaju, ti ureñaji<br />
nisu toliko snažni da bi se mogli suprotstaviti malo jačem gibanju vodene sredine.<br />
2
Bentos predstavlja zajednicu organizama, koji su vezani za podlogu, bilo obalu ili<br />
dno. Kretanje im je neznatno, a ovisnost o podlozi velika. Ona im služi ne samo za<br />
kretanje ili učvršćivanje, već i kao izvor hrane, mjesto za razmnožavanje, skrovište.<br />
Svaki raspoloživi supstrat može biti adekvatno stanište za <strong>bentos</strong> uključujući<br />
vodeno bilje, korijenje vodenog bilja i drveća, otpalo lišće i ostatke biljnog materijala,<br />
mulj, pijesak, obraštaj na kamenju, pa čak i predmeti koji se nalaze u vodi. Bentosni<br />
organizmi su vrlo važni u hranidbenoj mreži svih organizama koji žive u vodenom<br />
mediju, pa tako i riba. Mnoge vrste važne su za preradu organskog materijala i<br />
kruženje tvari u prirodi. Prisutni su u svim tipovima staništa, a reagiraju na širok<br />
spektar potencijalnih zagañivača vodenog medija. Zbog toga se <strong>bentos</strong> koristi i kao<br />
pouzdan pokazatelj kvalitete vode. Naime, promjene fizikalnih i kemijskih osobina<br />
mogu biti presudne za biomasu i biodiverzitet <strong>bentos</strong>a. Studije o varijabilnosti<br />
zajednica u rijekama pokazuju da fizikalne promjene i stres značajno utječu na<br />
strukturu zajednica koje ondje žive.<br />
3
2. PLANKTON<br />
Prema načinu života planktonske organizme možemo svrstati u dvije skupine:<br />
1. dolaze isključivo i sa odreñenom pravilnošću u vodenoj sredini kao njeni stalni<br />
stanovnici<br />
2. cijeli životni ciklus ili aktivni dio tog ciklusa provode u vodi dok razvojni stadiji<br />
ne moraju uvijek biti u vodi.<br />
Prema veličini plankton se dijeli na:<br />
- mezoplankton – organizmi veličine preko 500 mikrona, koji se vide prostim<br />
okom. Ovdje spadaju veći organizmi iz skupine Cladocera i Copepoda kao i<br />
neke kolonijalne alge<br />
- mikroplankton – organizmi čija se veličina kreće od 60-500 mikrona. Tu<br />
pripada većina planktonskih alga kao i sitniji planktonski organizmi<br />
životinjskog porijekla<br />
- nanoplankton – organizmi veličine 5-60 mikrona<br />
- filtroplankton – to su organizmi manji od 5 mikrona. To su u pravilu razne<br />
bakterije<br />
Prve dvije grupe planktona mogu se loviti pomoću planktonskih mreža, dok treća<br />
i četvrta grupa moraju biti filtrirani kroz guste filtere ili centrifugirani.<br />
Faktori koji utječu na kvalitativni i kvantitativni razvitak planktona su:<br />
- položaj vodene sredine u odnosu na djelovanje uvjeta<br />
- brzina protočnosti vode<br />
- gibanje vode pod utjecajem vjetrova<br />
- temperatura vode koja veoma snažno djeluje na brzinu razmnožavanja<br />
planktonskih organizama. Svaki organizam ima odreñeni termički optimum.<br />
Euritermični planktonski organizmi podnose široka kolebanja temperatura, za<br />
razliku od stenotermičnih čija tolerantna termička kolebanja nalaze se unutar<br />
uskih granica.<br />
4
- Svjetlo – je faktor neophodan za autotrofno bilje. Radi toga fitoplankton dolazi<br />
u pravilu u osvijetljenim dijelovima. Za razliku od njega zooplankton se sklanja<br />
od prejakog svjetla i preko dana se u pravilu povlači u dublje slojeve vode.<br />
- Fizikalni i kemijski faktori<br />
2.1. Fitoplankton<br />
Fitoplankton raste ciklično, u odreñenim periodičnim razmacima. Prva masovnija<br />
pojava fitoplanktona odvija se u proljeće pojavom jačeg sunčeva osvjetljenja.<br />
Životni ciklus svake vrste ovisan je o dostupnim hranjivima, stupnju termalne<br />
stratifikacije, prisutnošću zooplanktona, meñualgalnom kompeticijom i<br />
prisutnošću parazita (protozoa, gljiva, bakterija i virusa). Da bi dohvatile izvore<br />
hranjivih tvari, neke vrste mogu se kretati plivanjem ili mijenjati gustoću stanica<br />
koja im omogućava da dohvate nove izvore hranjiva. Druge vrste rastu brzo ili se<br />
odjednom razmnože masovno, kako bi se održale uslijed hranjenja<br />
zooplanktona. Ishrana zooplanktona algama, odgaña vrijeme maksimalne<br />
gustoće alga i može promijeniti sastav vrsta u korist nekih kojim se ostale vrste u<br />
hranidbenoj niši ne hrane, kao što su modrozelene alge.<br />
Holoplankton, jedan dio života provodi aktivno u planktonu (ostali dio provodi u<br />
sedimentu), uključuje alge kao što su diatome Aristonella, Fragilaria ili Tabellaria.<br />
One su dominantne u proljetnom periodu u mnogim produktivnim jezerima jer<br />
rastu brže nego ostale alge. Meñutim, ako se u jezeru razviju predatorne gljive,<br />
intenzivan rast zooplanktona ili protozoa, razvoj spomenutih diatoma bit će<br />
usporen. Usporen razvoj imat će i nakon termalne stratifikacije jer će nutrienti<br />
potrebni za njihov razvoj biti rjeñi u epilimnionu.<br />
Meroplankton, koji je samo povremeno prisutan u planktonu, uključuje diatome<br />
kao što je Melosira. U dimiktičkim jezerima prisutna je u velikom broju zimi.<br />
Nakon termičke stratifikacije, u jesen, žive stanice koje su preživjele u sedimentu<br />
jezera, dižu se na površinu i uzrokuju pojavu zimske populacije. Proljetnom<br />
5
termičkom stratifikacijom tone na dno i ostaje u sedimentu sve do jeseni.<br />
Meroplanktonske modrozelene alge mogu uzrokovati masovne pojave u toplim<br />
jezerima ljeti i u jesen. Tu se ubrajaju Aphanizomenon, Anabaena i Microcystis.<br />
One rastu sporije nego diatome na niskim temperaturama, ali pri višim<br />
temperaturama dijele se puno brže. One imaju sposobnost plutati na površini, pa<br />
na taj način zasjenjuju ostale alge koje bi mogle biti u kompeticiji. Mnoge<br />
modrozelene alge imaju sposobnost uzimati hranjiva koja se nalaze u niskim<br />
koncentracijama u vodi, kao što su fosfati ili amonijak. Nekoliko vrsta iz roda<br />
Aphanizomenon može fiksirati i atmosferski dušik. Ostale skupine alga nemaju tu<br />
sposobnost. Kako velike kolonije rastu brže nego jednostanične filamentne alge,<br />
tako one i nestaju brže. Vrlo brzo će nestati njihova masovna pojava ako nemaju<br />
nekog od potrebnih hraniva, pojavom parazitskih gljiva ili pojavom virusa.<br />
Dinoflagelati, kao što su Peridinium ili Ceratium, rastu najbrže ljeti i u jesen jer<br />
mogu aktivno plivati prema najprihvatljivijem izvoru svjetlosti i izvoru hranjiva.<br />
Ove alge su pozitivno fototaksične i mogu uzrokovati crveno smeñe prevlake na<br />
površini vode. Njihova populacija opasti će pojavom zooplanktona koji se njima<br />
hrane, kompeticijom ostalih alga ili mogućim nedostatkom hranjiva.<br />
Prostorna distribucija fitoplanktona je promjenjiva i važi za sve skupine alga.<br />
Osobine nekog jezera, kao što su boja, prozirnost, okus, biomasa zooplanktona<br />
ili ribe, ovisi o stupnju razvoja fitoplanktonskih vrsta u dotičnoj vodi.<br />
6
SISTEMATIKA<br />
Alge možemo sistematizirati na slijedeći način:<br />
Koljeno Razred<br />
Cyanophyta (=Cyanobacteria)<br />
Rhodophyta<br />
Heterokontophyta<br />
Haptophyta (=Prymnesiophyta)<br />
Cryptophyta<br />
Dinophyta<br />
Chlorophyta<br />
Chrysophyceae<br />
Parmophyceae<br />
Xanthophyceae<br />
Bacillariophyceae<br />
(=Diatomophyceae)<br />
Raphidophyceae<br />
Dictyochophyceae<br />
Phaeophyceae<br />
Prasinophyceae<br />
Chlorophyceae<br />
Ulvophyceae<br />
Cladophorophyceae<br />
Bryopsidophyceae<br />
Dasycladophyceae<br />
Trentepohliophyceae<br />
Klebsormidiohyceae<br />
Zygnematophyceae<br />
Charophyceae<br />
Boja algi varira od crvene do tamno ljubičaste, što je rezultat mješavine različitih<br />
pigmenata koji se nalaze u citoplazmi, povezani sa membranama, ili slobodno<br />
leže u vakuolama. Nazivi pojedinih odjela i klasa algi potiću od njihove boje:<br />
Cyanophyta (modrozelene alge), Rhodophyta (crvene alge), Chrysophyceae<br />
(zlatnosmeñe alge), Phaeophyceae (smeñe alge), Chlorophyta (zelene alge).<br />
Vrsta i kombinacija fotosintetskih pigmenata predstavljaju značajan taksonomski<br />
karakter:<br />
7
• Cyanophyta: klorofil a, fikocijanin, alofikocijanin, fikoeritrin, fikobilizomi,<br />
beta karoten, zeaksantin, ehinenon, kantaksantin, miksoksantofil,<br />
oscilaksantin.<br />
• Rhodophyta: klorofil a, fikocijanin, alofikocijanin, fikoeritrin, fikobilizomi,<br />
alfa i beta karoten, zeaksantin.<br />
• Chrysophyceae: klorofil a, c1, c2, beta karoten, fukoksantin.<br />
• Xanthophyceae: klorofil a, beta karoten, diatoksantin, diadinoksantin,<br />
voserijaksantin, heteroksantin.<br />
• Bacillariophyceae: klorofil a, c1, c2, c3, beta karoten, fukoksantin,<br />
diatoksantin, diadinoksantin.<br />
• Raphidophyceae: klorofil a, c1, c2, beta karoten, fukoksantin,<br />
diadinoksantin.<br />
• Dictiochophyceae: klorofil a, c2, beta karoten, fukoksantin.<br />
• Phaeophyceae: klorofil a, c1, c2, c3, beta karoten, violaksantin,<br />
fukoksantin.<br />
• Haptophyta: klorofil a, c1, c2, beta karoten, fukoksantin, diatoksantin,<br />
diadinoksantin.<br />
• Cryptophyta: klorofil a, c2, fikocijanin, alofikocijanin, alfa karoten,<br />
aloksantin.<br />
• Dinophyta: klorofil a, c1, c2, beta karoten, fukoksantin, diatoksantin,<br />
diadinoksantin, peridinin.<br />
• Chlorophyta: klorofil a, b, beta karoten, lutein, violaksantin, neoksantin.<br />
8
KOLJENO: CYANOPHYTA – MODROZELENE ALGE<br />
Koljeno Cyanophyta pripada carstvu Eubacteria, koji zajedno sa Arcahebacteria<br />
čine Prokaryota. Modrozelene alge se mogu razmnožavati samo nespolno.<br />
Koljeno Cyanophyta obuhvaća oko 150 rodova i 2000 vrsta koje žive u slatkim<br />
vodama i morima, na vlažnom tlu, kao i na ekstremnim staništima kao što su<br />
glečeri, pustinje i vrući izvori. Većina ovih algi živi u slatkim vodama.<br />
Modrozelene alge često se mogu naći u fitoplanktonu stajaćih ili sporotekućih<br />
voda. U umjerenim jezerima one stvaraju guste populacije tek nakon što doñe do<br />
stratifikacije vode krajem proljeća, kada se iznad hladne vode (hipolimnion) stvori<br />
sloj tople, manje guste vode (epilimnion). U kasno proljeće ili rano ljeto dolazi do<br />
rasta populacija filamentoznih formi, kao sto su vrste rodova Anabaena ili<br />
Aphanizomenon, dok se u ljeto javljaju kolonijalne vrste kao sto je Microcystis<br />
aeruginosa<br />
Slika 1. Aphanizomenon sp.(A), Anabaena sp. (B), i Mycrocystis sp.(C).<br />
Neke vrste, a posebno one koje sadrže plinske vakuole u svojoj stanici često<br />
stvaraju debeli sloj na površini jezera. Ovaj fenomen označava se kao “cvjetanje<br />
vode”. Crvena alga, Oscillatoria rubescens može obojiti vodu u krvavo crvenu<br />
boju u eutrofnim jezerima, što je zabilježeno u 19. stoljeću u Švicarskoj, u<br />
jezerima oko Alpa, kao rezultat zagañenja otpadnim vodama. Anabaena flos-<br />
aquae, i vrste roda Aphanizomenon (Slika 1a I 1b) uzrokuju cvjetanje u slatkim<br />
vodama.<br />
Anabaena flos-aquae i Aphanizomenon flos-aquae proizvode jake otrove<br />
(anatoksin i saksitoksin), koji spadaju u skupinu alkaloida. Microcystis aeruginosa<br />
(Slika 1c) uzrokuje nekrozu i hemoragiju jetre. Potrebno je istaknuti da su unutar<br />
.<br />
9
Slika 2. Oscillatoria sp.<br />
ovih vrsta toksični samo neki sojevi, dok u<br />
okviru vrste Anabaena flos-aquae različiti<br />
sojevi proizvode različite tipove toksina<br />
(anatoksin a, b, c). U plitkim vodama oko<br />
rubova zagañenih jezera i kanala<br />
sedimenti su često prekriveni debelim<br />
slojem <strong>bentos</strong>nih, filamentoznih<br />
modrozelenih algi, posebno iz roda<br />
Oscillatoria (Slika 2).<br />
U gornjem dijelu morske zone plime i oseke često postoji tamna horizontalna<br />
traka na stijenama koju stvaraju EPILITSKE modrozelene alge. Ovdje spadaju<br />
vrste rodova Gloeocapsa i Pleurocapsa (Slika 3).<br />
Slika 3. Gloeocapsa sp. (a) i Pleurocapsa sp. (b)<br />
Tamo gdje su stijene od krečnjaka ili krede, modrozelene alge žive većinom<br />
unutar stijena, jer neke vrste mogu prodrijeti u kalcij karbonat. Ove vrste se<br />
nazivaju ENDOLITSKE alge. U koraljnim grebenima može se naći endolitska<br />
vrsta Mastigocoleus testarum. Ova alga fiksira atmosferski N2 pomoću<br />
heterocista i na taj način obogaćuje oligotrofne ekosisteme koraljnih grebena.<br />
10
KLASIFIKACIJA<br />
Modrozelene alge se dijele na razrede:<br />
- Chroococcophyceae<br />
- Chamaesiphonophyceae<br />
- Hormogoniophyceae<br />
Razred Hormogoniophyceae obuhvaća najveći broj vrsta, a diferencira se na<br />
četiri reda : Stigonematales, Mastigocladales, Nostocales i Oscillatoriales.<br />
Razred:Chroococcophyceae<br />
Red: Chroococcales<br />
Obuhvaća slijedeće rodove: Cyanothece, Aphanothece, Merismopedia (Slika<br />
4a), Chroococcus (Slika 4b), Gloeocapsa (Slika 3a), Microcystis (Slika 1c).<br />
Slika 4. Merismopedia sp. (a) i Chroococcus sp.(b).<br />
Red: Chamaesiphonales<br />
Predstavnici: Chamaesiphon (Slika 5)<br />
Slika 5. Chamaesiphon sp.<br />
11
Red: Pleurocapsales<br />
Predstavnici: rod Cyanocystis, Pleurocapsa<br />
Razred: Hormogoniophyceae<br />
Red: Oscillatoriales<br />
Predstavnici: rod Oscillatoria (Slika 6a), rod Lyngbia (Slika 6b), rod Microcoleus<br />
(Slika 6c)<br />
Slika 6. Oscillatoria sp. (a), Lyngbia sp. (b) i Microcoleus sp. (c).<br />
Red: Nostocales<br />
Predstavnici: Nostoc sp. (Slika 7), Anabaena sp. (Slika 8), Aphanizomenon sp.<br />
(Slika 9), Scytonema sp., Rivularia sp.<br />
Slika 7. Izgled kolonije modrozelene alge - Nostoc sp<br />
12
Red: Stigonematales<br />
Predstavnik: Stigonema<br />
Slika 8. Vrste roda Anabaena<br />
Slika 9. Aphanizomenon flos-aquae<br />
13
KOLJENO: RHODOPHYTA – CRVENE ALGE<br />
Crvene alge žive većinom u morima, a samo nekoliko vrsta nalazi se u slatkim<br />
vodama.<br />
KOLJENO: HETEROKONTOPHYTA<br />
CHRYSOPHYCEAE – ZLATNOSMEðE ALGE<br />
Opisano je više od tisuću vrsta u oko 200 rodova. One su uglavnom ograničene<br />
na slatkovodna staništa, a samo nekoliko vrsta nañeno je u brakičnim vodama i<br />
moru. Slatkovodne vrste naročito su zastupljene u oligotrofnim jezerima (slabo<br />
kiselim do neutralnim). Kao dio morskog nanoplanktona ove alge igraju značajnu<br />
ulogu u primarnoj produkciji.<br />
Klasifikacija zlatnosmeñih algi izvršena je na osnovi pet različitih tipova stanične<br />
grañe. Ova podjela je nepotpuna jer je npr. flagelatni tip organizacije često<br />
filogenetski heterogen. Izdvojeno je sedam redova u okviru razreda<br />
Chrysophyceae:<br />
PARMOPHYCEAE<br />
o Ochromonadales (jednostanični i kolonijalni bičaši),<br />
o Mallomonadales (bičasi sa kremenim segmentima - Synura),<br />
o Pedinellales (jednostanični bičaši sa radijalnom simetrijom),<br />
o Chrysamoebidales (ameboidne alge),<br />
o Chrysocapsales (želatinozne),<br />
o Chrysosphaerales (kuglaste),<br />
o Phaeothamniales (nitaste i talusne).<br />
Ove alge su značajna komponenta nanoplanktona (plankton promjera 2-20 um) u<br />
antarktičkim vodama i subarktičkom dijelu Pacifika.<br />
14
XANTHOPHYCEAE<br />
Poznato je oko 600 vrsta unutar 100 rodova. Jednostanične i kolonijalne vrste su<br />
dio fitoplanktona jezera i ribnjaka, a rjeñe ih nalazimo u morima. Neke vrste su<br />
prilagoñene životu u čistim vodama, dok vrste roda Ophiocytium naseljavaju<br />
zagañene vode.<br />
Ove alge rijetko rastu u većim skupinama, a iznimka su vrste roda Tribonema i<br />
Vaucheria.<br />
Tribonema (Slika 10) se nalazi u jezerima za hladnijeg dijela godine (brojne su u<br />
močvarama s dosta ptičjeg izmeta). Vrste roda Vaucheria (Slika 11) žive u<br />
vlažnoj zemlji, slatkim i boćatim vodama gdje formiraju baršunaste naslage<br />
(stabilizacija sedimenta).<br />
Ovaj razred obuhvaća slijedeće redove:<br />
- Chloramoebales<br />
- Rhizochloridales<br />
- Heterogloeales<br />
- Mischococcales<br />
- Tribonematales<br />
- Botrydiales<br />
- Vaucheriales<br />
Slika 10: Tribonema sp.<br />
15
Slika 11: Vaucheria sp.<br />
BACILLARIOPHYCEAE<br />
Bacillariophyceae obuhvaćaju oko 250 rodova s više od 100 000 vrsta (najčešće<br />
alge u prirodi). Ove alge naseljavaju vrlo različita staništa. Podnose temperature<br />
izmeñu 0-50 °C, a optimum je u borealnoj zoni (10-20° C) . Preferiraju područja<br />
slabijeg intenziteta osvjetljenja. U proljeće i jesen dostižu najveću gustoću<br />
populacija. Česte su i u vodama bogatim željezom.<br />
16
Klasifikacija prema van de Hoek et al. 1995. godine obuhvaća:<br />
1. red Pennales (bilateralna simetrija)<br />
2. red Centrales (radijalna simetrija)<br />
Najčešći predstavnici slatkih voda su: Melosira (Slika 12), Cyclotella (Slika 13),<br />
Stephanodiscus, Fragillaria, Synedra (Slika 14), Asterionella (Slika 18),<br />
Tabellaria (Slika 16), Diatoma (Slika 15), Coconeis (Slika 17), Gomphonema,<br />
Navicula, Cymbella, Pinnularia, Nitzschia, Surirella…<br />
Slika 12. Melosira varians<br />
Slika 13. Cyclotella<br />
comensis<br />
Slika 14. Synedra ulna Slika 15. Diatoma vulgare<br />
Slika 16. Tabellaria fenestrata Slika 17. Coconeis sp.<br />
17
Slika 18. Asterionella Formosa<br />
RAPHIDOPHYCEAE<br />
Ove alge su slatkovodni i morski organizmi koji su svrstani u devet rodova.<br />
Slatkovodne vrste nastanjuju uglavnom kiselije vode, dok morske, kao sto je npr.<br />
rod Fibriocapsa uzrokuje tzv. “crvenu plimu” tj. masovno cvjetanje čija toksičnost<br />
pravi probleme u uzgoju riba.<br />
18
DICTIOCHOPHYCEAE<br />
Nazivaju ih fosilnim silikoflagelatima jer su poznati od prije 120 miliona godina.<br />
Naseljavaju hladna mora ili umjerena u hladnije doba godine (njihova prisutnost u<br />
sedimentu je dobar indikator temperature!)<br />
PHAEOPHYCEAE<br />
Sve vrste su višestanične <strong>bentos</strong>ne morske alge, osim predstavnika rodova<br />
Pleurocladia, Lithoderma i Bodanella koje žive u slatkim vodama.<br />
Razred Phaeophyceae koja obuhvaća oko 1500-2000 vrsta iz oko 265 rodova i<br />
14 redova, naseljava iste prostore kao i crvene alge. U sjevernom Atlantiku i<br />
Pacifiku krupne smeñe alge gusto naseljavaju zonu plime i oseke, gdje su česti<br />
pojasevi predstavnika reda Fucus, dok se dublje nalaze “šuma” vrsta roda<br />
Laminaria (primarna produkcija ovih područja je vrlo velika i iznosi oko 1-2 kg<br />
C/m 2 godišnje). Po veličini su daleko najimpresivnije populacije velike alge<br />
Macrocystis i Nereocystis koje submerzno rastu na Pacifiku (uz obale Sjeverne<br />
Amerike) i na dubinama izmeñu 30 i 60 m.<br />
Novija klasifikacija rasporedjuje Phaeophyceae u 14 redova. Neki autori ih dijele<br />
u 3 podrazreda: - Isogeneratae (Ectocarpales, Sphacelariales, Cutleriales,<br />
Dictyotales), - Heterogeneratae (Laminariales), - Cyclosporae (Fucales).<br />
KOLJENO: HAPTOPHYTA<br />
Postoji oko 500 vrsta svrstanih u 75 rodova. One imaju važnu ulogu u primarnoj<br />
produkciji oceana (uglavnom pripadaju nanoplanktonu). Putem fosilnih<br />
kokolitoforida možemo odrediti starost u geologiji (obilno su razvijeni posebno u<br />
juri!). Kokolitoforidi, uz dinoflagelate čine populacije karakteristične za tropske i<br />
suptropske regije, i karakteristično “cvjetaju”.<br />
Haptophyta su svrstane u četiri reda (Van de Hoek et al,. 1995):<br />
Prymnesiales, Isochrysidales, Coccolithophorales i Pavlovales.<br />
19
KOLJENO: CRYPTOPHYTA<br />
Predstavnici ovog koljena podjednako su zastupljeni u slatkim i slanim vodama<br />
(uglavnom planktonske). Poznato je oko 100 slatkovodnih i 100 morskih vrsta<br />
rasporeñenih u 12 rodova. One naseljavaju uglavnom plitke stajaće vode.<br />
Cryptomonas curvata je karakteristična za zagañene vode, dok vrsta<br />
Cryptomonas platyuris naseljava čiste, posebno jezerske vode. Cryptomonas<br />
ovata je slatkovodna planktonska vrsta (Slika 19).<br />
Slika 19. Cryptomonas ovata<br />
20
KOLJENO: DINOPHYTA<br />
Koljeno Dinophyta obuhvaća više od 2000 živućih i 2000 fosilnih vrsta svrstanih u<br />
oko 130 rodova. Većina vrsta su jednostanični flagelati koji žive u površinskim,<br />
kako u morskim tako i u slatkim i brakičnim vodama.<br />
Tipični su za populacije toplih mora u tropima cijelu godinu, dok u umjerenim<br />
morima maksimalna gustoća populacija ovih vrsta javlja se u proljeće i ljeto.<br />
Dinophyta su osobito zastupljene u neritičkim (oablnim) vodama. Većina<br />
Dinophyta su planktonski organizmi.<br />
Klasifikacija dinofita (prema Dodge-u)<br />
Gymnodiniales Noctilucales<br />
Gloediniales Blastodinales<br />
Thoracosphaerales Syndinales<br />
Phzyodinales Peridinales<br />
Dinotrichales Dinophysales<br />
Dinamoebidales Prorocentales<br />
Glavni predstavnici su rodovi Peridinium, Protoperidinium, i Ceratium (Slika 20)<br />
Slika 20. Ceratium hirundinella<br />
21
KOLJENO: CHLOROPHYTA<br />
Koljeno Chlorophyta obuhvaća oko 500 rodova sa oko 8 000 vrsta koje većinom<br />
žive u slatkim vodama, a brojne su morske i terestrične vrste.<br />
Svi predstavnici porodica Zygnematophyceae, i Charophyceae, kao i većina<br />
vrsta iz porodice Chlorophyceae ograničeni su samo na slatke vode. Svi<br />
predstavnici porodica Ulvophyceae, Cladophorophyceae, Bryopsidophyceae, i<br />
Dasicladaceae isključivo su morski organizmi.<br />
PRASINOPHYCEAE<br />
Ovdje spadaju slobodnoživuće, flagelatne zelene alge. Ove alge žive u morima i<br />
slatkim vodama<br />
CHLOROPHYCEAE<br />
Predstavnici ove porodice imaju različit nivo organizacije. Neke su<br />
slobodnoživući bičaši, bilo jednostanični (monade) ili kolonijalni; ostali su kokoidi<br />
ili palmeloidi, te nepokretni; ostali su višestanični (filamentozni ili talozni); a neke<br />
su sifonalne grañe.<br />
Red: Volvocales<br />
Ovaj red obuhvaća jednostanične i kolonijalne flagelate svrstane u 110 rodova sa<br />
gotovo 1 000 vrsta. Ogromna većina živi u slatkim vodama, a nekoliko i na kopnu<br />
i u morima. Nekoliko vrsta može se naći na snijegu. Vode bogate nitratima,<br />
amonijakom i fosfatima su posebno bogate vrstama ovog roda. Vrlo su česte u<br />
eutrofičnim vodama i organski zagañenim vodama.<br />
Jednostanični predstavnici ovog reda su:<br />
Chlorogonium, Hyalogonium, Chlorogonium, Diplostauron, Polytoma,<br />
Brachiomonas<br />
22
Kolonijalni predstavnici ovog reda su:<br />
Stephanosphaera, Gonium, Eudorina, Volvox<br />
Red: Chlorococcales<br />
Većina vrsta roda Chlorococcum živi u slatkim vodama, u <strong>bentos</strong>u. Neke vrste<br />
mogu preživjeti ekstremne uvjete. Rod Chlorella obuhvaća oko 10 vrsta. Živi u tlu<br />
i slatkim vodama, te kao endosimbiont u beskralježnjacima (spužve i<br />
Paramecium). Vrste roda Chodatella žive u planktonu bara i jezera. Rod Oocystis<br />
ima elipsoidne stanice. Vrste iz roda Scenedesmus (Slika 21) česte su u slatkim i<br />
brakičnim vodama. Opisano je vise od 100 vrsta i varijeteta.<br />
Red: Hydriodictyon<br />
Slika 21. Scenedesmus sp.<br />
Hydryodictyon reticulatum (Slika 22) je kolonijalna alga koja stvara velike<br />
cilindrične mreže duge oko 20 cm. Pojedinačne stanice su cilindrične i duge do 1<br />
cm, a na svakom kraju povezane su sa druge dvije stanice. Vrste roda<br />
Pediastrum (Slika 23) su vrlo česte, posebno u slatkim vodama obogaćenim<br />
hranjivima. Žive u planktonu i izmeñu makrofita. Ostali filamentozni rodovi su:<br />
Geminella, Binuclearia, i Radiofilum. Vrste roda Sphaeroplea formiraju<br />
nerazgranjene, slobodno plutajuće filemente, koji se sastoje od izduženih,<br />
cilindričnih stanica, dugih do nekoliko cm.<br />
23
Slika 22. Hydrodiction sp.<br />
Red: Oedogoniales<br />
Slika 23. Pediastrum boryanum<br />
Svi predstavnici su filamentozni i mogu biti razgranjeni ili nerazgranjeni. Svaka<br />
stanica sadrži mrežasti kloroplast u kojem se nalaze brojni pirenoidi.<br />
ULVOPHYCEAE<br />
Ova porodica obuhvaća oko 35 rodova i 265 vrsta. Najveći broj vrsta su morske<br />
ili brakićne. Samo nekoliko vrsta živi u slatkim vodama, meñu kojima je i Ulothrix<br />
zonata i neke vrste roda Enteromorpha.<br />
CLADOPHOROPHYCEAE<br />
Ova porodica uključuje slatkovodne i morske vrste koje naseljavaju umjerena i<br />
tropska mora. Većina vrsta raste pričvršćena za stjenovitu podlogu, dok neke<br />
stvaraju veliku, slobodno plutajuću masu u stajaćim, eutrofnim vodama (lagune i<br />
bare).<br />
Cladophora glomerata (Slika 24) je vrlo česta slatkovodna alga koja raste na<br />
stijenama i drugom čvrstom supstratu u eutrofnim vodama, odmah ispod<br />
površine vode.<br />
Ova porodica obuhvaća rodove: Chaetomorpha, Rhizoclonium, Struvea, Valonia,<br />
Siphonocladus, i Dictyospaeria<br />
24
Slika 24. Cladophora glomerata<br />
BRYOPSIDOPHYCEAE<br />
Ova porodica obuhvaća uglavnom morske predstavnike.<br />
DASICLADOPHYCEAE<br />
Ova porodica obuhvaća samo morske predstavnike.<br />
TRENTEPOHLIOPHYCEAE<br />
Obuhvaća 4 roda sa oko 60 vrsta. Vrste roda Trentepolia rastu na stijenama i<br />
stablima, pa ćak i na listovima drveća. Vrlo često su žute ili narančaste boje. Ove<br />
alge su čest fikobiont u lišajevima. Ostali rodovi, kao što je to Cephalorus, rastu<br />
na listovima viših biljaka u tropskim i suptropskim krajevima. Ove alge uzrokuju<br />
značajne štete ekonomski značajnim vrstama kao sto je čaj, kava, limun, i druge<br />
vrste.<br />
KLEBSORMIDIOPHYCEAE<br />
Rod Raphidonema uključuje 20 vrsta koje žive u slatkim vodama, ili na površini<br />
ledenjaka i snijega.<br />
25
ZYGNEMATOPHYCEAE<br />
Poznato je oko 50 rodova sa 4000 - 6000 vrsta, od kojih su većina jednostanične.<br />
Nañeni su fosili pojedinih vrsta iz rodova koji još uvijek postoje (Spirogyra,<br />
Mougeotia, Zygnema), u karbonu, prije 300 miliona godina (Slika 25, 26, 27).<br />
Red: Zygnematales<br />
Jednostanične ili filamentozne alge. Poznato je oko 18 rodova sa 900 vrsta koje<br />
nastanjuju slatke vode, iako neke (Zygonium) rastu na vlažnom tlu. Većinom žive<br />
na dnu bara, kanala ali i u planinskim potocima.<br />
Kod vrsta roda Mougeotia svaka stanica sadrži jedan aksialni pločasti kloroplast<br />
sa nekoliko pirenoida, koji mijenjaju svoj položaj u stanici u odnosu na svjetlo.<br />
Poznato je oko 125 vrsta koje žive u slatkim vodama. Zygnema sadrzi dva<br />
zvjezdasta aksialna kloroplasta koji nose po jedan pirenoid. Poznato je oko 140<br />
vrsta koje se javljaju u slatkim vodama.<br />
Slika 25. Spirogyra sp.<br />
Slika 26. Mougeotia sp.<br />
Slika 27. Zygnema sp.<br />
26
Jednostanični predstavnici reda Zygnematales su svrstani u rodove: Spirotaenia,<br />
Cylindrocystis, i Netrium.<br />
Red: Desmidiales<br />
Ovaj red obuhvaća oko 30 rodova sa 5000 vrsta. Ovo su posebno lijepe alge<br />
koje su posebno brojne u slatkim vodama sa pH 4-7. Vrste roda Cosmarium<br />
imaju polukružne, poluelipticne ili trapezoidne stanice sa ravnim krajevima. Ovaj<br />
rod je vrlo bogat vrstama i do sada je opisano oko 1000 vrsta.<br />
Closterium ima savijene stanice, koje su zašiljene na krajevima. U Europi je<br />
pronañeno 85 vrsta koje rastu u kiselim ali i u alkalnim vodama. Pleurotaenium<br />
ima cilindrične stanice. U red Desmidiales spadaju još i rodovi Cosmocladium,<br />
Xanthidium, Staurastrum, Desmidium, Hyalotheca, Spondylosium, i<br />
Sphaerozosma (Slika 28, 29 i 30).<br />
Slika 28. Cosmarium alpestre<br />
CHAROPHYCEAE<br />
Slika 29. Staurastrum sp.<br />
Slika 30. Desmidium sp.<br />
Većina vrsta raste u prilično mirnim i čistim slatkim vodama, kao sto su kanali,<br />
bare i jezera. Posebno su brojne u tvrdim, alkalnim vodama (pH >7). Neke vrste<br />
su osjetljive na visoke koncentracije fosfata (>20 µg/l) i nestaju iz jezera koja su<br />
zagañena i eutrofična uslijed izlijevanja otpadnih voda, iako je ovo primarno<br />
uzorkovano zasjenjivanjem uslijed obilnog rasta drugih algi. Charales su vrlo<br />
stara skupina algi. Današnji rodovi vode su porijeklom iz mezozoika (prije 130-<br />
200 miliona godina).<br />
27
2.1.2. Metode uzorkovanja fitoplanktona<br />
Uzorci se mogu uzimati za potrebe kvalitativnih i kvantitativnih analiza. Za<br />
potrebe kvalitativnih analiza uzorke fitoplanktona sakupljamo planktonskom<br />
mrežicom. Mreža je izrañena od mlinarske svile, odreñenog promjera oka (Slika<br />
31). Za sakupljanje uzoraka mrežnog fitoplanktona oka ne smiju biti veća od 30<br />
µm.<br />
Uzorci se skupljaju na način da se nekoliko puta planktonska mrežica povuče<br />
kroz vodu, ako se sakupljanje vrši sa obale. Iz čamca ili plovila se sakuplja na<br />
način da se plovilo pomiče a mrežica provlači kroz vodu. Tako sakupljeni uzorci<br />
koriste se kako bi se odredio sastav pojedinih vrsta prisutnog fitoplanktona.<br />
Slika 31. <strong>Plankton</strong>ska mrežica<br />
Nakon što je planktonska mrežica povućena kroz vodu, sva tekućina koja je<br />
sakupljena u kolektoru (metalnom, donjem dijelu mrežice) ispusti se u epruvetu i<br />
fiksira sa 4%-tnim formaldehidom.<br />
Tako pripremljeni uzorci mogu biti analizirani na način da se kap uzorka stavi na<br />
predmetno stakalce i izvrši determinacija bez stavljanja pokrovnog stakalca.<br />
Uzorci za potrebe kvantitativnih analiza se uzimaju sa posebno konstruiranim<br />
bocama i ureñajima, a razlikuju se u tekućim i stajaćim vodama.<br />
28
2.1.2.1. Uzorkovanje u tekućim vodama<br />
2.1.2.1.1. Selekcija mjesta uzorkovanja<br />
Selekcija mjesta uzorkovanja ovisi tipu istraživanja koje će se provoditi.<br />
Ponajprije je potrebno na nekom vodotoku odrediti mjesto uzorkovanja, a nakon<br />
toga pronaći lokaciju na već definiranom mjestu.<br />
Vrlo često mjesta su izabirana uzvodno ili nizvodno na mjestima gdje postoje<br />
neke prepreke ili brane, utjecaj tretiranja kultiviranog bilja ili drugih onečišćavala<br />
te na mjestima miješanja okolnih voda.<br />
Fitoplankton nije tipičan za tekuće vode, već se donosi u riječne tokove dotokom<br />
vode iz okolnih jezera ili stajaćih voda. U tekućim vodama fitoplanktonske<br />
zajednice nisu specifične na pojedinim mjestima već ih voda nosi nizvodno. Da bi<br />
uzeli reprezentativan uzorak, potrebno je uzeti više uzoraka na različitim<br />
lokacijama. Takoñer, potrebno je uzeti uzorke iz lotičkog područja na nekoliko<br />
mjesta. Ako se radi o sporijim i dubljim rijekama, potrebno je uzorke uzeti i na<br />
nekoliko dubina. Na slici 32 moguće je vidjeti primjer izbora mjesta uzorkovanja<br />
na riječnom toku prije brane.<br />
Slika 32: Preporučena mjesta uzorkovanja na tekućoj vodi<br />
29
2.1.2.1.2. Metode uzorkovanja<br />
Metoda uzorkovanja mora garantirati reprezentativan uzorak i treba biti<br />
jednostavna za rad. Metoda će varirati u ovisnosti o tipu riječnog toka. Uglavnom<br />
se preferira metoda uzorkovanja lotičkog područja pomoću opreme koja<br />
omogućuje uzimanje uzoraka na odreñenim dubinama.<br />
Ako se rijeka dobro miješa horizontalno i vertikalno, potrebno je uzeti jedan<br />
uzorak na površini do dubine od ½ m i tako na svakom metru dubine. Time će se<br />
dobiti uvid u raspored fitoplanktonskih zajednica, odnosno vidjet će se da li su oni<br />
prisutni površinski ili na odreñenoj dubini. Takoñer, poželjno je na istom mjestu<br />
uzorkovanja uzeti uzorak sa površine sedimenta, jer se neke vrste planktona<br />
ondje nalaze, ovisno o dobu godine. Takve uzorke trebalo bi uzimati iz čamca sa<br />
Niskin (Slika 33), Van Dorn (Slika 34) ili Nansen bocom (Slika 35).<br />
Slika 33: Niskin boca Slika 34: Van Dorn boca<br />
30
Slika 35: Nansen boca<br />
Ako nismo u mogućnosti uzorke uzeti iz čamca, već smo prisiljeni raditi sa obale,<br />
postoji nekoliko metoda kako to napraviti. Jedna od metoda je da je na štapu<br />
dugom do 3 m obješena boca za uzorkovanje na raznim dubinama. Druga<br />
metoda je da se koristi Taylorov ureñaj za uzimanje uzoraka (Slika 36)<br />
31
Slika 36: Taylorov ureñaj (Hotzel and Croome, 1999)<br />
32
Taylorov ureñaj je konstruiran tako da ga je moguće udaljiti od obale što je dalje<br />
moguće. U bocu se puni voda sa 0,5 do 0,7 m dubine. Kada se voda napuni,<br />
boca se zatvora i tada ga privlačimo ponovo k obali.<br />
Uzimanje uzoraka sa kantom nije preporučljivo. Ako zaronimo kantu na neku<br />
dubinu, ona će se napuniti sa vodom koju trebamo. Meñutim, dok izvlačimo<br />
kantu iz vode, ona voda koja se napunila na početku, izaći će i pomiješati se sa<br />
površinskom vodom. U površinskoj vodi može se nalaziti razni plutajući<br />
neplanktonski materijal.<br />
Ako se voda u rijeci manje miješa ili se radi o sporotekućim vodama, uzorke je<br />
moguće sakupiti sa ½ m dubine iz lotičkog područja i dva uzorka sa svake strane<br />
rijeke. Tako je moguće vidjeti kako je fitoplankton vertikalno rasporeñen u<br />
vodotoku. Takve uzorke je moguće uzimati i sa vrlo jednostavnim Hoseipovim<br />
aparatom (Slika 37).<br />
Slika 37: Hoseipov aparat (Hotzel and Croome, 1999)<br />
33
Hoseipov aparat je sastavljen od prozirne PVC cijevi 25 mm promjera i 2-10 m<br />
dužine, ovisno o dubini riječnog toka. Na kraju se nalazi uteg i špaga. Na prvom<br />
shematskom prikazu vidljivo je da uteg povlači cijev prema dubini i ona se uranja<br />
u vodu vertikalno. Drugi i treći shematski prikaz pokazuje kako se cijev formira u<br />
oblik slova „U“ povlačenjem uzice. Cijev se začepi sa gumenim čepom i izvlači iz<br />
vode. Nakon izvlačenja uzorka, cijev se mora isprati sa čistom vodom, pa tek<br />
onda uzeti drugi uzorak. Ako to radimo iz čamca, potrebno je da čamac miruje,<br />
kako bi se cijev mogla vertikalno položiti u vodu.<br />
Ako se radi o vrlo plitkim rijekama, dubine manje od 2 m, voda se u njima miješa<br />
dnevno. Uzorke iz takvih voda potrebno je uzeti sa ½ m dubine sa<br />
odgovarajućom opremom.<br />
2.1.2.2. Uzorkovanje u jezerima i stajaćim vodama<br />
2.1.2.2.1. Selekcija mjesta uzorkovanja<br />
Izbor mjesta mora biti reprezentativan. Uzorci se trebaju uzimati na mjestima<br />
ulaska i izlaska vode iz jezera, blizu obale gdje nema miješanja vode, na pučini i<br />
to na nekoliko dubina. Ako se radi o velikim površinama, minimalna udaljenost od<br />
pojedinih mjesta bi trebala biti oko 100 m. Uzorci koji se uzimaju sa pučine,<br />
mjesta uzorkovanja trebala bi biti udaljena najmanje 50 m od obale kako bi se<br />
spriječila kontaminacija uzoraka sa <strong>bentos</strong>nim vrstama. Na slici 38 moguće je<br />
vidjeti preporučena mjesta uzorkovanja u velikim jezerima.<br />
Ako se radi o manjim površinama, uzorke je potrebno uzeti sa nekoliko mjesta i<br />
nekoliko dubina da bi se dobio reprezentativan uzorak.<br />
34
Slika 38: Preporučena mjesta uzorkovanja u velikim jezerima (Hotzel and<br />
Croome, 1999)<br />
2.1.2.2.2. Metode uzorkovanja<br />
Vertikalni profil potrebno je uzeti svakih 1 m dubine. Prisutnost stratifikacije se<br />
može vidjeti mjerenjem temperature na nekoliko dubina, jer će se ona odvijati<br />
kada se cijeli stupac vode izjednači na temp. od 4 °C. U praksi to zna či da kada<br />
nema velikih razlika izmeñu površinske temperature i temperature dna (razlika<br />
može biti oko 0,2°C), do ći će do stratifikacije.<br />
Alge nisu jednoliko rasporeñene u vodenom stupcu, njihov raspored ovisi o doba<br />
godine, dubini akvatorija, geografskoj širini i stratifikaciji (Slika 39).<br />
35
Slika 39: Moguća vertikalna distribucija različitih rodova algi u dimiktičkim<br />
jezerima (Hotzel and Croome, 1999)<br />
Prije nego počnemo uzorkovati u dubokim jezerima, potrebno je izmjeriti do koje<br />
dubine se vidi Secchi disk. Smatra se da je eufotična zona 2,5 puta dubine<br />
Secchi diska. Uzorke je potrebno uzimati na svaki metar dubine u cijeloj<br />
eufotičnoj zoni i jedan uzorak iznad sedimenta. U oligotrofnim vodama svaki<br />
uzorak bi se trebao sastojati od 6 l vode, dok je u eutrofnim vodama dovoljna 0,5<br />
do 1 l vode.<br />
Na nešto plićim akvatorijima, ovisno o dubini, napraviti procjenu o broju uzoraka<br />
koji će se uzeti.<br />
Vrlo je važno voditi računa o tipu istraživanja koje se provodi. Ako se provodi<br />
monitoring, tada je potrebno izbjegavati uzimanje uzoraka za vrijeme intenzivnog<br />
razvoja nekih algi tzv. cvjetanje algi. Ali, ako želimo istražiti uzrok masovnih<br />
pojava algi, tada će nam takav materijal biti od koristi. Osim toga, vrlo je važno<br />
obratiti pažnju ako je vjetrovito vrijeme što se naročito odnosi na one alge koje<br />
36
plutaju na površini vode. Takve alge će se u tom slučaju naći na kraju jezera u<br />
smjeru puhanja vjetra. Osim što će biti rasprostranjene na površini vode, naći će<br />
se u velikim koncentracijama i ispod površine.<br />
Uzorci se mogu uzimati sa već prije spomenutim bocama i aparatima (Niskin,<br />
Van Dorn, Nansen, Hoseip).<br />
Ako se uzorci uzimaju iz čamca, potrebno je sa GPS-om označiti točnu poziciju,<br />
da bi se pri slijedećim uzorkovanjima moglo doći na isto mjesto.<br />
2.1.2.3. Učestalost i vrijeme uzorkovanja fitoplanktona<br />
Učestalost uzimanja uzoraka ovisi o brzini rasta organizama za koje se provodi<br />
istraživanje. Općenito se preporuča da to bude barem jedanput tjedno. Time će<br />
se moći vidjeti kako su prisutne vrlo brze promjene u sastavu i abundanci<br />
fitoplanktona. U prirodnim uvjetima, gustoća stanica pojedinih vrsta mogu se<br />
promijeniti za jedan do dva dana.<br />
Ako se radi o masovnim pojavama nekih vrsta, tada bi se uzorkovanje trebalo<br />
provoditi dnevno, jer će se i gustoća stanica vrlo brzo mijenjati.<br />
Takoñer, važno je i u koje doba dana se vrši uzimanje uzoraka. Danju, neke<br />
vrste alga će se dići na površinu, a noću spustiti ispod površine. Preporučljivo je<br />
da se uzorkovanje vrši uvijek u isto doba dana kako bi se rezultati mogli<br />
usporeñivati.<br />
2.1.3. Metode uzorkovanje perifitona<br />
Bentosne alge (perifiton ili fito<strong>bentos</strong>) su primarni producenti i vrlo važni za<br />
hranidbenu mrežu. Zato što su te alge vezane za supstrat, one su podložne<br />
fizikalno kemijskim i biološkim utjecajima. Na taj način mogu biti i pouzdani<br />
indikatori kvalitete vode (Barbour i sur., 1999).<br />
37
Uzorci perifitona uzimaju se za vrijeme stabilnog toka rijeke, odnosno za niskog<br />
vodostaja. Visoki vodostaj može isprati alge sa njihova staništa nizvodno.<br />
Preporučljivo je nakon visokih vodostaja pričekati 3 tjedna da se staništa ponovo<br />
koloniziraju sa algama.<br />
Uzorci perifitona mogu se uzimati sa prirodnih i umjetnih supstrata. Prirodni<br />
supstrati podrazumijevaju uzorkovanje perifitona sa raspoloživih supstrata unutar<br />
lokacije odreñene za uzorkovanje, a umjetni supstrat podrazumijeva stavljanje<br />
predmeta u vodu na kojem se nakon odreñenog perioda čekanja naseli<br />
perifitonska zajednica.<br />
Ako se radi monitoring riječnih tokova, tada je osim analiza perifitona potrebno<br />
raditi i analize fizikalno kemijskih karakteristika vode i <strong>bentos</strong>a.<br />
2.1.3.1. Uzimanje uzoraka sa prirodnih supstrata<br />
Uzorci sa prirodnih supstrata mogu se uzorkovati sa svih raspoloživih supstrata ili<br />
sa reprezentativnih supstrata kao što je krupno kamenje ili oblutice sa plitke i<br />
brze vode iz rijeke.<br />
Za uzorkovanje sa svih supstrata najprije je potrebno odrediti kakav je supstrat<br />
raspoloživ u vodotoku i u kojem postotku. Ako se rade i analize <strong>bentos</strong>a, tada je<br />
potrebno i perifiton uzorkovati sa istih supstrata.<br />
Najprije je potrebno odrediti mikrohabitat. Mikrohabitat je podijeljen na nekoliko<br />
tipova:<br />
- mjesta rijeke sa brzom i dubokom vodom<br />
- mjesta rijeke sa plitkom i brzom vodom<br />
- bazeni<br />
- uzobalno područje<br />
Svaki od ovih tipova staništa imaju karakterističan supstrat. Tako će uzobalno<br />
obično biti prisutno krupno kamenje sa obraštenim biljnim materijalom, dok će u<br />
bazenima vjerojatno biti prisutan šljunak ili pijesak.<br />
38
Osim toga, svjetlost, dubina, supstrat i brzina toka direktno će utjecati na sastav<br />
vrsta perifitona. Promjene u kompoziciji vrsta, često se mogu vidjeti kao<br />
promjene boje i teksture supstrata. Način uzorkovanja pojedinih supstrata može<br />
se vidjeti u slijedećem tabličnom prikazu:<br />
Tip supstrata Tehnika uzorkovanja<br />
Tvrdi pomični supstrat: kamenje,<br />
oblutice, šljunak i komadi drveta<br />
Mekani pomični supstrat: mahovina,<br />
makrofita, manje korijenje<br />
Nepomični veliki supstrati: stijene,<br />
kamena podloga, klade, drvo, korijenje<br />
Mekani sediment: pijesak, mulj, fini<br />
organski materijal, glina<br />
Izvaditi reprezentativne uzorke iz vode,<br />
ostrugati reprezentativnu površinu algi<br />
sa površine i isprati u posudu.<br />
Staviti biljni materijal u bocu sa malo<br />
vode. Odlučno ih promućkati. Odstraniti<br />
biljke iz posude.<br />
Staviti PVC cijev koja je omotana<br />
neoprenom na kraju tako da hermetički<br />
prianja na supstrat. Odstraniti alge<br />
četkicom za zube ili nekim drugim<br />
predmetom. Sa pipetom odstraniti alge<br />
iz cijevi i stavi iu u posudu.<br />
Prevrni petrijevu posudu preko<br />
sedimenta. Ispod zdjelice stavi pljosnat<br />
predmet (komad metalne pločice i sl.)<br />
tako da se petrijevka napuni<br />
sedimentom do vrha. Isprati sediment i<br />
spremiti uzorak u posudu.<br />
Svaki uzorak koji je uzet, treba se fiksirati sa 4%-tnim formaldehidom kako bi<br />
uzorke sačuvali do trenutka analize. Osim toga na svaki uzorak je potrebno<br />
obilježiti mjesto i vrijeme uzorkovanja, datum i tip supstrata sa kojeg je uzet.<br />
2.1.3.2. Uzimanje uzoraka sa umjetnih supstrata<br />
Perifiton se može uzorkovati i sa umjetnih supstrata koji su stavljeni u vodeni<br />
medij u odreñenom vremenskom periodu. Zajednice organizama će kolonizirati<br />
supstrat, koji u odreñenom trenutku možemo uzorkovati. Ova metoda je vrlo<br />
korisna na dubokim potocima i rijekama na kojima nema plitkih i brzih sekcija,<br />
močvarama ili litoralnim zonama lentičkog staništa.<br />
39
Nekoliko vrsta materijala mogu se postaviti na odreñena mjesta u akvatoriju.<br />
Upotrebljava se predmetno stakalce, stakleni štapić, ploče pleksiglasa ili drvene<br />
pločice. Oni se stavljaju u posebno prilagoñene vreće ili boce na površinu vode ili<br />
na dno u periodu izmeñu 2 do 4 tjedna. Na svakoj lokaciji treba staviti do 3<br />
perifitometra da bi se mogla izmjeriti prostorna varijabilnost algi.<br />
Perifitometar je potrebno fiksirati na čvrstim strukturama na rijeci da ne bi bio<br />
odnesen vodenom strujom. Svaki perifitometar treba biti okrenut uzvodno.<br />
Nakon inkubacijskog perioda sakupljaju se uzorci pomoću četkice, gumenim ili<br />
drvenim predmetima.<br />
Prednost ovakve metode je da se mogu postaviti različiti supstrati na točno<br />
odreñena mjesta i prikupljati uzorci bez utroška energije za odstranjivanje<br />
perifitona sa kamenja ili nekih drugih supstrata.<br />
40
2.1.4. Laboratorijska obrada sakupljenih uzoraka<br />
Da bi se napravila kvalitetna identifikacija algi, potrebno je mnogo iskustva i<br />
kvalitetni instrumenti. Stupanj taksonomske identifikacije ovisit će o cilju<br />
istraživanja. Neke grupe, kao što su diatome i Chrisophyta, zahtijevaju specijalnu<br />
proceduru da se pripreme za identifikaciju vrsta.<br />
Vrijeme potrebno za brojanje varirat će ovisno o gustoći stanica.<br />
2.1.2.1. Kvantitativna analiza fitoplanktona<br />
Kvantitativna analiza je preporučljiva samo ako su uzorci fiksirani sa Lugolovom<br />
otopinom. Nefiksirani uzorak se ne može brojati jer će se diatome i flagelati<br />
pomicati unutar komore. Osim toga, zooplankton će smanjiti gustoću<br />
fitoplanktona jer se još uvijek njima hrani.<br />
Oprema koja je potrebna za kvantitativnu analizu ovisit će i o tipu mikroskopa koji<br />
posjedujemo. Ako se služimo mikroskopom sa inverznim bijelim svijetlom, tada<br />
nam je potrebno 10 x, 20x, 40x i<br />
100x povećanje. Ako koristimo<br />
povećanja od 20x i 40x upotreba<br />
fazno kontrastnih objektiva bila bi<br />
prednost, naročito kada vršimo<br />
identifikaciju živih stanica. Izbor<br />
mikroskopa ovisi o metodi koju<br />
ćemo koristiti. Ako koristimo<br />
Utermöhl metodu tada nam treba<br />
inverzni mikroskop, a za<br />
Sedgwick Rafter metodu, Lund<br />
metodu i Neurbaeur komoru<br />
koristi se klasični mikroskop sa<br />
okularima postavljenim iznad ploče.<br />
Slika 40: sedimentacijska komora po Utermöhl-u<br />
41
UTREMÖHL METODA<br />
Brojanje stanica fitoplanktona vrši se pomoću sedimentacijskih komora po<br />
Utermöhl-u (Slika 40). Da bi brojanje izvršili korektno, u okularu je potrebno imati<br />
mrežicu sa linijama koje označavaju veličinu u µm (Slika 41).<br />
Komora po Utermöhl-u se fiksira na mikroskopsko<br />
predmetno stakalce pomoću silikona. Komora se do<br />
vrha napuni sa uzorkom koji je prethodno dobro<br />
homogeniziran mućkanjem. Zatvori se pokrovnim<br />
stakalcem na način da se ne naprave mjehurići<br />
zraka.<br />
Slika 41: Mrežica po Whipple-u<br />
Stavljamo komore u tamnu prostoriju da se uzorak sedimentira od 1 do 10 sati,<br />
ovisno o veličini komore. Naime, manje komore zahtijevaju kraći vremenski<br />
period, a veće duži za sedimentaciju. Računa se da je za svaki centimetar<br />
uzorka potrebno 2 sata za sedimentaciju pri 20°C, a ako su prisutne diatome<br />
tada je za svaki centimetar potrebno 6 sati. No, najbolje ih je ostaviti preko noći.<br />
Izbor veličine komora ovisi o uzorku kojeg smo uzeli. Visoke komore<br />
upotrebljavamo za uzorke gdje se nalazi mali broj organizama, a male i niske za<br />
uzorke s velikom gustoćom organizama. Ako nismo sigurni za veličinu komore,<br />
najbolje je da isti uzorak stavimo u nekoliko komora različitih veličina tako da<br />
smo sigurni da ćemo u jednoj dobiti optimalnu gustoću stanica.<br />
Nakon što se uzorak sedimentira, uzimamo komore i stavljamo ih na mikroskop.<br />
Koristi se inverzni mikroskop, koji se razlikuje od klasičnog u tom smislu da se<br />
objektivi nalaze ispod ploče kako bi mogli brojati dno sedimentacijske komore<br />
(Slika 42).<br />
Prije nego počnemo brojati na velikom povećanju, dobro je provjeriti uzorak pod<br />
malim povećanjem (10x). Na taj način brojimo velike vrste algi kao što je<br />
Ceratium sp. ili ostale dinoflagelate. Na većem povećanju brojimo male primjerke<br />
(20-40x).<br />
42
Nakon što smo izvršili identifikaciju i brojanje stanica, potrebno je izraziti broj<br />
stanica u 1 ml. Prilikom računanja potrebno je obratiti pažnju na faktor<br />
koncentracije ili faktor razrjeñenja (za uzorke koji su morali biti razrijeñeni<br />
destiliranom vodom jer su bili pregusti).<br />
Koncentracija stanica (C) se preračunava na slijedeći način:<br />
a) Za koncentrirane uzorke:<br />
C (stanica ml -1 )= broj stanica / faktor koncentracije<br />
b) za razrijeñene uzorke<br />
C (stanica ml -1 )= broj stanica x faktor koncentracije<br />
Npr. Nakon sedimentacije, 100 ml originalnog uzorka je reducirano na 10 ml<br />
(faktor koncentracije je 10) i 1 ml je uzet za identifikaciju i brojanje. U tom uzorku<br />
je izbrojano 580 stanica vrste A. Koncentracija vrste A u originalnom uzorku vode<br />
iznosi:<br />
C=580/10 = 58 stanica ml -1<br />
Slika 42: Inverzni mikroskop<br />
43
SEDGWICK – RAFTER METODA<br />
Koristi se kao umjesto Utermöhl metode.<br />
Komorica po Sedgwick Rafter-u je dimenzija 50mm x 20mm i 1mm dubine sa<br />
rešetkastom (mrežastom) podlogom kako bi se mogle brojati stanice (Slika 43).<br />
Od staklenog je materijala.<br />
Slika 43: Komorica po Sedgwick Rafter-u<br />
Iz homogeniziranog uzorka se sa Pasteur-ovom pipetom odpipetira 1 ml. Uzorak<br />
se stavlja unutar komorice tako da se uz ugao ispusti tekućina i lagano zatvori sa<br />
pokrovnicom. Pričeka se 30 minuta da se uzorak sedimentira. Da ne bi ušao<br />
mjehurić zraka tijekom sedimentacije (zbog evaporacije), komorica se može<br />
nadopuniti sa destiliranom vodom i tek tada zatvoriti pokrovnim stakalcem.<br />
Prilikom brojanja, preporučljivo je izbrojati barem 30 polja unutar mrežaste<br />
podloge jer će se ondje nalaziti oko 90 % prisutnih vrsta.<br />
Nakon završenog brojanja i identifikacije pristupa se izračunavanju koncentracije<br />
C koja je izražena kao broj jedinica u ml za svaki takson. Ova formula koristi se<br />
ako se broje odreñena polja unutar mrežaste podloge:<br />
C (stanica ml -1 N<br />
) =<br />
Gdje je:<br />
x 1,<br />
000 mm<br />
A x D x F<br />
N= broj stanica ili jedinica<br />
A= površina polja (mm 2 )<br />
D= dubina polja (dubina Sedgwick – Rafter komorice)<br />
F= broj polja koja su izbrojana<br />
3<br />
44
NEUBAUER METODA<br />
Neubauer komora (Slika 44) ima mrežu za brojanje sastavljenu od kvadratića koji<br />
nisu vidljivi dok se ne stave pod mikroskop. Najveći kvadratići su veličine 1 mm 2 ,<br />
grupni kvadratići 0,04 mm 2 , a najmanji 0,025 mm 2 . Najveći kvadrat je u sredini<br />
podijeljen pet puta na grupu kvadrata površine od 0,04 mm 2 svaki. Ova grupa<br />
kvadrata je, takoñer, podijeljena na 16 vrlo malih kvadrata površine 0,0025 mm 2 .<br />
Dubina komore je 0,100 mm.<br />
Ovaj tip komorice se koristi većinom za brojanje stanica manjih od 10 µm.<br />
Uzorak se homogenizira mućkanjem najmanje 30 sec i pipetira Pasteur-ovom<br />
pipetom.<br />
Slika 44: Komorica po Neubauer -u<br />
Najprije se stavlja pokrovno stakalce na pola površine komorice i tada se stavlja<br />
uzorak. Nakon toga, pokrovno stakalce se gurne tako da prekrije cijelu površinu<br />
komorice kako bi se otklonila mogućnost da se naprave mjehurići zraka.<br />
Tekućina će se kapilarnim putem rasporediti unutar komore i uzorak je spreman<br />
za mikroskopiranje.<br />
Nakon brojanja i identifikacije, dobivene vrijednosti uvrstimo u formulu:<br />
C (stanica µl -1 ) =<br />
Broj jedinki<br />
A x D x R<br />
A= površina polja (mm 2 )<br />
D= dubina polja (dubina Neubauer komorice) u mm<br />
R= razrjeñenje<br />
45
Npr. izbrojali smo 161 stanicu na površini od 4 kvadratića (4 x 1 mm 2 ) = 4 mm 2 .<br />
Dubina komorice je 0,1 mm, a razrjeñenje 1:20.<br />
181<br />
161x20<br />
C =<br />
=<br />
= 8050 jed / μl<br />
2<br />
4 mm x 0,<br />
1mm<br />
x 1 4 x 0,<br />
1x1<br />
μl<br />
20<br />
2.1.4.2. Kvantitativna analiza perifitona<br />
Analiza perifitona može se raditi isto kao i analiza fitoplanktona, ali postoje i<br />
druge metode. Da bi kvalitetno odredili brojnost diatoma, potrebno ih je najprije<br />
oksigenizirati, pa tek nakon tog postupka možemo pristupiti identifikaciji i<br />
brojanju. Stoga se analize algi i diatoma vrše odvojeno.<br />
Analiza relativnog obilja algi (bez diatoma)<br />
1. Uzorke spremljene u posudice potrebno je homogenizirati, odnosno dobro<br />
promućkati. To se može napraviti ručno ili pomoću mućkalice.<br />
2. Dobro promućkati homogenizirani uzorak i odpipetirati u Palmerovu komoricu<br />
(Slika 45), Sedwig rafter, Lund ili Neuerbauer komoricu. Razrijediti suspenziju<br />
ako se stanice previše poklapaju.<br />
3. Identificiraj i izbroji 300 stanica algi do što je moguće najnižeg taksonomskog<br />
stupnja sa mikroskopom od 400x povećanja<br />
Slika 45: Palmerova komorica<br />
46
Analiza relativnog obilja diatoma<br />
1. Odpipetiraj 5 – 10 ml koncentriranog fiksiranog uzorka nakon što je<br />
izmućkan. Očisti (oksidiraj) uzorak za analizu diatoma<br />
Metoda za oksidaciju (čišćenje) diatoma<br />
METODA 1<br />
1. Staviti 5-10 ml fiksiranog uzorka u tikvicu<br />
2. Dodati tovoljno nitratne ili sulfatne kiseline da proizvede jaku toplinsku reakciju (koristiti zaštitnu odjeću i<br />
sigurno posuñe)<br />
3. Ostavi uzorak da oksidira preko noći<br />
4. Napuni tikvicu sa destiliranom vodom<br />
5. Čekaj 1 sat za svaki centimetar vode koja se napuni u tikvicu<br />
6. Iscrpi sa pipetom talog i dopuni tikvicu sa destiliranom vodom. To se radi tako da se talog iscrpljuje iz sredine<br />
vodenog stupca kako se ne bi zahvatilo alge koje se talože na rubovima tikvice i na površini otopine.<br />
7. Ponavljaj korake od 4 do 6 sve dok se ne obezboji i uzorak postane čist.<br />
METODA 2<br />
1. Pripremi uzorak kao u točci 1 prethodne metode, ali upotrijebi 50% H2O2 umjesto kiselina<br />
2. Dozvoli da se uzorak oksidira preko noći, i tada dodaj 0.1 g K2Cr2O7 (To će uzrokovati termičku reakciju,<br />
upotrijebi poklopac sa otvorom u obliku cijevi, sigurnosno staklo i zaštitnu odjeću)<br />
3. Kada je boja uzorka promijenjena iz ljubičaste u žutu i kada se otopina ohladila, napuni tikvicu sa destiliranom<br />
vodom<br />
4. Čekaj 4 sata, iscrpi sa pipetom talog, i ponovo napuni tikvicu sa vodom. To se radi tako da se talog iscrpljuje iz<br />
sredine vodenog stupca kako se ne bi zahvatilo alge koje se talože na rubovima tikvice i na površini otopine.<br />
5. Ponavljaj korak 4 sve dok se otopina ne obezboji i uzorak postane čist kao.<br />
2. Nakon što su diatome očišćene, potrebno je napraviti trajne preparate sa<br />
Naphrax ili sličnim fiksativom. Ne zaboraviti staviti oznake o kojim se<br />
preparatima radi<br />
Priprema trajnih preparata sa Naphrax fiksativom:<br />
1. Stabiliziran uzorak odpipetirati na predmetno stakalce.<br />
2. Ostaviti preko noći da se osuši<br />
3. Zagrijati uzorak i staviti nekoliko kapi Naphrax fiksativa<br />
4. Kada Naphrax počne kipiti, postavlja se pokrovnica tako da se ne naprave mjehurići zraka<br />
5. Kada se uzorak ohladi, spreman je za upotrebu<br />
3. Identificiraj i izbroji diatome do najnižeg taksonomskog stupnja pod uljno<br />
imerznim i fazno kontrastnim mikroskopom na povećanju od 1000 x.<br />
47
2.1.5. Odreñivanje biomase fitoplanktona<br />
SUHA MASA<br />
Biomasa fitoplanktona može se odreñivati na nekoliko načina. Jedan od načina<br />
je odreñivanje suhe mase alga. Najprije je potrebno uzorak filtrirati preko Glass<br />
microfibre filtera (Whatman) ø 1 µm. Prvo se filter važe i nakon toga stavlja sušiti<br />
na konstantnoj temperaturi od 105°C do konstantne t ežine (24 sata). Tada se<br />
opet važe i razlika predstavlja ukupnu biomasu algi koja se izražava u mg/l ili g/l.<br />
MOKRA MASA (VOLUMETRIJSKA METODA)<br />
Bazira se na brojenju i mjerenju dimenzija pojedinih vrsta u volumenu vode.<br />
Broje se individue, što označava jednu stanicu, a ne koloniju ili filament. Ova<br />
metoda zahtijeva znanje prilikom identifikacije pojedinih vrsta fitoplanktona.<br />
Svaka vrsta je odreñene veličine te su otprije poznate mase i volumeni pojedinih<br />
vrsta. Prosječni volumen svake vrste se množi sa brojem stanica u smislu da se<br />
dobije biovolumen u mm 3 po mililitru. Ukupna mokra masa se uvrsti u formulu:<br />
V<br />
t<br />
=<br />
n<br />
∑<br />
i = 1<br />
Gdje je<br />
( N x V )<br />
1<br />
1<br />
Vt = ukupni volumen planktonskih stanica (mm 3 /l)<br />
Ni = broj organizama od i-te vrste/ml<br />
Vi= prosječan volumen stanica i-te vrste (µm 3 )<br />
48
KLOROFIL a<br />
Biomasa se može izračunati i putem odreñivanja koncentracije klorofila a.<br />
Sve zelene biljke sadrže klorofil a, primarni fotosintetski pigment, čija<br />
koncentracija daje indirektnu procjenu razine primarne proizvodnje. Alge u vodi,<br />
uključujući cijanobakterije i modrozelene alge sadrže klorofil a, koji sačinjava oko<br />
1-2% suhe težine planktonskih alga i upotrebljava se za procjenu fitoplanktonske<br />
biomase. Ostali pigmenti koji se pojavljuju u fitoplanktonu su klorofil b, klorofil c,<br />
ksantofil, fikobilin i karoten. Najvažniji produkt degradacije klorofila je<br />
phaeophytin.<br />
Metodologija uzorkovanja klorofila a<br />
Da bi se izvelo pravilno uzorkovanje na jezerima, nakon što se odrede lokacije<br />
uzorkovanja, prvo je potrebno izmjeriti dubinu i prozirnost Secchi diskom. Uzorak<br />
se uzima sa nekoliko dubina, jer su alge smještene u cijelom stupcu vode gdje<br />
prodire svjetlost.<br />
Uzorak vode ne smije biti manji od 1 l. Što je voda manje prozirna, uzima se<br />
manje uzorka, jer je prisutna veća biomasa planktona. Na oligotrofnijim vodama<br />
potrebno je uzeti najmanje dvije litre vode ili više, ovisno o metodologiji koja<br />
slijedi.<br />
Vrlo je važno da uzorak vode bude pohranjen u tamne boce, po mogućnosti<br />
crne, kako se ne bi promijenila biomasa algi. Takav uzorak je potrebno odmah<br />
odnijeti u laboratorij ili pohraniti u hladnjak (idealno je ako se koristi metoda<br />
smrzavanja uzorka u tekućem dušiku).<br />
Postoje različite metode za odreñivanje klorofila a i većinom se koriste<br />
spektrofotometrijske i flourimetrijske. Ovdje ćemo se koristiti spektrofotometrom<br />
za očitanje vrijednosti klorofila a (vježba ).<br />
49
Klorofil a se očitava na valnoj duljini od 664 nm. Kako je ondje prisutan i produkt<br />
degradacije klorofila, phaeophytin, pojavit će se greška proporcionalna<br />
koncentraciji phaeophytina jer se on se očitava se na istim valnim duljinama.<br />
Odreñuje se nakon acidifikacije klorofila sa HCl na valnoj duljini od 665 nm.<br />
Formula za izračunavanje klorofila a (µg/l) i phaeophytina a (µg/l):<br />
( OD664<br />
OD665)<br />
26, 7 −<br />
Klorofil a =<br />
V xL<br />
Phaeophytin<br />
2<br />
xV<br />
[ 1.<br />
7(<br />
OD665)<br />
OD664]<br />
26, 7<br />
−<br />
a =<br />
V xL<br />
2<br />
1<br />
xV<br />
1<br />
50
2.1.6. Odreñivanje saprobnog stanja vode<br />
Na temelju kvantitativnog i kvalitativnog sastava biljnih i životinjskih zajednica<br />
odreñuje se saprobiološko stanje istraživanog dijela vodotoka, te se na temelju<br />
toga odreñuje stupanj onečišćenja vode. U čistim vodama zajednice organizama<br />
su u ravnoteži – postoji odgovarajući broj producenata, konzumenata i<br />
razgrañivača. U zagañenim vodama ta ravnoteža je poremećena i vrijedi<br />
Thienemannovo pravilo – što su uvjeti okoliša ekstremniji i dalje od optimalnih<br />
uvjeta to je veći broj karakterističnih vrsta.<br />
Saprobnost je kvaliteta vode u odnosu na količinu razgradljive organske tvari i<br />
intenzitet razgradnje. Saprobnost karakteriziraju zajednice organizama. Sastav<br />
životne zajednice daje kompleksne informacije o svojstvima okolne vode –<br />
planktonske zajednice o otvorenoj vodi, <strong>bentos</strong>ke i litoralne zajednice o uvjetima<br />
dna i obalnog područja.<br />
Sistem saprobnosti je sistem vodenih organizama koji svojom prisutnošću i<br />
aktivnošću upućuju na različitu kvalitetu vode, čistoću ili zagañenje. Prema<br />
nalazu vrsta indikatora možemo zaključivati o stupnju onečišćenja. Nalaz<br />
pojedinačnih vrsta nije dovoljan te je potrebno utvrditi brojnost indikatora i<br />
analizirati kompletne zajednice.<br />
Pantle-Buckov indeks saprobnosti (1955.)<br />
Ovdje će naglasak biti dan na fitoplanktonske vrste, a takoñer se ova metoda<br />
koristi i na makrozoo<strong>bentos</strong>u.<br />
Najprije se pristupa identifikaciji vrsta, gdje se indikatorski organizmi nastoje<br />
identificirati do razine vrste, a ako nije moguće do razine roda ili porodice.<br />
Identifikacija i brojčana zastupljenost pojedine vrste (skala 1, 3 i 5) prikazuje se<br />
na listi koja sadrži popis nañenih i identificiranih vrsta kao i njihov stupanj<br />
saprobnosti, koji je odreñen prema nekom od indikatorskih sustava (Tablica 1)<br />
Od indiktorskih sustava, koristi se Wegl, 1983. gdje se za svaku indikatorsku<br />
vrstu može naći odreñen broj bodova koji se koriste za izračunavanje indeksa<br />
saprobnosti.<br />
51
Tablica 1: Procjena gustoće bioindikatora za izračunavanje indeksa saprobnosti:<br />
OCJENA GUSTOĆE<br />
(BROJ I OPIS)<br />
OBRAŠTAJ (niže<br />
biljke)<br />
( RELATIVNA<br />
ZASTUPLJENOST %)<br />
MAKROZOOBENTOS<br />
(BROJ VRSTA U<br />
UZORKU)<br />
1 – pojedinačno, rijetko 1 – 10 1- 10<br />
3 – srednje > 10 – 75 > 10 – 75<br />
5 – masovno > 75 – 100 > 75<br />
Kao numerička veličina za definiranje klase boniteta koristi se Pantle-Buckov<br />
indeks saprobnosti (1955.), koji se smatra najprihvatljivijim biocenotičkim<br />
parametrom za klasifikaciju voda.<br />
Za svaki analizirani uzorak mikrofito<strong>bentos</strong>a i makrozoo<strong>bentos</strong>a izračuna se<br />
indeks saprobnosti (S) prema formuli:<br />
Σ(<br />
sh)<br />
S =<br />
Σh<br />
S = indeks saprobnosti<br />
s = stupanj saprobnosti<br />
h = zastupljenost<br />
Primjer:<br />
VRSTA h s sh<br />
Achnantes minutissima 1 2,0 2,0<br />
Cymbella ventricosa 3 2,0 6,0<br />
Nitzschia palea 5 2,6 13,0<br />
Σ(<br />
sh)<br />
S<br />
= =<br />
Σh<br />
21<br />
9<br />
=<br />
2,<br />
3<br />
52
KLASIFIKACIJA VODA<br />
Raspon vrijednosti indeksa saprobnosti kreće se od 1 do 4 i interpolira u sustav s<br />
5 klasa boniteta vode (NN br.77/98).<br />
Na osnovi vrijednosti indeksa saprobnosti definira se klasa boniteta vode na<br />
odreñenoj mjernoj postaji:<br />
Tablica 2. Klase kvalitete voda prema vrijednosti indeksa saprobnosti<br />
KLASA<br />
KVALITETE<br />
VODA<br />
I<br />
Plave boje<br />
I – II<br />
Zelene boje<br />
II<br />
Zelene boje<br />
II – III<br />
Žute boje<br />
III<br />
Žute boje<br />
III – IV<br />
Crvene boje<br />
IV<br />
Crvene boje<br />
INDEKS<br />
SAPROBNOSTI<br />
SAPROBIOLOŠKO<br />
OBILJEŽJE<br />
ZAJEDNICE<br />
1,0 - < 1,5 oligosaprobnost<br />
1,5 - < 1,8<br />
1,8 - < 2,3<br />
oligobetamezosaprob.betamezosaprobnost<br />
OPIS VODENOG<br />
BIOTOPA<br />
neopterećen ili malo<br />
opterećen<br />
vrlo malo opterećen<br />
jače opterećen<br />
2,3 - < 2,7 beta-alfamezosaprob kritično opterećen<br />
2,7 - < 3,2 alfa-mezosaprobnost jako opterećen<br />
3,2 - < 3,5<br />
alfamezos.polisaprob.<br />
vrlo jako opterećen<br />
3,5 - < 4,0 polisaprobnost prekomjerno opterećen<br />
Tablica 3. Interpolacija P-B indeksa saprobnosti u sustav od 5 klasa kvalitete<br />
voda<br />
KLASA<br />
KVALITETE VODA<br />
KLASA<br />
INDEKS<br />
SAPROBNOSTI (S)<br />
I I + I – II 1,0 -
2.1.4. VJEŽBE - FITOPLANKTON<br />
54
Vježba 1: Upoznavanje sa glavnim skupinama fitoplanktonskih<br />
organizama<br />
Ako su pod mikroskopom prisutni neki od slijedećih oblika radi se o fitoplanktonu:<br />
AKO JE:<br />
1. Modrozeleni pigment je razliven kroz stanice:<br />
ILI<br />
2. Tamnozeleni, žutozeleni ili smeñi pigment je lokaliziran u kromatoforama<br />
DALJE<br />
MODROZELENE ALGE<br />
55
AKO JE<br />
1. Pigment žutozeleni ili smeñi, imaju „oklop“ od dvije kremene ljušture.<br />
3. Tamnozeleni pigment, a stanice nisu dodatno podijeljene<br />
DALJE<br />
DIATOME<br />
56
AKO JE<br />
1. Prisutni bičevi, prisutne poprečne brazde, tijelo oklopljeno prozirnim celuloznim<br />
pločama<br />
ILI<br />
2. Obojeni tamnozelenom bojom, stanice u malim kolonijama, dva ili više bičeva<br />
3. Bičevi nisu prisutni<br />
ILI<br />
DALJE<br />
DINOFLAGELATI<br />
KOLONIJALNE<br />
ZELENE ALGE<br />
57
AKO JE<br />
1. Stanice su podijeljene na dvije potpuno simetrične polovice<br />
2. Stanice nisu podijeljene na dvije potpuno simetrične polovice<br />
ILI<br />
DALJE<br />
DESMIDIACEJE<br />
58
AKO JE<br />
1. Stanice su u obliku dugačkih niti<br />
2. Stanice nisu u obliku dugačkih niti ali se nalaze sakupljene u male kolonije<br />
ILI<br />
NITASTE ZELENE<br />
ALGE<br />
OSTALE ZELENE<br />
ALGE<br />
59
Vježba 2: Kvalitativno uzorkovanje i determinacija fitoplanktona<br />
Potrebna oprema:<br />
Vodootporni flomaster<br />
Grafitna olovka<br />
Protokol za fitoplankton (Tablica 4)<br />
<strong>Plankton</strong>ska mreža Ø 30 µm<br />
Epruveta ili posuda u koju stavljamo filtrat<br />
Formalin 4%<br />
Postupak:<br />
Ispuniti protokol<br />
Na epruvetu ili posudu u koju stavljamo filtrat sa vodootpornim flomasterom<br />
napisati:<br />
- mjesto i lokaciju uzorkovanja<br />
- datum<br />
- vrstu uzorkovanja<br />
Fitoplanktonsku mrežu provučemo nekoliko puta kroz vodu da obuhvatimo cijeli<br />
stupac vode. Filtrat stavljamo u epruvetu i fiksiramo formalinom.<br />
U laboratoriju pristupiti determinaciji taksona ili vrsta pomoću ključa za<br />
determinaciju (Dambska 1976; Lazar 1960; Lazar 1965; Lazar 1966; Lazar 1969;<br />
Hustedt 1959). Upotrijebiti protokol za determinaciju (Tablica 5).<br />
Determinacija za kvalitativnu analizu može se vršiti pomoću klasičnog<br />
predmetnog stakalca (ne mora se stavljati pokrovnica). Uzorak filtrata se dobro<br />
promućka i uzme pipetom te stavi na predmetno stakalce.<br />
60
Tablica 4: Protokol za fitoplankton<br />
Lokacija: Ime vode:<br />
Datum:<br />
Sat:<br />
Terenska mjerenja:<br />
Temperatura vode:<br />
Prozirnost (Secchi):<br />
Protok:<br />
Uzimanje uzoraka fitoplanktona:<br />
Dubina: površina 0,5 m 1 m m Metoda uzorkovanja:<br />
Lokacija uzorkovanja: Kvalitativna<br />
lijeva strana desna strana sredina Promjer mrežice: µm<br />
Komentar: Kvantitativna<br />
Provjeri sva mjerenja i uzorkovanja!<br />
Uzorkovanje izvršio: Datum:<br />
Tip opreme:<br />
61
Tablica 5: Protokol za determinaciju<br />
Vrsta odreñivanja: kvalitativno* kvantitativno**<br />
Uzorak:_________ Lokacija:____________ Datum uzorkovanja: ___________<br />
Površina brojanja:<br />
Vrsta komore:<br />
Količina (volumen) uzorka:<br />
Vrsta, rod ili porodica Broj<br />
* za potrebe kvalitativne analize nije potrebno ispuniti rubrike na lijevoj strani, niti brojati individue<br />
** za potrebe kvantitativne analize, ispuniti ostale rubrike<br />
62
Vježba 3: Kvantitativno uzorkovanje i determinacija fitoplanktona<br />
Potrebna oprema:<br />
Vodootporni flomaster<br />
Grafitna olovka<br />
Protokol za fitoplankton (Tablica 4)<br />
Jedan od dostupnih tipova boca ili zamki za fitoplankton<br />
Epruveta ili posuda u koju stavljamo filtrat<br />
Formalin 4% ili Lugolova otopina<br />
Postupak:<br />
Ispuniti protokol<br />
Na epruvetu ili posudu u koju stavljamo filtrat sa vodootpornim flomasterom<br />
napisati:<br />
- mjesto i lokaciju uzorkovanja<br />
- datum<br />
- vrstu uzorkovanja<br />
Na nekoliko dubina u jezeru uzimamo uzorke fitoplanktona. Filtrat stavljamo u<br />
epruvetu i fiksiramo formalinom ili Lugolovom otopinom.<br />
U laboratoriju pristupiti determinaciji taksona ili vrsta pomoću ključa za<br />
determinaciju (Dambska 1976; Lazar 1960; Lazar 1965; Lazar 1966; Lazar 1969;<br />
Hustedt 1959). Upotrijebiti protokol za determinaciju (Tablica 5).<br />
Determinacija za kvantitativnu analizu mora se vršiti pomoću jedne od prethodno<br />
opisanih komorica.<br />
63
Potrebna oprema:<br />
Vodootporni flomaster<br />
Grafitna olovka<br />
Vježba 4: Uzorkovanje i determinacija perifitona<br />
Protokol za perifiton (Tablica 6)<br />
Četkica za zube ili slična četkica<br />
PVC cijev za skupljanje uzoraka na tvrdom i nepomičnom supstratu<br />
Petrijeva posuda ili slična posudica za ispiranje supstrata<br />
Pipeta<br />
Boca sa destiliranom vodom<br />
Boca sa širim otvorom za uzimanje uzoraka sa biljnog supstrata<br />
Ravnalo ili sl. za mjerenje površine sa koje smo uzeli uzorak<br />
Posuda u koju stavljamo uzorke<br />
Formalin 4% ili Lugolova otopina<br />
- ako uzorke uzimamo sa umjetnih supstrata, tada još trebamo i prilagoñeni<br />
perifitometar.<br />
Postupak:<br />
Ispuniti protokol<br />
Na epruvetu ili posudu u koju stavljamo uzorke sa vodootpornim flomasterom<br />
napisati:<br />
- mjesto i lokaciju uzorkovanja<br />
- datum<br />
- tip supstrata sa kojeg je uzet uzorak<br />
Uzorke uzeti sa svih raspoloživih supstrata. Staviti ih u posudu i fiksirati<br />
formalinom ili Lugolovom otopinom.<br />
U laboratoriju pristupiti determinaciji taksona ili vrsta pomoću ključa za<br />
determinaciju (Dambska 1976; Lazar 1960; Lazar 1965; Lazar 1966; Lazar 1969;<br />
Hustedt 1959). Upotrijebiti protokol za determinaciju (Tablica 5).<br />
Determinacija za kvantitativnu analizu algi mora se vršiti pomoću jedne od<br />
prethodno opisanih komorica.<br />
64
Determinacija diatoma nastupa nakon postupka oksigenacije:<br />
1. Odpipetiraj 5 – 10 ml koncentriranog fiksiranog uzorka nakon što je<br />
izmućkan. Očisti (oksidiraj) uzorak za analizu diatoma<br />
Metoda za oksidaciju (čišćenje) diatoma<br />
METODA 1<br />
1. Staviti 5-10 ml fiksiranog uzorka u tikvicu<br />
2. Dodati tovoljno nitratne ili sulfatne kiseline da proizvede jaku toplinsku reakciju (koristiti zaštitnu odjeću i<br />
sigurno posuñe)<br />
3. Ostavi uzorak da oksidira preko noći<br />
4. Napuni tikvicu sa destiliranom vodom<br />
5. Čekaj 1 sat za svaki centimetar vode koja se napuni u tikvicu<br />
6. Iscrpi sa pipetom talog i dopuni tikvicu sa destiliranom vodom. To se radi tako da se talog iscrpljuje iz sredine<br />
vodenog stupca kako se ne bi zahvatilo alge koje se talože na rubovima tikvice i na površini otopine.<br />
7. Ponavljaj korake od 4 do 6 sve dok se ne obezboji i uzorak postane čist.<br />
METODA 2<br />
1. Pripremi uzorak kao u točci 1 prethodne metode, ali upotrijebi 50% H2O2 umjesto kiselina<br />
2. Dozvoli da se uzorak oksidira preko noći, i tada dodaj 0.1 g K2Cr2O7 (To će uzrokovati termičku reakciju,<br />
upotrijebi poklopac sa otvorom u obliku cijevi, sigurnosno staklo i zaštitnu odjeću)<br />
3. Kada je boja uzorka promijenjena iz ljubičaste u žutu i kada se otopina ohladila, napuni tikvicu sa destiliranom<br />
vodom<br />
4. Čekaj 4 sata, iscrpi sa pipetom talog, i ponovo napuni tikvicu sa vodom. To se radi tako da se talog iscrpljuje iz<br />
sredine vodenog stupca kako se ne bi zahvatilo alge koje se talože na rubovima tikvice i na površini otopine.<br />
5. Ponavljaj korak 4 sve dok se otopina ne obezboji i uzorak postane čist.<br />
2. Nakon što su diatome očišćene, potrebno je napraviti trajne preparate sa<br />
Naphrax ili sličnim fiksativom. Ne zaboraviti staviti oznake o kojim se<br />
preparatima radi<br />
Priprema trajnih preparata sa Naphrax fiksativom:<br />
1. Stabiliziran uzorak odpipetirati na predmetno stakalce.<br />
2. Ostaviti preko noći da se osuši<br />
3. Zagrijati uzorak i staviti nekoliko kapi Naphrax fiksativa<br />
4. Kada Naphrax počne kipiti, postavlja se pokrovnica tako da se ne naprave mjehurići zraka<br />
5. Kada se uzorak ohladi, spreman je za upotrebu<br />
3. Identificiraj i izbroji diatome do najnižeg taksonomskog stupnja pod uljno<br />
imerznim i fazno kontrastnim mikroskopom na povećanju od 1000 x.<br />
65
Tablica 6: Protokol za perifiton<br />
Ime rijeke ili potoka:<br />
Istraživač:<br />
Datum:<br />
Sat:<br />
Tip supstrata<br />
Tip staništa<br />
Uzimanje uzoraka<br />
Komentar<br />
Procijeni obilje: 0 = nije prisutno<br />
1 = rijetko (< 5%)<br />
2 = često (5 %– 30%)<br />
3 = obilno (30% - 70%)<br />
4 = dominantno (> 70%)<br />
Perifiton<br />
Filamentne alge<br />
Makrofite<br />
Razlog uzorkovanja:<br />
Lokacija:<br />
Postaja:<br />
Označi koliko % pojedinog supstrata se nalazi na lokaciji<br />
Sitni pijesak, mulj ___% Krupno kamenje ____%<br />
Šljunak ______% Makrofita, korijenje ____%<br />
Grane, palo drveće _____% Stijene ____________%<br />
Označi %:<br />
Dijelovi vodotoka sa plitkom i brzom vodom (eng. riffle) ______%<br />
Dijelovi vodotoka sa dubokom i brzom vodom (eng. run) _____%<br />
Bazen (eng. pool) ___________________________________%<br />
Vrsta opreme koja je upotrijebljena:<br />
četkica PVC cijev _________<br />
Kako su uzimani uzorci:<br />
sa obale iz čamca _________<br />
Ako su uzorci uzimani sa prorodnih supstrata, označi koliko % je uzeto sa<br />
pojedinog supstrata:<br />
Sitni pijesak, mulj ___% Krupno kamenje ____%<br />
Šljunak ______% Makrofita, korijenje ____%<br />
Grane, palo drveće _____% Stijene ____________%<br />
0 1 2 3 4<br />
0 1 2 3 4<br />
0 1 2 3 4<br />
Makroavertebrata<br />
Ribe<br />
0 1 2 3 4<br />
0 1 2 3 4<br />
66
Vježba 5: Pantle – Buckov indeks saprobnosti<br />
Nakon što smo izvršili determinaciju fitoplanktona i perifitona (dovoljna je<br />
kvalitativna analiza), potrebno je procjeniti gustoću prema tablici 7.<br />
Tablica 7: Procjena gustoće bioindikatora za izračunavanje indeksa saprobnosti:<br />
OCJENA GUSTOĆE<br />
OBRAŠTAJ (niže biljke)<br />
(BROJ I OPIS)<br />
(RELATIVNA ZASTUPLJENOST %)<br />
1 – pojedinačno, rijetko 1 – 10<br />
3 – srednje > 10 – 75<br />
5 – masovno > 75 – 100<br />
Za svaki analizirani uzorak mikrofito<strong>bentos</strong>a izračuna se indeks saprobnosti (S)<br />
prema formuli:<br />
Σ(<br />
sh)<br />
S =<br />
Σh<br />
S = indeks saprobnosti<br />
s = stupanj saprobnosti<br />
h = zastupljenost<br />
Da bi dobili indeks saprobnosti, stupanj zastupljenosti i zastupljenost, koristimo<br />
"Indeks za limnosaprobitet" (Wegl, 1983).<br />
Primjer:<br />
VRSTA h s sh<br />
Achnantes minutissima 1 2,0 2,0<br />
Cymbella ventricosa 3 2,0 6,0<br />
Nitzschia palea 5 2,6 13,0<br />
Σ(<br />
sh)<br />
S = =<br />
Σh<br />
21<br />
9<br />
=<br />
2,<br />
3<br />
Nakon što smo odredili indeks saprobiteta, pristupamo odreñivanju klase<br />
kvalitete vode prema tablicama. Tablica 8 označava interpolaciju P-B indeksa<br />
saprobnosti u sustav od 5 klasa kvaliteta voda. U tablici 9 mogu se vidjeti klase<br />
kvalitete voda prema vrijednosti indeksa saprobnosti.<br />
67
Tablica 8. Interpolacija P-B indeksa saprobnosti u sustav od 5 klasa kvalitete<br />
voda<br />
KLASA<br />
KVALITETE VODA<br />
KLASA<br />
INDEKS<br />
SAPROBNOSTI (S)<br />
I I + I – II 1,0 -
Postupak u laboratoriju<br />
Potreban pribor:<br />
- tarionik<br />
Vježba 6: Klorofil a<br />
- centrifuga, epruvete za centrifugiranja<br />
- aparatura za vaakum filtraciju<br />
- pipete<br />
- spektrofotometar λ = 664, 665, 750 nm; kiveta 10 mm<br />
Reagensi:<br />
1. Zasićena otopina MgCO3<br />
- 1 g fino usitnjenog MgCO3 otopi se u 100 ml destilirane vode<br />
2. 90% vodena otopina acetona<br />
- 90 ml acetona razrijedi se sa 10 ml otopine MgCO3<br />
3. HCl (0,1 N)<br />
Postupak:<br />
1. Uzorak treba profiltrirati što je prije moguće, a ako nismo u mogućnosti,<br />
uzorak staviti na ledu ili 4 °C<br />
2. Uzorak se ukoncentrirava filtracijom lagano protresenog uzorka pomoću<br />
NISKOG vaakuma (ne veći od 20kPa) kroz filtar od staklenih vlakana<br />
(Whatman Glass microfibre filter). Volumen uzorka za filtriranje V2 je onaj<br />
volumen koji smo uzeli na terenu (1 l ili više litara)<br />
3. Filtar sa uzorkom se pažljivo prenese u tarionik, dodamo 5 ml vodene<br />
otopine acetona i maceriramo dok se filtar potpuno ne raspadne (ili u<br />
usitnjivaču 1 min na 500 o/min)<br />
69
4. prenesemo uzorak u graduiranu epruvetu, isperemo tarionik s 5 ml<br />
vodene otopine acetona i nadopunimo do željenog volumena.<br />
5. Izbistrimo uzorak centrifugiranjem 20 min na 500 g (2000 o/min)<br />
6. Ostavimo da uzorak stoji na 4°C u mraku najmanje 2, a najviše 24 sata.<br />
7. Zabilježimo volumen filtrata (supernatanta) V1<br />
Pristupamo spektrofotometriji<br />
Prvo na spektrofotometru očitamo standard (to nam je vodena otopina acetona<br />
sa MgCO3) na 750 nm, dok se ne pojavi vrijednost 0.<br />
Stavimo uzorak sa klorofilom u kivetu i očitamo ga na 750. Vrijednost koju<br />
dobijemo trebala bi biti 0. Ako je vrijednost veća, zabilježimo je te nju kasnije<br />
odbijemo od vrijednosti dobivene na 664 nm.<br />
Spektrofotometar stavimo na 664 nm. Opet se prvo očitava standard. Kasnije u<br />
kivetu stavimo uzorak te se očita vrijednost.<br />
Pristupamo zakiseljavanju da razbijemo molekule klorofila. Ostaje samo<br />
phaeophytin. On se očitava na 665 nm. Prvo opet očitamo standard, a zatim<br />
uzorak nakon zakiseljavanja. Očitamo vrijednost. Ova vrijednost treba biti manja<br />
od očitanja na 664 nm. Ako je vrijednost veća, tada moramo ponoviti cijeli<br />
proces.<br />
Pristupamo izračunavanju rezultata:<br />
( OD664<br />
OD665)<br />
26, 7 −<br />
Klorofil a =<br />
V xL<br />
Phaeophytin<br />
2<br />
xV<br />
[ 1.<br />
7(<br />
OD665)<br />
OD664]<br />
26, 7<br />
−<br />
a =<br />
V xL<br />
2<br />
1<br />
xV<br />
1<br />
70
2.2. Zooplankton<br />
Glavninu slatkovodnog zooplanktona čine skupine Rotatoria (kolnjaci),<br />
planktonski račići Cladocera (rašljoticalci) i Copepoda (veslonošci). Od ostalih<br />
skupina životinja u slatkovodnom zooplanktonu mogu se susresti Protozoa, jaja<br />
riba, ličinke riba, školjkaša, kukaca i dugoživci.<br />
Za slatkovodni zooplankton karakteristične su vertikalne migracije. Skupine<br />
Cladocera i Copepoda pokazuju pravilne migracije po dubini tijekom 24 sata,<br />
dolazeći u površinske slojeve tijekom noći i spuštajući se za vrijeme dana u<br />
dublje slojeve vode. Skupina Rotatoria ne podliježe ovakvim dnevnim ritmovima.<br />
Pretpostavlja se da se plankton zadržava na onoj dubini na kojoj mu je optimalna<br />
količina svjetla.<br />
Rotatoria (kolnjaci) spadaju u koljeno Aschelmintes (oblenjaci) i jedna su od<br />
najrasprostranjenijih životinjskih skupina. Veličina tijela je od 40 µm do 3 mm, ali<br />
je najčešće izmeñu 150 i 400 µm. Najveći broj kolnjaka je proziran, a obojeno je<br />
samo crijevo ili sadržaj crijeva (Slika 46).<br />
Slika 46: Rotifera – Branchionus sp.<br />
71
Skupina planktonskih račića Cladocera i Copepoda (Arthropoda – Crustacea),<br />
uglavnom pripada veličinskoj kategoriji makrozooplanktona (od 1-5 mm). Neke<br />
vrste Cladocera (Bosmina, Chidorus), juvenilni oblici Cladocera i ličinke<br />
Copepoda (naupliji i kopepoditi), zbog znatno manje veličine pripadaju manjim<br />
veličinskim kategorijama.<br />
Skupine Cladocera i Copepoda provode cijeli svoj životni vijek u slobodnoj vodi<br />
te se zbog ovakvog načina života ubrajaju u pravi plankton (holoplankton) (Slika<br />
47 i 48).<br />
Slika 47: Copepoda – Cyclops sp.<br />
Slika 48: Cladocera – Bosmina longirostris<br />
72
2.2.1. Izbor mjesta uzorkovanja zooplanktona<br />
Zooplankton je vrlo važan u hranidbenoj mreži jer je važna riblja hrana i hrana za<br />
predatorni makrozoo<strong>bentos</strong>, a oni su predatori na alge, bakterije, protozoe i<br />
ostale makrozoo<strong>bentos</strong>.<br />
Pojavljuju se u gotovo svim jezerima, rijekama i morima, a manje su važni u<br />
rijekama jer se ne mogu razvijati u tekućim vodama.<br />
Vrlo su osjetljivi na promjene okolišnih uvjeta, kao što su unos hranjiva,<br />
zakiseljavanje vode ili povećanje riblje populacije, pa se to odražava na njihovo<br />
obilje, raznolikost vrsta i kompoziciju zajednica. Brzo reagiraju na takve uvjete jer<br />
većina vrsta ima kratak životni vijek (jedan dan do nekoliko tjedana).<br />
Prilikom izbora mjesta uzorkovanja, potrebno je voditi računa da je zooplankton<br />
rasprostranjen i horizontalno i vertikalno u stajaćim, a i tekućim vodama. Da bi<br />
kvalitetno odredili mjesta uzorkovanja, to radimo kao i prilikom uzorkovanja<br />
fitoplanktona (Slika 32 i 38).<br />
Distribucija i migracija zooplanktona je vertikalna i obično je suprotna nego<br />
fitoplanktona. Zooplankton se danju nalazi na većoj dubini, a noću na površini<br />
vode. Zbog toga je za kontinuirano uzorkovanje važno da se uzorci uzimaju u<br />
isto doba dana kako bi se mogla odrediti distribucija pojedinih vrsta<br />
zooplanktona. Osim toga, velike su varijacije u gustoći populacija i kompoziciji<br />
vrsta u pojedinim sezonama. Kod ponekih vrsta, odrasli oblici se pojavljuju samo<br />
nekoliko puta kroz godinu i ovisni su o temperaturi vode. Zbog toga je potrebno<br />
pažljivo odrediti kontinuitet uzorkovanja. Preporučljivo je da to bude barem dva<br />
puta mjesečno.<br />
I drugi faktori utječu na sastav zooplanktona. Osim temperature, važni su i<br />
svjetlost, fizikalno kemijske osobine, dostupnost hrane i predacija od strane riba i<br />
makrozoo<strong>bentos</strong>a.<br />
73
2.2.2. Metode uzorkovanja zooplanktona<br />
Prikupljanje zooplanktona za odreñivanje njihova kvalitativnog sastava vrši se<br />
različitim vrstama planktonskih mreža. Napravljene su u obliku stošca na čijem<br />
kraju se nalazi metalni lijevak s preklopnim ventilom. Materijal od kojeg je mreža<br />
napravljena je mlinarska svila čiji promjer pora ne bi smio biti manji od 75 µm<br />
(Slika 49).<br />
Slika 49: <strong>Plankton</strong>ska mreža<br />
Uzorke za kvalitativnu analizu prikupimo na taj način da povučemo mrežicu<br />
nekoliko puta kroz vodu te sadržaj iscijedimo u epruvetu. Ovom analizom<br />
ustanoviti ćemo koje su sve vrste prisutne u vodi.<br />
Prikupljanje zooplanktona za potrebe kvantitativnih analiza, vrši se pomoću boca<br />
sličnih kao i za prikupljanje fitoplanktona (Slika 50). Namijenjene su za uzimanje<br />
odreñenog volumena vode sa točno odreñene dubine.<br />
74
Slika 50: Boca za uzimanje uzoraka zooplanktona<br />
Za uzimanje uzoraka zooplanktona u plićim vodama, npr. u gusto obraslim<br />
rubovima jezera, koriste se električne pumpe s gumenom cijevi čiji se ulazni<br />
otvor postavi izmeñu vodenog bilja.<br />
Prikupljeni uzorci vode zajedno s planktonskim organizmima filtriraju se kroz<br />
planktonsku mrežicu, a filtrat se pohranjuje u 2 % formaldehidu.<br />
Uzorci za kvantitativnu analizu se uzimaju tako da provučemo vodu iz poznatog<br />
volumena kroz planktonsku mrežu. Sadržaj filtrata stavimo u baždarenu epruvetu<br />
kako bi kasnije mogli izračunati koliko jedinki se nalazi u 1 l vode. Ovaj izračun<br />
vršimo prema slijedećoj formuli:<br />
Broj organizama u 1 ml x 1000<br />
Broj organizama u litri vode =<br />
Faktor koncentracije<br />
Volumen filtrirane vode<br />
Faktor koncentracije<br />
=<br />
Volumen koncentrata<br />
( ml)<br />
( ml)<br />
Na taj način odreñujemo koliko se pojedinih vrsta nalazi u litri vode.<br />
75
2.2.3. Odreñivanje biomase zooplanktona<br />
Sekundarnu produkciju čine životinjski organizmi koji u prehrambenom lancu<br />
predstavljaju primarne konzumente. Glavninu sekundarne produkcije u kopnenim<br />
vodama čine planktonski organizmi koji se po veličini tijela dijele na<br />
mikrozooplankton (od 50 µm do 500 µm) i makrozooplankton (od 500 µm do 5<br />
mm). Skupine Rotatoria i Protozoa glavni su predstavnici mikrozooplanktona, dok<br />
su Cladocera i Copepoda glavni predstavnici makrozooplanktona. Biomasa<br />
mikrozooplanktona i makrozooplanktona govori direktno o intenzitetu sekundarne<br />
produkcije, a time ukazuje i na intenzitet primarne produkcije.<br />
Postoji nekoliko načina izračunavanja biomase. Može se izraziti količinom<br />
fosfora, dušika ili bjelančevina u biomasi makrozooplanktona. To su složeni<br />
postupci, a donose približno iste rezultate kao i izražavanje "svježe" ili "suhe"<br />
biomase. Svježa masa se izračunava iz volumena pojedine jedinke. Suha masa<br />
se izračunava tako da se ukloni sva voda sušenjem na 105 °C . Suha masa može<br />
se odrediti i pomoću regresijskih jednadžbi, odnosno dužinsko masenim<br />
odnosima za svaku pojedinu vrstu zooplanktona.<br />
2.2.4. Odreñivanje trofije vode pomoću planktonskih račića<br />
Bioprodukciju vode moguće je procijeniti na više načina. Jedan od načina je<br />
analiza biomase i strukture Cladocera i Copepoda. U jezerima sa niskim<br />
stupnjem trofije vode broj vrsta je velik (8-11), dok je u jezerima sa visokim<br />
stupnjem trofije broj vrsta mali (3-4).<br />
Stupanj trofije vode odreñuje se u doba intenzivne produkcije i to od svibnja do<br />
listopada. Za odreñivanje stupnja trofije pomoću zooplanktona,<br />
makrozooplanktonski račići se mogu svrstati u tri skupine (Karabin 1985):<br />
76
I. Predstavnici nižih stupnjeva trofije (mezotrofno stanje jezera):<br />
Heterocope appendiculata<br />
Bosmina berolinensis<br />
Bythotrophes longimanus<br />
Daphnia longospina hyalina var. galeata<br />
Daphnia cristata<br />
Daphnia cuculata<br />
II. Predstavnici eutrofnih ili politrofnih jezera<br />
Mesocyclops leucarti<br />
Mesocyclops oithonoides<br />
Chydorus sphaericus<br />
Diaphanosoma brachyurum<br />
Bosmina longirostris<br />
Bosmina Coregoni<br />
III. Predstavnici čija prisutnost ne može ukazivati na povećanu niti smanjenu<br />
trofiju:<br />
Eudiaptomus graciloides<br />
Eudiaptomus gracilis<br />
Leptodora kindtti<br />
Bosmina crossicornis<br />
Mesocyclops crassus<br />
Ceriodaphnia quadrangula<br />
Daphnia longospina hyalina var. pellucida<br />
Limnocalanus macrurus<br />
Polyphemus pediculus<br />
Acanthocyclops viridis<br />
Cyclops kolensis<br />
Daphnia pulex<br />
Na osnovi udjela biomase bioindikatora i to iz II skupine moguće je izračunati<br />
stupanj trofije. To vrijedi samo za stratificirana jezera.<br />
Biomasa II skup.<br />
planktonskih račića<br />
Stupanj trofije<br />
< 25 Mezotrofno<br />
25 – 60 Mezotrofno eutrofno<br />
> 60 eutrofno<br />
77
2.2.5. Raznolikost zajednica<br />
Kao i kod makrozoo<strong>bentos</strong>a (poglavlje 3.5), i prema pojedinim vrstama ili<br />
skupinama zooplanktona moguće je odrediti raznolikost zajednica i udaljenost<br />
pojedinih biotopa. Raznolikost zajednica moguće je odrediti putem mnogobrojnih<br />
indeksa, a neki od njih su: indeks raznolikosti (d), Simpsonov indeks raznolikosti<br />
(D) i Shanon – Wienerov indeks raznolikosti (H). Kako bi se ustanovila sličnost<br />
pojedinih biotopa i meñusobno ustanovile njihove udaljenosti, koristimo:<br />
Kvocijent sličnosti (QS), Jaccardov indeks (I) i Indeks sličnosti po Sorenesenu<br />
(I)<br />
78
2.2.5. VJEŽBE - ZOOPLANKTON<br />
79
Vježba 1: Prepoznavanje glavnih skupina zooplanktona<br />
Ako su prisutni neki od ovih organizama u promatranom uzorku, radi se o<br />
zooplanktonu:<br />
AKO JE:<br />
1. Organizacija tijela jednostanična<br />
ILI<br />
2. Organizacija tijela višestanična<br />
DALJE<br />
CILIATA<br />
80
AKO JE:<br />
1. Nisu prisutna ticala, na glavi trepetljikavi prstenom (trepčanik) i tijelo oklopljeno<br />
u ljušturicu<br />
2. Ticala prisutna<br />
DALJE<br />
ROTIFERA<br />
81
AKO JE:<br />
1. Nastavci su tanki, tijelo oklopljeno u ljušturu, oblik tijela kao u ptica<br />
2. Tijelo nije oklopljeno u ljušturu, vidljiva segmentacija tijela, tijelo izduženo,<br />
prisutni nastavci za plivanje<br />
CLADOCERA<br />
COPEPODA<br />
82
Vježba 2: Kvalitativno uzorkovanje i determinacija zooplanktona<br />
Potrebna oprema:<br />
Vodootporni flomaster<br />
Grafitna olovka<br />
Protokol za zooplankton (Tablica 10)<br />
<strong>Plankton</strong>ska mreža Ø 75 µm<br />
Epruveta ili posuda u koju stavljamo filtrat<br />
Formalin 4%<br />
Postupak:<br />
Ispuniti protokol<br />
Na epruvetu ili posudu u koju stavljamo filtrat sa vodootpornim flomasterom<br />
napisati:<br />
- mjesto i lokaciju uzorkovanja<br />
- datum<br />
- vrstu uzorkovanja<br />
<strong>Plankton</strong>sku mrežu provučemo nekoliko puta kroz vodu da obuhvatimo cijeli<br />
stupac vode. Filtrat stavljamo u epruvetu i fiksiramo formalinom.<br />
U laboratoriju pristupiti determinaciji taksona ili vrsta pomoću ključa za<br />
determinaciju (Voigt i Koste, 1978; Vrebčević, 1996; Mellanby, 1963). Upotrijebiti<br />
protokol za determinaciju (Tablica 5, str. 62).<br />
Determinacija za kvalitativnu analizu može se vršiti pomoću klasičnog<br />
predmetnog stakalca sa udubinom (ne mora se stavljati pokrovnica). Uzorak<br />
filtrata se dobro promućka i uzme pipetom te stavi na predmetno stakalce.<br />
83
Tablica 10: Protokol za zooplankton<br />
Lokacija: Ime vode:<br />
Datum:<br />
Sat:<br />
Terenska mjerenja:<br />
Temperatura vode:<br />
Prozirnost (Secchi):<br />
Protok:<br />
Uzimanje uzoraka zooplanktona:<br />
Dubina: površina 0,5 m 1 m m Metoda uzorkovanja:<br />
Lokacija uzorkovanja: Kvalitativna<br />
lijeva strana desna strana sredina Promjer mrežice: µm<br />
Komentar: Kvantitativna<br />
Provjeri sva mjerenja i uzorkovanja!<br />
Uzorkovanje izvršio: Datum:<br />
Tip opreme:<br />
84
Vježba 3: Kvantitativno uzorkovanje i determinacija zooplanktona<br />
Potrebna oprema:<br />
Vodootporni flomaster<br />
Grafitna olovka<br />
Protokol za zooplankton (Tablica 10)<br />
Jedan od dostupnih tipova boca ili zamki za zooplankton ili PVC cijev s kojom ćemo<br />
uzeti uzorak s točno odreñene dubine (ako je to nedostupno, uzeti kantu izmjerenog<br />
volumena – nije preporučljivo, ali dovoljno za semikvantitativnu analizu)<br />
Baždarena epruveta ili posuda u koju stavljamo filtrat<br />
Formalin 4% ili Lugolova otopina<br />
Postupak:<br />
Ispuniti protokol<br />
Na epruvetu ili posudu u koju stavljamo filtrat sa vodootpornim flomasterom napisati:<br />
- mjesto i lokaciju uzorkovanja<br />
- datum<br />
- vrstu uzorkovanja<br />
Na nekoliko dubina u jezeru uzimamo uzorke zooplanktona. Filtrat stavljamo u epruvetu i<br />
fiksiramo formalinom ili Lugolovom otopinom. Sadržaj filtrata stavimo u baždarenu<br />
epruvetu kako bi kasnije mogli izračunati koliko jedinki se nalazi u 1 l vode.<br />
U laboratoriju pristupiti determinaciji taksona ili vrsta pomoću ključa za determinaciju<br />
(Voigt i Koste, 1978; Vrebčević, 1996; Mellanby, 1963). Upotrijebiti protokol za<br />
determinaciju (Tablica 5, str 62). Determinaciju i brojanje organizama vršimo na<br />
klasičnom predmetnom stakalcu sa udubinom, s time da je potrebno u okularu imati<br />
mrežicu za brojanje.<br />
Ovaj izračun vršimo prema slijedećoj formuli:<br />
Broj organizama u 1 ml x 1000<br />
Broj organizama u litri vode =<br />
Faktor koncentracije<br />
Volumen filtrirane vode<br />
Faktor koncentracije<br />
=<br />
Volumen koncentrata<br />
( ml)<br />
( ml)<br />
Na taj način odreñujemo koliko se pojedinih vrsta nalazi u litri vode.<br />
85
Vježba 4: Odreñivanje raznolikosti zajednica<br />
Raznolikost zajednica odreñivat će se isto kao i kod makrozoo<strong>bentos</strong>a, i to:<br />
Indeks raznolikosti (d) (Vjezba 6 str 120)<br />
Simpsonov indeks raznolikosti (D) (Vježba 7, str.121 )<br />
Shanon – Wienerov indeks raznolikosti (H) (Vježba 8, str. 122)<br />
Kako bi se ustanovila sličnost pojedinih biotopa i meñusobno ustanovile njihove<br />
udaljenosti, koristimo:<br />
Jaccardov indeks (Sj) (Vježba 9, str. 123)<br />
Indeks sličnosti po Sorenesenu (Ss) (Vježba 9, str.123)<br />
86
3. MAKROZOOBENTOS<br />
Ovisno kakav je odnos organizma prema podlozi, razlikujemo pokretni (vagilni) i<br />
pričvršćeni (sesilni) <strong>bentos</strong>.<br />
On je zastupljen biljnim i životinjskim organizmima, pa razlikujemo fito<strong>bentos</strong> i<br />
zoo<strong>bentos</strong>. Zoo<strong>bentos</strong> dalje možemo podijeliti na zoo<strong>bentos</strong> slatkih i slanih voda.<br />
Zoo<strong>bentos</strong> sačinjavaju predstavnici gotovo svih skupina slatkovodnih životinja koje<br />
žive u bentalu, manje ili više ukopane u mulj ili se zadržavaju na bilju, kamenju ili<br />
drugim predmetima u vodi. Ovdje su opisane opće karakteristike nekih od<br />
značajnijih predstavnika zoo<strong>bentos</strong>a koje nalazimo u našim vodama.<br />
TURBELLARIA – VIRNJACI<br />
Virnjaci su predstavnici kopnenih i morskih voda, a ima ih i kopnenih oblika. Za<br />
stajaće i tekuće vode karakteristični su redovi Tricladida (Slika 51), Rhabdocoela<br />
i Alloeocoela.<br />
MOLLUSCA - MEKUŠCI<br />
Gastropoda - puževi<br />
Slika 51: Dendrocoelum lacteum<br />
Ova skupina mekušaca je daleko najbogatija vrstama, a dobro je zastupljena u<br />
moru, kopnenim vodama i na kopnu. Osnovna karakteristika im je nesimetrično<br />
tijelo i spiralno savijena kućica.<br />
Slatkovodni puževi prilično su aktivne životinje, koje se kreću pomoću mišićavog<br />
stopala po kamenju i bilju hraneći se uglavnom prevlakama zelenih algi koje<br />
87
prekrivaju predmete. U potocima i rijekama dolaze predstavnici dvaju podrazreda:<br />
prednjoškržnjaci (Prosobranchia) i plućnjaci (Pulmonata) (Slika 52 i 53).<br />
Plućnjaci uglavnom preferiraju stajaće ili slabo tekuće vode, a neke vrste su prilično<br />
otporne na zagañenje. To je zbog toga što udišu atmosferski zrak, iz kojeg u dijelu<br />
plaštane šupljine pomoću mreže krvnih žila izdvajaju kisik. Prednjoškržnjaci<br />
uglavnom dolaze u tekućim vodama s puno kisika.<br />
Slika 52: Bythinia tentaculata Slika 53: Ancylus fluviatilis<br />
Bivalvia – školjkaši<br />
Većina predstavnika ove skupine mekušaca živi u moru, dok ih je u kopnenim<br />
vodama relativno malo. Kopnenih oblika nema. Tijelo je bilateralno simetrično i<br />
smješteno unutar dviju ljuštura (Slika 54).<br />
Svi odrasli školjkaši žive u bentalu gdje uglavnom provode polusjedilački način<br />
života. Zbog filtracijskog načina prehrane značajnu ulogu imaju u održavanju<br />
kvalitete vode.<br />
88
ANNELIDA - KOLUTIĆAVCI<br />
Oligochaeta – maločetinaši<br />
Slika 54: Anodonta cygnea<br />
Ova skupina kolutičavaca ima potpunu unutarnju i vanjsku kolutićavost. Većina<br />
maločetinaša su kopnene životinje prilagoñene na najrazličitija staništa. Takoñer<br />
veliki broj vrsta živi u vodama, od kojih neke vrste mogu živjeti i u moru i u<br />
kopnenim vodama, a druge su ograničene bilo na more bilo na kopnene vode. Osim<br />
toga mnoge kopnene vrste su amfibijske tj. mogu živjeti i na kopnu i u vodi<br />
(Lumbricidae, Enchytraeidae).<br />
Predstavnici ovog razreda vrlo dobro su zastupljeni u svim tipovima kopnenih voda<br />
kako brojem vrsta tako i gustoćom populacija. Guste populacije nekih maločetinaša<br />
(npr. Tubifex tubifex) javljaju se u organski onečišćenim vodama gdje je<br />
onemogućen opstanak mnogim drugim vrstama životinja (Slika 55).<br />
Slika 55: Tubifex tubifex<br />
89
Hirudinea – pijavice<br />
Od maločetinaša ih razlikujemo po prijanjalkama na prednjem i stražnjem kraju<br />
tijela, te po tome što nemaju čekinja (Slika 56).<br />
Zbog načina prehrane, usta su im različito grañena. Kod nekih su u obliku rila, a<br />
neke imaju čeljusti kojima pregrizaju kožu žrtve. Većina pijavica sišu krv i druge<br />
tjelesne tekućine, a ostale su mesojedi koji se hrane maločetinašima, puževima,<br />
ličinkama kukaca i dr. Sva pijavice mogu preživjeti duže vrijeme bez hrane. Nemaju<br />
posebne organe za disanje već dišu cijelim tijelom. Uglavnom žive u kopnenim<br />
vodama, a malo ih živi u vlažnoj zemlji i moru.<br />
Slika 56: Glossiphonia complanata<br />
90
ARTHROPODA - ČLANKONOŠCI<br />
Crustacea – rakovi<br />
Predstavnici ove skupine životinja uglavnom dolaze u vodenom biotopu, a samo<br />
mali broj vrsta živi na kopnu. Oko čitavog tijela epiderma izlučuje hitinsku kutikulu<br />
koja je često kalcificiranai čini jak egzoskelet na kojem često izrastu dlake, četine i<br />
bodlje. Zbog takvog tvrdog vanjskog skeleta raci ne mogu kantinuirano rasti već se<br />
rast odvija neposredno nakon presvlačenja kada je novi oklop još mekan.<br />
Jedan dio rakova živi u bentalu, ali ima dosta i planktonskih oblika (Copepoda,<br />
Cladocera), koje su glavna hrana ribama i drugim životinjama. Mnogi se rakovi<br />
hrane biljnim planktonom, živim ili uginulim životinjama, a ima i biljojeda.<br />
Predstavnici ovog razreda dobro je zastupljen u kopnenim vodama, no dok u<br />
stajaćim vodama dolazi velik broj vrsta, u tekućicama je broj karakterističnih vrsta<br />
malen (Slika 57, 58 i 59).<br />
Slika 57: Astacus astacus Slika 58: Asellus aquaticus Slika 59: Gammarus fossarum<br />
Insecta – kukci<br />
Ovom razredu beskralježnjaka pripada više od 70% svih poznatih životinjskih vrsta,<br />
a zbog svoje velike brojnosti i rasprostranjenosti spadaju u najvažnije članove<br />
mnogih životnih zajednica. Meñu kukce ubrajamo sve životinje koje imaju jedan par<br />
ticala i tri para člankovitih nogu. Veliku većinu kukaca karakteriziraju i dva para krila.<br />
Kukci koji ni u jednom stadiju razvoja nemaju krila nazivamo beskrilci Apterigota, a<br />
svi ostali, kojih je velika većina, jesu krilaši Pterigota.<br />
91
Kukci su u prvom redu kopnene životinje, a samo kod malog broja vrsta svi razvojni<br />
stadiji žive u vodi. Mnogo češće samo stadiji ličinke i pupe žive u vodi a odrasli su<br />
prave kopnene životinje.<br />
Ovdje su navedeni najznačajniji redovi kukaca čiji je životni ciklus vezan uz vodu.<br />
1. Heteroptera – raznokrilci<br />
Ovaj red kukaca razlikujemo od ostalih po nastavku u obliku kljuna na prednjoj<br />
donjoj strani glave (Slika 60). Odrasli kukci obično imaju dva para krila, ali zbog<br />
načina života došlo je do različitih promjena. Na prednjim krilima gornji dio je<br />
hitiniziran, a donji opnenast. Stražnja krila cijela su opnenasta. Hrane se biljnim,<br />
izuzetno životinjskim sokovima, pa su im usni organi prilagoñeni za bodenje i<br />
sisanje. Ličinke su jako nalik na odrasle. Razvijaju se nepotpunom preobrazbom<br />
kod koje nema stadija kukuljice.<br />
2. Coleoptera – kornjaši<br />
Slika 60: Nepa cinerea<br />
Predstavnici ovog reda većinom su stanovnici kopna, a samo kod nekih porodica<br />
svi razvojni stadiji žive u vodi. Tijelo im je obično obavijeno hitinom, pa je tvrdo i<br />
sjajno (Slika 61). Ličinke se jako razlikuju od odraslih, a redovito imaju organe za<br />
grizenje. Hrane se slično kao i odrasli, tj. biljnom hranom, strvinama ili su grabežljivi.<br />
Ličinke koje žive u vodi mogu plivati ili hodaju po dnu (Slika 62).<br />
92
Slika 61: Deronectes latus – imago Slika 62: Gyrinidae sp. - ličinka<br />
3. Diptera – dvokrilci<br />
U ovaj red kukaca spadaju mali do srednje veliki kukci, koji su prekriveni tankom<br />
kutikulom. Kod njih postoji samo prvi par krila, a od stražnjih su ostali samo<br />
neznatni ostaci. Ličinke se jako razlikuju od odraslih i razvoj se odvija preko<br />
potpune preobrazbe. Većina dvokrilaca ima pokretne slobodne kukuljice koje često<br />
mogu plivati. Ličinački stadiji mnogih vrsta ovog reda žive u kopnenim vodama<br />
meñu kopnenim biljem, u naslagama pijeska i mulja. Neke vrste žive u posebnim<br />
cijevima izgrañenim od mulja i zrnaca pijeska (Slika 63).<br />
Slika 63: Chironomus thummi<br />
93
4. Megaloptera – muljari<br />
Kod odraslih jedinki ovog reda kukaca oba para krila su opnasta, velika i približno<br />
jednaka. Usnim organima za grizenje hvataju druge životinje kojima se hrane.<br />
Razvijaju se potpunom preobrazbom. Ličinke koje žive u vodi grabežljive su te<br />
pomoću posebnih kliješta isisavaju žrtve (Slika 64). Kukuljice su unutar zapretka, a<br />
cijeli razvoj traje godinu dana.<br />
5. Trichoptera – tulari<br />
Slika 64: Sialis lutaria<br />
Ličinke ovog reda kukaca čine znatan udio u makrozoo<strong>bentos</strong>a u kopnenim voda<br />
(Slika 65). Prema izgledu tijela ličinke tulara dijelimo u dvije skupine:<br />
- prvu skupinu čine ličinke kod kojih je uzdužna os glave postavljena koso ili<br />
okomito na uzdužnu os tijela. Osim toga, grade prenosive kućice (tuljce) od biljnih<br />
ostataka, pijeska, sitnog šljunka i praznih ljuštura sitnih puževa školjkaša.<br />
- kod druge skupine uzdužna os glave nastavlja se na uzdužnu os tijela, a ličinke<br />
žive slobodno. Iznimno neke grade prenosive kućice, a neke pletu mrežu iz sekreta<br />
u kojem se zadržavaju i u isto vrijeme služe za lov.<br />
Slika 65: Hydropsyche sp.<br />
94
6. Odonata – vretenci<br />
Odrasle životinje ove skupine kukaca zadržavaju se u blizini vode love druge kukce.<br />
Krila su prozirna i uglavnom jednako velika. Prilikom leta svaki par krila radi<br />
zasebno, a kad miruju, ostanu raširena. Ženka polaže jaja u vodu iz kojih se<br />
razvijaju grabežljive ličinke. Trajanje ličinačkog stadija, ovisno o vrsti različito je, a<br />
obično se kreće od jedne do tri godine. Kroz to vrijeme ličinka se nekoliko puta<br />
presvlači. Kad završe razvoj, ličinke izañu iz vode i iz njih se razvije odrasla jedinka.<br />
Ličinke ovog reda kukaca žive u bentalu tekućih i stajaćih voda (Slika 66 i 67). Nalik<br />
su na odrasle kukce, grabežljive su i plijen hvataju preobraženom donjom usnom<br />
(hvatalo, krinka).<br />
Slika 66: Calopteryx virgo Slika 67: Gomphus vulgatissimus<br />
7. Plecoptera – obalčari<br />
Imago je tamne boje i nježnih opnastih krila koja su za mirovanja položena uz tijelo.<br />
U letu svaki par krila pokreće se zasebno. Ličinke su nalik na odrasle, samo što<br />
umjesto krila imaju krilne zametke. Uglavnom žive ispod kamenja na dnu čistih brzih<br />
tekućica (Slika 68). Većinom se hrane ličinkama drugih kukaca, kolutićavcima i sl., a<br />
rijetko biljnom hranom i detritusom.<br />
95
8. Ephemeroptera – vodencvjetovi<br />
Slika 68: Chloroperla sp.<br />
Važna karakteristika odraslih jedinki su zakržljali usni organi zbog čega se ne mogu<br />
hraniti, pa žive vrlo kratko. Zadržavaju se uz vodu i slabi su letači. U stadiju ličinke<br />
provedu jednu do četiri godine i pri tome se nekoliko puta presvlače (Slika 69).<br />
Nakon posljednjeg presvlačenja, iz vode izañe krilati oblik (subimago) koji se još<br />
jednom presvuče i tek tada postane razvijeni kukac. Takve pojave nema kod drugih<br />
skupina kukaca.<br />
Slika 69: Baetis rhodani<br />
96
3.1. Selekcija mjesta uzorkovanja<br />
Ako se uzorci iz rijeka ili jezera uzimaju nasumice, mjesta uzorkovanja mogu biti<br />
vrlo različita, a time i biomasa organizama može jako varirati. Stoga, potrebno je<br />
najprije snimiti situaciju, zabilježiti moguće izvore zagañenja, tipove supstrata,<br />
karakteristike riječnog toka ili jezera. Da bi se dobio kvalitetan uzorak potrebno je<br />
odrediti nekoliko postaja da se obuhvate svi tipovi supstrata.<br />
Važno je na istom mjestu gdje je uzet uzorak <strong>bentos</strong>a napraviti i kemijsku analizu<br />
vode.<br />
3.2. Metode uzorkovanja<br />
Metode uzorkovanja mogu se podijeliti na kvalitativnu, semikvantitativnu i<br />
kvantitativnu.<br />
Kvalitativna analiza služi kako bi se dobili podaci o prisutnosti ili neprisutnosti<br />
pojedinih organizama. Prednost ovakve analize je u tome što se uzorci mogu<br />
uzimati s bilo kakvim tipom opreme te se mogu obuhvatiti svi tipovi staništa.<br />
Nedostaci ovakvog uzorkovanja je u tome što se ne mogu dobiti precizni podaci<br />
o biomasi pojedinih organizama, a niti se takvi podaci mogu usporeñivati sa<br />
drugima.<br />
Semikvantitativna analiza je bazirana na metodama koje mjere uzorkovanje<br />
<strong>bentos</strong>a razinom utrošenog napora (vrijeme utrošeno po jednom staništu) ili kada<br />
oprema za kvantitativnu analizu nije upotrijebljena slučajnim odabirom.<br />
Kvantitativna analiza uključuje procjenu broja i biomase pojedinih taksona<br />
makrozoo<strong>bentos</strong>a po jedinici površine ili volumena. Ova metoda daje informacije<br />
i o bogatstvu vrsta, distribuciji i produktivnosti individua unutar speciesa.<br />
Ponekad je vrlo teško koristiti ovu metodu kod onih vrsta koje se nalaze u vrlo<br />
velikoj biomasi.<br />
Za preciznije mjerenje i obradu rezultata, kod kvantitativne analize, potrebno je<br />
odabrati najmanje tri slučajna izbora lokacije na jednoj postaji.<br />
97
Uzorkovanje <strong>bentos</strong>a za potrebe kvantitativne analize može se izvršiti pomoću<br />
mnogobrojnih tipova dredža.<br />
Za uzimanje uzoraka u mekšim tipovima bentala najčešće se upotrebljava<br />
Ekmanova grabaljka (Slika 70). Na taj način uzimaju se uzorci u slatkovodnim<br />
rijekama i jezerima sa sporim tokom. Takav tip opreme je točno odreñene<br />
zapremine (15 x 15 x 15) i vrlo lako je izračunati biomasu organizama.<br />
Uzorkovanje se vrši na način da se dredža pusti u vodu, a sigurnosno uže se drži<br />
u rukama. Kada je dredža na dnu, pusti se glasnik (metalni uteg pričvršćen na<br />
uže) kako bi se dredža zatvorila zajedno sa uzorkom.<br />
Nakon što je uzet uzorak, potrebno ga je prosijati kroz sito, kako bi se odvojile<br />
životinje. Osim prosijavanja, postoji još metoda dodavanje otopine šećera, soli ili<br />
nekih kemijskih otopina, te na taj način životinje isplivaju na površinu. Neće<br />
isplivati jedino školjkaši, puževi i neki crvi koji se opet moraju ručno sakupiti.<br />
Životinje se fiksiraju u 4 %-tnom formalinu.<br />
Slika 70: Ekmanova grabaljka<br />
98
Na potocima i plitkim rijekama nije moguće koristiti prethodni tip opreme već se<br />
koriste mnogobrojne vrste dredža sa mrežicama. Najčešće se koristi Surberova<br />
dredža (Slika 71) i lebdeća mreža (Slika 72). Kod obje postoje prednosti i<br />
nedostaci. Surberovom dredžom možemo obuhvatiti samo supstrat manjih<br />
dimenzija, a uzorci <strong>bentos</strong>a biti će uzeti samo sa onih supstrata koje smo<br />
slučajno odabrali. Neće biti moguće obuhvatiti sve tipove supstrata koji se nalaze<br />
u riječnom toku. Pomoću lebdeće mreže uhvatiti ćemo <strong>bentos</strong> koji se nalazi u<br />
svakom tipu supstrata jer će u mrežu ulaziti životinje koje su trenutno aktivne.<br />
Nedostatak je u tome što se može dogoditi da <strong>bentos</strong> koji je vrlo čest bude samo<br />
rijetko uhvaćen (npr. tulari koji su vezani za podlogu). Takoñer, ova metoda<br />
zahtjeva da se čeka i do nekoliko sati dok uzorkovanje nije gotovo. Takoñer,<br />
dokazano je da se na taj način uhvati veća biomasa <strong>bentos</strong>a noću nego danju.<br />
Usprkos tome, dnevni uzorci su adekvatni kako bi se izrazili efekti zagañenja<br />
pojedinog potoka.<br />
Surberova dredža je grañena od dva kvadrata 30,5 cm veličine, povezana<br />
meñusobno. Jedan se nalazi na supstratu i označava površinu sa koje ćemo<br />
uzimati uzorak, a drugi drži mrežicu u koju ulaze organizmi. Postavlja se tako da<br />
je otvorena prema smjeru kretanja vode, kako bi organizmi nošeni strujom ostali<br />
unutar mrežice. Mrežica je veličine oka 0,35 mm.<br />
Prilikom postavljanja Surberove dredže, potrebna je pažljiva manipuliacija da se<br />
izbjegne nanošenje organizama u mrežicu koji se nalaze pored mjesta<br />
uzorkovanja. Nakon postavljanja mrežice, potrebno je rukama prevrnuti i očistiti<br />
svaki kamen te ga isprati vodom koja struji prema mrežici. Organizmi nošeni<br />
strujom će ostati zarobljeni unutar mreže. Potrebno je isprati sav materijal do 10<br />
cm dubine koji se nalazi na označenom mjestu uzorkovanja.<br />
Nakon sakupljanja uzorka, sve životinje fiksirati u 4 %-tnom formaldehidu.<br />
99
Lebdeća mreža<br />
Slika 71: Surberova dredža<br />
Tipična lebdeća mreža sastoji se od metalnog kvadratnog okvira 15 x 30 cm<br />
(0,045 m 2 ) na kojem se nalaze čelični nastavci. Ti nastavci se učvrste na dnu na<br />
5 cm dubine. Na kvadratni okvir je učvršćena mrežica koja može imati različitu<br />
veličinu oka, ovisno koje vrste organizama se love. Obično je mrežica veličine<br />
oka 0,595 mm za uzorkovanje makrozoo<strong>bentos</strong>a. Mrežica je duljine 1.3 m. Na<br />
kraju mrežice nalazi se nastavak pričvršćen čeličnim prstenom koji se takoñer<br />
učvrsti na dnu. Kako bi se dobili detaljniji podaci, na svakoj postaji je potrebno<br />
staviti 4 mrežice. Dvije na 45 cm iznad dna, a dvije na 10 cm iznad dna. Mrežica<br />
se nikad ne postavlja u vodi koja je dublja od 3 m.<br />
Mrežica se postavlja u vodeni stupac na način da voda prolazi kroz mrežicu.<br />
Odredi se vremenski period koji će ona stajati u vodi, te se nakon vañenja<br />
organizmi pokupe i fiksiraju u 4-% tnom formalinu.<br />
Insekti koji su nošeni strujom vode distribuirani su u cijelom vodenom stupcu u<br />
plitkim potocima. Ako se radi o velikim rijekama, tada se nalaze bliže bentalu.<br />
Zna se da se pojedini organizmi (koji nisu pričvršćeni za podlogu) kreću od vrha<br />
do dna vodenog stupca, naročito za niskog vodostaja. Ovakvi tipovi mreža su<br />
100
korisni za sakupljanje makrozoo<strong>bentos</strong>a koji aktivno ili pasivno ulazi u vodeni<br />
stupac. To se može dogoditi prirodno ili utjecajem nekog stresora (zagañenje).<br />
Insekti koji su ulovljeni u lebdeću mrežu ne predstavljaju ukupnu <strong>bentos</strong>nu<br />
populaciju već se biomasa tih organizama može korisno upotrijebiti za<br />
odreñivanje indeksa sastava vrsta <strong>bentos</strong>a. Gustoća i sastav vrsta ulovljenih u<br />
ovakvu mrežicu uvjetovana je utjecajem mnogih faktora koji moraju biti uzeti u<br />
obzir prilikom interpretacije rezultata (stadij životnog ciklusa, vremenske prilike,<br />
doba dana, intenzitet svjetla, gustoća populacija, temperatura, prozirnost,<br />
fluktuacije vodenog stupca, sezona, brzina toka vode, fotoperiod). U eutrofnim<br />
potocima postoji odreñeno povećanje broja i biomase driftnih organizama, s time<br />
da netolerantne vrste pokazuju smanjenje, a tolerantne proporcionalno<br />
povećavaju brojnost i biomasu.<br />
Mrežica se koristi samo na onim mjestima gdje brzina toka ne prelazi 0.05 m/s.<br />
Nakon korištenja mrežice, broj uhvaćenih individua sam za sebe ne govori ništa.<br />
Važan podatak je koliki broj je individua se nalazi u 100 m 3 vode. Koristimo<br />
formulu prema Elliot (1970):<br />
X= 100 a / b d c<br />
X= broj organizama / 100 m 3<br />
a= broj organizama u mreži (gustoća)<br />
b= broj minuta uzorkovanja (koliko je minuta mreža stajala u vodi)<br />
c= brzina protoka vode (m/min)<br />
d= površina mreže kada je otvorena (m 2 )<br />
101
3.3. Procjena biomase <strong>bentos</strong>a<br />
Slika 72: Lebdeća mreža<br />
Biomasa makroavertebrata je korisna procjena kvantitativnog uzorkovanja i time<br />
se dobije podatak biološkog integriteta pojedine vode. Mogu se koristiti suhe i<br />
mokre metode.<br />
Za procjenu mokre mase, prvo se namaču u destiliranu vodu 30 min,<br />
centrifugiraju 1 min na 140 g te važu.<br />
Za procjenu suhe mase, organizmi se suše do konstantne mase na 105 °C 4<br />
sata. Zatim se 15 min hlade na sobnu temperaturu i važu. Za procjenu suhe<br />
mase, može se još upotrijebiti i smrzavanje (na -55 °C uz pritisak 10-30 mikrona).<br />
Da bi se dobila konstantna masa, uzorci moraju biti u frizeru 24 sata. Prednost<br />
ove metode je što organizmi ostanu cijeli i moguće je opet izvršiti determinaciju.<br />
102
3.4. Odreñivanje kvalitete vode pomoću organizama indikatora<br />
Makrozoo<strong>bentos</strong> je senzitivan na mnoge biotičke i abiotičke faktore u okolini. Oni<br />
su često uzimani kao indikatori stanja vodenog medija. Pojedini organizmi imaju<br />
specifične zahtjeve u pogledu fizikalnih i kemijskih faktora koji se nalaze u vodi te<br />
svaka promjena može bitno utjecati na sastav makrozoo<strong>bentos</strong>nih zajednica.<br />
Za odreñivanje stupnja onečišćenja postoje dvije skupine bioloških metoda:<br />
- direktne ili ekološke<br />
- indirektne ili fiziološke<br />
Ekološke metode sastoje se u odreñivanju prisutnosti i učestalosti organizama<br />
indikatora ili sastava biocenoze. Fiziološke metode utvrñuju biološku aktivnost u<br />
dotičnoj vodi.<br />
3.4.1. Biološka procjena onečišćenja tekućih voda<br />
BIOTIČKI BODOVNI INDEKS (Kerovec, 1996)<br />
Radi se o najjednostavnijoj biološkoj metodi za odreñivanje kakvoće vode. Svaka<br />
vrsta indikatora dobiva bodove u rasponu od 1 do 10, koji opisuju obilježje vrste s<br />
obzirom na kakvoću vode. Vrste koje dolaze u čistim, obično brdskim<br />
tekućicama, dobivaju 10 bodova, a vrste indikatori najsnažnijeg onečišćenja 1<br />
bod. Ostale vrste dobivaju onoliko bodova koliko odgovara njihovoj osjetljivosti<br />
na onečišćenje.<br />
Potrebno je utvrditi biotički bodovni indeks (BBI) tako da ukupni zbroj bodova<br />
(UB) podijelimo s brojem utvrñenih indikatora (N). Kod toga se zanemaruju ostale<br />
nañene vrste koje nisu na popisu indikatora.<br />
UB<br />
BBI =<br />
N<br />
103
Vrijednosti BBI se klasificiraju:<br />
10-8 Prirodne čiste vode (I klasa)<br />
8-6 Slabo onečišćene vode (II klasa)<br />
6-4 Onečišćene vode (III klasa)<br />
4-2 Jako onečišćene vode (IV klasa)<br />
2-1 Vrlo jako onečišćene vode (V klasa)<br />
Ovu metodu moguće je upotrijebiti kvalitativnim i kvantitativnim uzorkovanjem.<br />
FAMILY BIOTIC INDEKS (FBI) (Bodovni biotički indeks prema porodicama)<br />
(Hilsenhoff 1988, Plafkin, 1989)<br />
Vrijednosti tolerance prema onečišćenjima za svaku porodicu rangirane su od 1-<br />
10. Vrijednosti su date svakoj porodici bazirane na vrijednostima pojedinih vrsta<br />
unutar porodica. Ova metoda koristi se samo za brze analize na terenu, jer se<br />
mogu dogoditi lagana odstupanja od vrijednosti BBI. Obično FBI za čiste potoke<br />
ukazuje na lagano onečišćenje, dok za jako zagañene vode ukazuje na nešto<br />
jača onečišćenja.<br />
Family Biotic Index (FBI) se izračunava na slijedeći način:<br />
gdje je:<br />
FBI =<br />
∑<br />
xi – broj jedinki unutar taksona<br />
ti – tolerancija taksona na onečišćenje<br />
n – ukupan broj organizama u uzorku<br />
x<br />
n<br />
i<br />
t<br />
i<br />
104
Tablica 11: Vrijednosti kvalitete vode upotrebom FBI<br />
FBI Kvaliteta vode Stupanj organskog zagañenja<br />
0,00 – 3,75 I klasa prirodne čiste vode<br />
3,76 – 4,25 II klasa slabo organski onečišćene vode<br />
4,26 – 5,00 II - III klasa umjereno organski onečišćene vode<br />
5,01 – 5,75 III klasa znatno organski onečišćene vode<br />
5,76 – 6,50 III – IV klasa jako organski onečišćene vode<br />
6,51 – 7,25 IV klasa vrlo jako organski onečišćene vode<br />
7,26 – 10,00 V klasa iznimno jako organski onečišćene vode<br />
Pantle-Buckov indeks saprobnosti (1955.)<br />
U poglavlju 2.1.6. opisano je kako se ovaj indeks koristi u odreñivanju<br />
organizama indikatora putem fitoplanktona. Ova metoda je pogodna i za<br />
odreñivanje kvalitete vode tj. saprobnosti putem makrozoo<strong>bentos</strong>a.<br />
Za svaki analizirani uzorak mikrofito<strong>bentos</strong>a i makrozoo<strong>bentos</strong>a izračuna se<br />
indeks saprobnosti (S) prema formuli:<br />
Σ(<br />
sh)<br />
S =<br />
Σh<br />
S = indeks saprobnosti<br />
s = stupanj saprobnosti<br />
h = zastupljenost<br />
Da bi dobili indeks saprobnosti, stupanj zastupljenosti i zastupljenost, koristimo<br />
"Indeks za limnosaprobitet" prema R. Weglu. Vrijednosti indeksa saprobnosti<br />
uvrstimo u tablice.<br />
105
3.5. Raznolikost zajednica<br />
Na osnovi gustoće populacija i broja vrsta mogu se usporediti različiti tipovi voda,<br />
kao što su jezero – bara, brzi – spori potok. Mogu se meñusobno usporeñivati<br />
različita staništa na jednom tipu kopnenih voda (npr. gornji, srednji i donji tok<br />
potoka). Bazira se na biološkom načelu koje kaže da se u ekstremnim uvjetima<br />
razvijaju životne zajednice siromašnije po broju vrsta, ali, zbog manje<br />
kompeticije, s većom gustoćom populacija. Pri optimalnim uvjetima, velika je<br />
raznolikost vrsta koje su zastupljene s malim brojem jedinki. Iz ovog slijedi da<br />
odnos broja vrsta i broja jedinki ukazuje na odreñeno stanje ekoloških uvjeta na<br />
tom lokalitetu. Raznolikost zajednica moguće je odrediti putem mnogobrojnih<br />
indeksa, a neki od njih su: indeks raznolikosti (d), Simpsonov indeks raznolikosti<br />
(D) i Shanon – Wienerov indeks raznolikosti (H). Kako bi se ustanovila sličnost<br />
pojedinih biotopa i meñusobno ustanovile njihove udaljenosti, koristimo:<br />
Kvocijent sličnosti (QS), Jaccardov indeks (I) i Indeks sličnosti po Sorenesenu<br />
(I)<br />
106
Indeksi raznolikosti<br />
Indeks raznolikosti (d)<br />
Indeks raznolikosti se računa po formuli:<br />
d =<br />
S<br />
N<br />
gdje je:<br />
S= broj vrsta<br />
N= broj jedinki na odreñenom prostoru (1m 2 , 1m 3 …)<br />
Prema tome, ako za neki biotop izračunamo veći indeks raznolikosti nego za<br />
drugi, znači da tamo vladaju povoljniji životni uvjeti nego u drugom biotopu.<br />
Obrnuto, mali indeks raznolikosti, zbog malog broja vrsta i velikog broja jedinki,<br />
ukazuje na udaljavanje životnih uvjeta od optimuma. To udaljavanje može biti<br />
uzrokovano promjenom jednog ili više ekoloških činilaca, a možda, najočitije<br />
ukazuje na djelovanje onečišćenja (Kerovec, 1987)<br />
Simpsonov indeks raznolikosti (D)<br />
Simpsonov indeks raznolikosti (D) je najčešća metoda procjene raznolikosti<br />
makrozoo<strong>bentos</strong>a, koji se odnosi prema udjelu pojedine (i-te) vrste u zajednici<br />
(pi):<br />
D =<br />
s<br />
∑<br />
i=<br />
1<br />
( ) 2<br />
p<br />
i<br />
Vrijednosti ovog indeksa kreću se od 0 do 1. Često se koristi i modificirani<br />
Simpsonov indeks. Računa se slijedećim izrazom:<br />
1− D = 1−<br />
∑<br />
=<br />
gdje je:<br />
s<br />
i 1<br />
( ) 2<br />
p<br />
i<br />
pi = udio individua jednog taksona od ukupnog broja svih taksona<br />
s= ukupan broj taksona u uzorku.<br />
107
Dobivene vrijednosti se kreću od 0 (nizak stupanj raznolikosti) do maksimalno 1<br />
(1-1/s).<br />
Da bi se dobio koliki broj vrsta je potreban da bi se dobila vrijednost D, računa se<br />
recipročni Simpsonov indeks:<br />
1<br />
D<br />
1<br />
= 2<br />
p<br />
∑<br />
(Krebs, 1994)<br />
i<br />
Shanon – Wiener indeks raznolikosti (H)<br />
Računa se slijedećom formulom<br />
s<br />
H = −∑<br />
i 2<br />
i=<br />
1<br />
gdje je:<br />
( p )( log p )<br />
i<br />
pi= udio individua jednog taksona od ukupnog broja svih taksona<br />
s= ukupan broj taksona u uzorku.<br />
Shanon – Wiener indeks raznolikosti povećava se s brojem vrsta u zajednici i<br />
teorijski može doseći vrlo visoke vrijednosti. No, u praksi, prilikom mjerenja<br />
biološke raznolikosti, obično ne prelazi vrijednosti od 5. Teoretska maksimalna<br />
vrijednost iznosi log (S), a minimalna (kada je N>S) je log (N/(N-S)).<br />
Da bi se dobila jedinica broja vrsta, dobivena vrijednost H može se izraziti<br />
slijedećim izrazom:<br />
N1 = e H<br />
gdje je:<br />
e = 2,71828 (baza prirodnog logaritma)<br />
H = Shanon – Wienerov indeks<br />
108
N1 = broj vrsta potreban da se dobije ista raznolikost kao H<br />
Ovaj broj nam označava koliki broj vrsta je potreban da se dobije ista raznolikost<br />
kao vrijednost H (Krebs, 1994).<br />
Indeksi udaljenosti zajednica<br />
Indeks sličnosti po Sorenesenu<br />
Indeks sličnosti po Sorenesenu pokazuje sličnost pojedinih biotopa na osnovi<br />
sastava njihovih biocenoza. Računa se slijedećim izrazom:<br />
S s<br />
c<br />
=<br />
a + b<br />
2<br />
gdje je:<br />
a = broj vrsta u jednom biotopu<br />
b= broj vrsta u drugom biotopu<br />
c= broj zajedničkih vrsta dvaju biotopa<br />
Jaccardov indeks (I)<br />
S j<br />
c<br />
=<br />
a + b − c<br />
gdje je:<br />
a = broj vrsta u jednom biotopu<br />
b= broj vrsta u drugom biotopu<br />
c= broj zajedničkih vrsta dvaju biotopa<br />
Vrijednosti ovih indeksa kreću se od 0 (zajednice se ne razlikuju) do 1 (zajednice<br />
se potpuno razlikuju) (Krebs, 1994).<br />
109
3.6. VJEŽBE - MAKROZOOBENTOS<br />
110
Potrebna oprema za teren<br />
Surberova dredža<br />
Sito<br />
Pincete<br />
Formalin ili alkohol<br />
Posude za spremanje uzoraka <strong>bentos</strong>a<br />
Vodootporni flomaster<br />
U laboratoriju:<br />
Pincete<br />
Petrijevke<br />
Vaga<br />
Ocjedni papirići<br />
Ključ za determinaciju (Kerovec, 1996)<br />
111
Vježba 1. Uzimanje uzoraka <strong>bentos</strong>a i determinacija<br />
Nakon što smo sakupili <strong>bentos</strong>, potrebno je izvršiti determinaciju vrsta.<br />
Determinaciju vršimo pomoću slijedećeg ključa:<br />
Kerovec, M. (1986): Priručnik za upoznavanje beskralješnjaka naših potoka i<br />
rijeka. Sveučilišna naklada Liber. Zagreb.<br />
Vježba 2. Odreñivanje mase i brojnosti vrsta<br />
Determinirani <strong>bentos</strong> (porodice, vrste) složiti na upijajući papir prema skupinama.<br />
Izbrojati iste skupine organizama (iste porodice ili iste vrste) te ih izvagati.<br />
Zabilježiti brojnost i masu.<br />
112
Vježba 3: Biotički bodovni indeks<br />
Nakon provedene determinacije uzorka makrozoo<strong>bentos</strong>a pristupit ćemo<br />
dodjeljivanju bodova organizmima indikatorima (Slika 73) te izvršiti izračun<br />
prema sljedećoj formuli:<br />
UB<br />
BBI =<br />
N<br />
Potrebno je utvrditi biotički bodovni indeks (BBI) tako da ukupni zbroj bodova<br />
(UB) podijelimo s brojem utvrñenih indikatora (N). Kod toga se zanemaruju ostale<br />
nañene vrste koje nisu na popisu indikatora.<br />
Vrijednosti BBI se klasificiraju:<br />
10-8 Prirodne čiste vode (I klasa)<br />
8-6 Slabo onečišćene vode (II klasa)<br />
6-4 Onečišćene vode (III klasa)<br />
4-2 Jako onečišćene vode (IV klasa)<br />
2-1 Vrlo jako onečišćene vode (V klasa)<br />
Primjer:<br />
Na Sljemenskom potoku Črnomerec utvrñeno je:<br />
Postaja A (gornji tok) Postaja B (donji tok)<br />
Astacus astacus 9 Erpobdella sp. 3<br />
Gammarus sp. 6 Tubificidae 1<br />
Ecdyonurus sp. 10 Asellus aquaticus 3<br />
Eporus sp. 10 Chironomus sp. 2<br />
Perla sp. 10<br />
Sericosoma sp. 9<br />
N = 6 UB=54 N =4 UB=9<br />
BBIA = 9 BBIB = 2,2<br />
Prema tome, izračunate vrijednosti BBI ukazuju na izvrsnu kvalitetu vode na<br />
gornjem toku potoka te na jako onečišćenje njegova donjeg toka.<br />
113
Slika 73: Organizmi indikatori:<br />
114
115
Vježba 4: Family biotic indeks<br />
Nakon provedene determinacije uzorka makrozoo<strong>bentos</strong>a pristupit ćemo<br />
dodjeljivanju bodova pojedinim porodicama (Tablica 13) te izvršiti izračun prema<br />
sljedećoj formuli:<br />
gdje je:<br />
FBI =<br />
∑<br />
xi – broj jedinki unutar taksona<br />
ti – tolerancija taksona na onečišćenje<br />
n – ukupan broj organizama u uzorku<br />
x<br />
n<br />
i<br />
t<br />
i<br />
Dobivene vrijednosti uvrstimo u Tablicu 12 i odredimo stupanj organskog<br />
zagañenja.<br />
Tablica 12: Vrijednosti kvalitete vode upotrebom FBI<br />
FBI Kvaliteta vode Stupanj organskog zagañenja<br />
0,00 – 3,75 I klasa prirodne čiste vode<br />
3,76 – 4,25 II klasa slabo organski onečišćene vode<br />
4,26 – 5,00 II - III klasa umjereno organski onečišćene vode<br />
5,01 – 5,75 III klasa znatno organski onečišćene vode<br />
5,76 – 6,50 III – IV klasa jako organski onečišćene vode<br />
6,51 – 7,25 IV klasa vrlo jako organski onečišćene vode<br />
7,26 – 10,00 V klasa iznimno jako organski onečišćene vode<br />
116
Tablica 13: Pripadajući bodovi pojedinim porodicama za izračunavanje Family Biotic<br />
Index (FBI)<br />
Porodica bod Porodica bod Porodica bod<br />
Plecoptera Trichoptera Diptera<br />
Capniidae 1 Brachycentridae 1 Athericidae 2<br />
Chloroperlidae 1 Calamoceratidae 3 Blephariceridae 0<br />
Leuctridae 0 Glossosomatidae 0 Ceratopogonidae 6<br />
Nemouridae 2 Helicopsychidae 3 Chirinomini 8<br />
Perlidae 1 Hydropsychidae 4 Drugi Chironomidae 6<br />
Perlodidae 2 Hydroptilidae 4 Dolochopodidae 4<br />
Pteronarcyidae 0 Lepidostomatidae 1 Empididae 6<br />
Taeniopterygidae 2 Leptoceridae 4 Ephydridae 6<br />
Ephemeroptera Limnephilidae 4 Muscidae 6<br />
Baetidae 4 Molannidae 6 Psychodidae 10<br />
Baetiscidae 3 Odontoceridae 0 Simuliidae 6<br />
Caenidae 7 Philpotamidae 3 Syrphidae 10<br />
Ephemerellidae 1 Phryganeidae 4 Tabanidae 6<br />
Ephemeridae 4 Polycentropodidae 6 Tipulidae 3<br />
Heptageniidae 4 Psychomyiidae 2 Amphipoda<br />
Leptophlebiidae 2 Rhyacophilidae 0 Gammaridae 4<br />
Metretopodidae 2 Sericostomatidae 3 Isopoda<br />
Oligoneuriidae 2 Uenoidae 3 Asellidae 8<br />
Polymitarcyidae 2 Megaloptera Decapoda 6<br />
Potomanthidae 4 Corydalidae 0 Acariformes 4<br />
Siphlonuridae 7 Sialidae 4 Mollusca<br />
Tricorythidae 4 Lepidoptera Lymnaeidae 6<br />
Odonata Pyralidae 5 Physidae 8<br />
Aeshnidae 3 Neuroptera Sphaeridae 8<br />
Calopterygidae 5 Climacia sp. 5 Hirudinea<br />
Coenagrionidae 9 Coleoptera Bdellidae 10<br />
Cordulegastridae 3 Dryopidae 5 Helobdella 10<br />
Corduliidae 5 Elmidae 4 Polychaeta<br />
Gomphidae 1 Psephenidae 4 Sabellidae 6<br />
Lestidae 9 Collembola Turbellaria<br />
Libellulidae 9 Isotomurus sp. 5 Platyhelminthidae 4<br />
Macromiidae 3 Oligochaeta 8 Coelenterata<br />
Hydra sp. 5<br />
117
Vježba 5. Pantle – Buckov indeks saprobnosti<br />
Nakon što smo izvršili determinaciju makrozoo<strong>bentos</strong>a, potrebno je procjeniti<br />
gustoću prema slijedećoj tablici<br />
Procjena gustoće bioindikatora za izračunavanje indeksa saprobnosti:<br />
OCJENA GUSTOĆE MAKROZOOBENTOS<br />
(BROJ I OPIS)<br />
(BROJ VRSTA U UZORKU)<br />
1 – pojedinačno, rijetko 1- 10<br />
3 – srednje > 10 – 75<br />
5 – masovno > 75<br />
Za svaki analizirani uzorak makrozoo<strong>bentos</strong>a izračuna se indeks saprobnosti (S)<br />
prema formuli:<br />
Σ(<br />
sh)<br />
S =<br />
Σh<br />
S = indeks saprobnosti<br />
s = stupanj saprobnosti<br />
h = zastupljenost<br />
Da bi dobili indeks saprobnosti, stupanj zastupljenosti i zastupljenost, koristimo<br />
"Indeks za limnosaprobitet" prema R. Weglu.<br />
Primjer:<br />
VRSTA h s sh<br />
Achnantes minutissima 1 2,0 2,0<br />
Cymbella ventricosa 3 2,0 6,0<br />
Nitzschia palea 5 2,6 13,0<br />
Σ(<br />
sh)<br />
S = =<br />
Σh<br />
21<br />
9<br />
=<br />
2,<br />
3<br />
Nakon što smo odredili indeks saprobiteta, pristupamo odreñivanju klase<br />
kvalitete vode prema tablicama. Prva tablica (A) označava interpolaciju P-B<br />
indeksa saprobnosti u sustav od 5 klasa kvaliteta voda. U tablici B mogu se<br />
vidjeti klase kvalitete voda prema vrijednosti indeksa saprobnosti.<br />
118
A: Interpolacija P-B indeksa saprobnosti u sustav od 5 klasa kvalitete voda<br />
KLASA<br />
KVALITETE VODA<br />
KLASA<br />
INDEKS<br />
SAPROBNOSTI (S)<br />
I I + I – II 1,0 -
Odrediti Indeks raznolikosti (d)<br />
d =<br />
S<br />
N<br />
gdje je:<br />
S= broj vrsta<br />
Vježba 6. Indeks raznolikosti<br />
N= broj jedinki na odreñenom prostoru (1m 2 , 1m 3 …)<br />
120
Vježba 7: Simpsonov indeks raznolikosti<br />
Odrediti Simpsonov indeks raznolikosti (D) i modificirani Simpsonov indeks<br />
raznolikosti (1 – D)<br />
( ) 2<br />
s<br />
D = ∑ p<br />
( ) i<br />
i=<br />
1<br />
2 s<br />
1− D = 1−<br />
∑ pi<br />
i=<br />
1<br />
gdje je:<br />
pi = udio individua jednog taksona u odnosu na ukupan broj svih taksona<br />
s= ukupan broj taksona u uzorku.<br />
Odrediti recipročni Simpsonov indeks 1/D<br />
1<br />
D<br />
Postupak:<br />
1<br />
= 2<br />
p<br />
∑<br />
i<br />
Takson Broj individua (ni) pi<br />
Chironomidae 1940 0,521<br />
Tipulidae 1207 0,324<br />
Heptageniidae 171 0,046<br />
Hydropschiidae 134 0,036<br />
Ephydridae 97 0,026<br />
Muscidae 93 0,025<br />
Psychodidae 34 0,009<br />
Simuliidae 22 0,006<br />
Syrphidae 15 0,004<br />
Tabanidae 7 0,002<br />
Ephemeridae 4 0,001<br />
Ukupno 3724 1,000<br />
D= 1 – 0,521 2 + 0,324 2 + 0,046 2 + ….. + 0,001 2<br />
1 - D= 1- 0,381<br />
1 - D= 0,619<br />
1 1<br />
=<br />
D 0,<br />
381<br />
1<br />
= 2.<br />
623<br />
D<br />
vrsta<br />
121
Vježba 8: Shanen Wienerov indeks raznolikosti<br />
Odrediti Shanen Wienerov indeks raznolikosti (H)<br />
s<br />
H = ∑ i 2<br />
i=<br />
1<br />
gdje je:<br />
( p )( log p )<br />
i<br />
pi= udio individua jednog taksona od ukupnog broja svih taksona<br />
s= ukupan broj taksona u uzorku.<br />
Nakon toga, odrediti koliki broj vrsta je potreban da se dobije vrijednost H.<br />
Postupak:<br />
N1 = e H<br />
gdje je:<br />
e = 2,71828 (baza prirodnog logaritma)<br />
H = Shanon – Wienerov indeks<br />
N1 = broj vrsta potreban da se dobije ista raznolikost kao H<br />
Takson Broj individua (ni) pi<br />
Chironomidae 1940 0,521<br />
Tipulidae 1207 0,324<br />
Heptageniidae 171 0,046<br />
Hydropschiidae 134 0,036<br />
Ephydridae 97 0,026<br />
Muscidae 93 0,025<br />
Psychodidae 34 0,009<br />
Simuliidae 22 0,006<br />
Syrphidae 15 0,004<br />
Tabanidae 7 0,002<br />
Ephemeridae 4 0,001<br />
Ukupno 3724 1,000<br />
H = (0,521) (log20,521) + (0,324) (log20,324) + … (0,001) (log20,001)<br />
H = 1,829<br />
N1 = 2,71828 1,829<br />
N1 = 3,55 vrsta<br />
122
Vježba 9: Indeks sličnosti po Sorenesenu i Jaccardov indeks<br />
Odrediti Indeks sličnosti po Sorenesenu (Ss) I Jaccardov indeks (Sj)<br />
S s<br />
S j<br />
2c<br />
=<br />
2c<br />
+ a + b<br />
c<br />
=<br />
a + b − c<br />
gdje je:<br />
a = broj vrsta u jednom biotopu<br />
b= broj vrsta u drugom biotopu<br />
c= broj zajedničkih vrsta dvaju biotopa<br />
Primjer: Broj zajedničkih vrsta:<br />
Gornji tok = 16 vrsta gornji – srednji =6<br />
Srednji tok = 13 vrsta gornji - donji = 3<br />
Donji tok = 8 vrsta srednji - donji = 3<br />
Sličnost izmeñu gornjeg i srednjeg toka:<br />
Ss= 2x6 / (2x6+16 + 13) = 0,29<br />
Sj= 6 (16+13-6) -1 = 0,26<br />
Sličnost izmeñu srednjeg i donjeg toka<br />
Ss= 2x3 / (2x3 + 13 + 8)= 0,22<br />
Sj= 3 (13+8-3) -1 = 0,16<br />
123
4. SEMINARSKI RADOVI:<br />
RAZVIJANJE TIMSKOG RADA<br />
Studenti će biti podijeljeni na radne timove koji će biti sastavljeni od najviše 4<br />
osoba. Nakon što im je dodijeljena tema, studenti će meñusobno podijeliti<br />
zadatke na način da svatko od njih ima približno isti opseg posla.<br />
Terenska istraživanja će se sastojati od četiri uzorkovanja u istim vremenskim<br />
razmacima. Nakon prikupljanja i obrade uzoraka u laboratoriju, slijedi prikupljanje<br />
dodatne literature kako bi se dobiveni podaci mogli kvalitetno interpretirati.<br />
U slijedećih nekoliko termina slijedi pisanje seminarskih radova. Nakon što su<br />
seminarski radovi napisani i pregledani od mentora, izrañuju se prezentacije.<br />
Prezentacije za izlaganje trebaju biti napravljene u programu Microsoft Power<br />
Point.<br />
UPUTE ZA PISANJE SEMINARSKIH RADOVA<br />
Seminarski radovi moraju imati slijedeća poglavlja:<br />
Uvod<br />
Cilj istraživanja<br />
Materijal i metode<br />
Rezultati<br />
Rasprava<br />
Zaključci<br />
Literatura<br />
UVOD I CILJ ISTRAŽIVANJA<br />
U uvodu se iznosi ideja zadatka i cilj istraživanja. Ondje se piše na način da se<br />
čitaoc zainteresira za djelo, odnosno za problem koji se obrañuje. U uvodu se<br />
daje opće područje istraživanja, navode se dosadašnji rezultati kao osnova<br />
dotičnih istraživanja i iznosi ono što je nepoznato. Na kraju se ističe cilj i svrha<br />
istraživanja.<br />
124
MATERIJAL I METODE<br />
U ovom poglavlju se prikazuje materijal koji je poslužio za istraživanja, način na<br />
koji je materijal obrañen i razlozi zbog kojih su odabrani odreñeni tretmani<br />
istraživanja. Metode rada treba opisati tako da ih mogu primijeniti i drugi<br />
znanstveni radnici ukoliko žele provjeriti dobivene rezultate navedene u članku.<br />
REZULTATI I RASPRAVA<br />
Najvažnije poglavlje je prikaz rezultata. Ondje se opisuju utvrñene činjenice,<br />
tumače pojave i dokazuje hipoteza. Da bi se napisalo ovo poglavlje, potrebno je<br />
analizirati eksperimentalne podatke, napraviti varijacijsko statističku obradu,<br />
tablice i grafikone. Rezultati se prikazuju samo na jedan način i to tekstom,<br />
tablicom ili grafički. Tumačenja rezultata iz tablica i teksta moraju biti istovjetna.<br />
Raspravom prikazujemo značenje rezultata i iznosi se mišljenje i tumačenje<br />
autora. Kritički se razmatra i analizira materijal, metode i rezultati u odnosu na<br />
podatke iz literature kao i tvrdnje u raspravi. Postignuti rezultati moraju biti<br />
dovoljno potkrijepljeni i dokumentirani s podacima iz literature koja se navodi u<br />
popisu.<br />
ZAKLJUČAK<br />
U zaključku se iznosi ono što pruža kratku i jasnu sliku o svemu što se htjelo i što<br />
se postiglo u istraživanjima. Tvrdnje i zaključci trebaju biti kratki, nedvosmisleni i<br />
jasni. Zaključci moraju odgovarati ciljevima.<br />
LITERATURA<br />
Na kraju članka daje se popis literature koja se citira. Treba biti poredana<br />
abecednim redom. Pod bibliografskim podatkom smatra se skup točnih i iscrpnih<br />
elemenata dovoljnih da se neko djelo može identificirati.<br />
Piše se na slijedeći način:<br />
Turk, M. (1995): Hrvatsko slatkovodno ribarstvo u 1994. Ribarstvo, 53,(4), 105-<br />
118.<br />
Ako su dva ili više autora:<br />
125
Treer, T., Treer, D. (1995): Morphometric changes in the smooth newt (Triturus<br />
vulgaris) during the aquatic phase. Ribarstvo, 53, (4), 151-159.<br />
Citiranje knjige:<br />
Roberts, R. J. (1989): Fish pathology. Editor. Second edition. Bailliere-Tindal,<br />
London, 467pp.<br />
Poglavlje u knjizi:<br />
Dickhoff, W.W. (1993): Hormones metamorphosis, and smolting. pp 519-540. In:<br />
Schreibenman, M. P., Scanes, C.g., Pang, P.K.T. (eds.) The endocrinology of<br />
growth development and metabolism in vertebrates. Academic Press, San Diego,<br />
USA. 607pp.<br />
Literatura u tekstu treba biti citirana koristeći Harvard sustav kao: (Smith,1996) –<br />
ako se radi o jednom autoru, (Smith i Jones, 1996)- ako se radi o dva autora,<br />
(Smith i sur., 1996)- ako se radi o više nego dva autora, Smith i Jones (1996),<br />
(Smith, J.R., usmeno priopćenje).<br />
126
5. LITERATURA<br />
Barbour, M. T., Gerritsen, J., Snyder, B. D., Stribling, J. B. (1999): Rapid<br />
Bioassessment Protocols for Use in Streams and Wadeable Rivers:<br />
Periphyton, Bentic Macroinvertebrates and Fish, Second Edition. EPA 841-<br />
B-99-002. U. S. Environmental Protection Agency; Office of Water;<br />
Washington, D. C.<br />
www.epa.gov/owow/monitoring/rbp/wp61pdf/rbp_main.pdf<br />
Dambska, I., Nowinski, M., Rafalski, J., Skuratowicz, W., Wojterski, T.,<br />
Wroblewski, A., Zenkteler, M. (1976): Fitoplankton sztucznych jezior<br />
polozonych na terenie poznania. Poznanskie towarzystwo przyjaciol nauk,<br />
Poznan.<br />
Debeljak, Lj. (1982): Životni uvjeti u vodi. U Bojčić C. (Ur.): Slatkovodno ribarstvo,<br />
Jumena, Zagreb, 55-97.<br />
Filipi, M. (2005): Fizikalno – kemijske osobine i sastav makro<strong>bentos</strong>a potoka<br />
Bliznec i Kraljevec. Diplomski rad, <strong>Agronomski</strong> <strong>fakultet</strong>, Zagreb.<br />
Goldman, C., R. and Horne, A., J. (1977): Limnology. McGraw – Hill Book<br />
Company, New York.<br />
Hilsenhoff, W. L. (1988): Rapid field assessment of organic pollution with a family<br />
– level biotic indeks. J. N. Am. Benthol. Soc. 7 (1): 65 – 68.<br />
Hotzel G. i Croome, R. (1999): A phytoplankton methods Manual for Australian<br />
Freshwaters. Land and Water Resources Research and Development<br />
Corporation. Green Words & Images, Canberra.<br />
www.lwa.gov.au/downloads/publications_pdf/PR990300.pdf<br />
Hustedt, F. (1959): Die kiselalgen. Deutschlands, Österreichs und der Schweiz<br />
unter Berueksiehtigung der übrigen Länder Europas sowio der<br />
angrenzenden Meeresgebiete. Berlin.<br />
127
Karabin, A. (1985): pelagic zooplankton (Rotatoria + Crustacea) variation in the<br />
process of lake eutrophication. I Structural and quantitative features. Ekol.<br />
Pol. 33 (4), 567 – 616.<br />
Kerovec, M. (1986): Priručnik za upoznavanje beskralješnjaka naših potoka i<br />
rijeka. Sveučilišna naklada liber, Zagreb.<br />
Kerovec, M. (1987): Ekologija kopnenih voda. Hrvatsko ekološko društvo, Zagreb<br />
Kerovec, M. (1996): Metoda bodovanja. Športski ribolov, 6: 43-45.<br />
Klemm, D. J., Lewis, P. A., Fulk, F., Lazorchak, J. M. (1990): Macroinvertebrate<br />
field and laboratory methods for evaluating the biological integrity of<br />
surface waters. U.S. Environmental protection agency, Cincinati, Ohio.<br />
www.epa.gov/bioiweb1/html/benthos_methods.html<br />
Knežević, I. (1988): Uvod u znanstveni rad. Poljoprivredni <strong>fakultet</strong> u Osijeku.<br />
Krebs, Charles J. 1999. Ecological Methodology, 2nd ed., Addison-Welsey<br />
Educational Publishers, Inc., Menlo Park, CA. 620 pp.<br />
Lazar, J. (1960): Alge Slovenije seznam slatkovodnih vrst in ključ za določanje.<br />
Slovenska akademija znanosti in umetnosti, Ljubljana.<br />
Lazar, J. (1965): Prispevek k poznavanju flore alg Slovenije, VI. Slovenska<br />
akademija znanosti in umetnosti, Ljubljana.<br />
Lazar, J. (1966): Prispevek k poznavanju flore alg Slovenije, VII. Slovenska<br />
akademija znanosti in umetnosti, Ljubljana.<br />
Lazar, J. (1968): Prispevek k poznavanju flore alg Slovenije, VIII. Slovenska<br />
akademija znanosti in umetnosti, Ljubljana.<br />
Lind, O. T. (1979): Handbook of common methods in limnology. Second edition,<br />
The C. V. Mosby company, Toronto, 199 p.p.<br />
Mandaville, S. M. (2002): Bentic Macroinvertebrates in Freshwaters – Taxa<br />
Tolerance Values, Metrics and Protocols. Soil and water Conservation<br />
Society of Metro Halifax.<br />
128
Martin J. L. (2000): Protocol for Monitoring Phytoplankton. A report by the marine<br />
biodiversity monitoring committee to the ecological monitoring and<br />
assessment network of environment, Canada.<br />
www.eman-rese.ca/eman/ecotools/protocols/marine/phytoplankton/intro.html<br />
Matoničkin, I., Pavletić Z. (1972): Život naših rijeka – biologija tekućih voda.<br />
Školska knjiga, Zagreb.<br />
Mellanby, H. (1963): Animal life in fresh water. Chapman and Hall ltd. London.<br />
NN 77/98: Uredba o klasifikaciji voda.<br />
Paterson, M. (2000): Zooplankton in fresh waters. Ecological monitoring and<br />
assessment network (EMAN) protocols for measuring biodiversity.<br />
www.eman-rese.ca/eman/ecotools/protocols/marine/zooplankton/intro.html<br />
Plafkin, J. L., Barbour, M. T., Porter, K. D., Gross, S. K. Hughes, R. M. (1989): Rapid<br />
Bioassessment Protocols for Use in Streams and Rivers: Bentic<br />
Macroinvertebrates and Fish. U. S. Environmental Protection Agency. EPA<br />
440/4-89/001.<br />
Voigt, M. i Koste, W. (1978): Rotatoria. Gebruder Borntraeger, Berlin, Stuttgart.<br />
Vrebčević, B. (1996): Priručnik za upoznavanje slatkovodnih račića veslonožaca<br />
(Copepoda, Cyclopidae) i rašljoticalaca (Cladocera) Hrvatske. Hrvatsko<br />
ekološko društvo, Zagreb, 157 pp.<br />
Wegl, R. (1983): Indeks für die limnosaprobität. Verlagsort, Wien.<br />
Korištene web stranice:<br />
http://www.pmf.unsa.ba/biologija/talofiti/sadrzaj-alge.htm (Alge - biosistematika i<br />
ekologija)<br />
http://biology.rwc.uc.edu/HomePage/BWS/planktonkey/phytozoo.html (Ključ za<br />
plankton)<br />
http://www.water.ky.gov/sw/swmonitor/sop/ (Priručnici za odreñivanje biološkog<br />
integriteta vode)<br />
http://enviroportal.sk/ziva-priroda/<br />
129
6. INDEKS<br />
analiza perifitona, 48<br />
Annelida, 92<br />
Arthropoda, 94<br />
Bacillariophyceae, 17<br />
<strong>bentos</strong>, 2<br />
Bivalvia, 91<br />
Chlorophyta, 23<br />
Cilj istraživanja, 127<br />
Cladocera, 75<br />
Coleoptera, 95<br />
Copepoda, 75<br />
Crustacea, 94<br />
Crvene alge, 15<br />
Cryptophyta, 21<br />
cvjetanje algi, 37<br />
Cyanophyta, 7, 8, 9<br />
diatoma, 50<br />
Dictiochophyceae, 20<br />
Dinophyta, 22<br />
Diptera, 96<br />
Ekman, 101<br />
Ephemeroptera, 99<br />
fitoplankton, 5<br />
Gastropoda, 90<br />
Haptophyta, 20<br />
Heteroptera, 95<br />
Hirudinea, 93<br />
holoplankton, 5<br />
Hoseip, 35<br />
identifikacija algi, 42<br />
indeks raznolikosti, 109<br />
Indeks sličnosti po Sorenesenu, 109<br />
Insecta, 94<br />
Jaccardov indeks, 109<br />
klorofil a, 52<br />
Kvocijent sličnosti, 109<br />
Lebdeća mreža, 103<br />
literatura, 128<br />
materijal i metode, 128<br />
Megaloptera, 97<br />
meroplankton, 6<br />
mikroskop, 42<br />
modrozelene alge, 5, 6, 7, 10, 13, 52<br />
Mollusca, 90<br />
Nansen, 31, 32, 38<br />
Naphrax, 50<br />
Neubauer, 47<br />
Neurbaeur, 42<br />
Niskin, 31, 32, 38<br />
Odonata, 98<br />
Oligochaeta, 92<br />
Pantle-Buckov indeks saprobnosti, 55<br />
perifiton, 2, 38<br />
Phaeophyceae, 20<br />
plankton, 2, 4, 15, 74, 75, 132<br />
planktonska mrežica, 29<br />
Plecoptera, 98<br />
Raphidophyceae, 19<br />
Rezultati i rasprava, 128<br />
Rotatoria, 74<br />
Secchi disk, 37<br />
Sedgwick Rafter, 42, 46<br />
seminarski radovi, 127<br />
Shanon – Wienerov indeks raznolikosti, 109<br />
Simpsonov indeks raznolikosti, 109<br />
supstrat, 3, 38, 39, 40, 102<br />
Surberova dredža, 102<br />
Taylor, 32<br />
termalna stratifikacija, 5<br />
Trichoptera, 97<br />
Turbellaria, 90<br />
Utermöhl, 42, 43, 44, 46<br />
Uvod, 127<br />
Van Dorn, 31, 32, 38<br />
Whatman, 51<br />
xanthophyceae, 16<br />
zaključak, 128<br />
zlatnosmeñe alge, 15<br />
zoo<strong>bentos</strong>, 90<br />
zooplankton, 74<br />
130