Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej
Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej
5. DETEKCJA I ANALIZA DNA. 5. 1. Elektroforeza DNA na żelu agarozowym. CZĘŚĆ PRAKTYCZNA. Materiały i sprzęt: 1. Agaroza 0,45 g (mały żel 1,5 % o długości około 8 cm) 2. 1 x stężony bufor TBE (90 mM Tris-boran, 2 mM EDTA) 3. Bufor obciążający 6 x razy stężony do próbek. 4. Marker DNA 5. Roztwór bromku etydyny. 6. Zasilacz. 7. Mały aparat do elektroforezy poziomej. Wykonanie 1. Agarozę rozpuścić w 30 ml buforu TBE. 2. Agarozę wylać na płytę aparatu, przed zastygnięciem umieścić w żelu grzebień na odpowiedniej głębokości, aby uzyskać studzienki. 3. Po zastygnięciu żelu zalać go buforem 1 x stężonym TBE tak, aby pokrywał on powierzchnię żelu. 4. Próbki DNA po 10 μl zawiesić w buforze obciążającym 2 μl. 5. Nanieść próbki do studzienek w żelu. 6. Elektroforezę prowadzić przy stałym napięciu 100 V do momentu uzyskania prawidłowego rozdziału próbek 7. Żel barwić w roztworze bromku etydyny 8. Analizę wyników prowadzić w świetle UV. a).wylewanie żelu agarozowego grzebień Płytka do wylewania żelu b). prawidłowe ustawienie grzebienia Zęby grzebienia DNA, AMPLIFIKACJA (PCR) A agaroza Taśma uszczelniająca Żel agarozowy Szkielet cukrowo-fosforanowy a). cząsteczka bromku etydyny H2N Para zasad 3,4 Å I Cząsteczka DNA N + EtBr NH2 CH3Br - b). interkalacja bromku etydyny w obręb podwójnej nici DNA B Cząsteczka bromku etydyny >3,4 Å I 3,4 Å 22
DNA, Detekcja i analiza 23
- Page 1 and 2: Akademia Medyczna w Gdańsku Katedr
- Page 3: 1. 1. Zagadnienia ogólne: CZĘŚĆ
- Page 6 and 7: Inne istotne cechy, które powinien
- Page 8: * Region ekspresji T7: gen bla miej
- Page 11 and 12: 1.3. Przygotowanie i transformacja
- Page 13 and 14: 2. WYBRANE ENZYMY WYKORZYSTYWANE DO
- Page 15 and 16: Zastosowanie. Dzięki ligazie może
- Page 17 and 18: Wykonanie: 1. Zaszczepić pojedyncz
- Page 19 and 20: cykl 4 W reakcji syntezy DNA stosow
- Page 21: - supernatant przenieść do jałow
- Page 25 and 26: Wykonanie: Sprawdzanie poziomu indu
- Page 27 and 28: CZĘŚĆ PRAKTYCZNA Materiały: 1.
- Page 29 and 30: Wykonanie: Zachować podaną kolejn
- Page 31 and 32: • Zahamować reakcję roztworem "
- Page 33 and 34: BUFOR DO PRZECIWACIAŁ 1 % żelatyn
- Page 35 and 36: papier absorpcyjny żel nitrocelulo
- Page 37 and 38: Objaśnienienie skrótów: IPTG - i
DNA, Detekcja i analiza<br />
23
Change language