Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej

Spis treści:
CZĘŚĆ PIERWSZA: DNA................................................1
1. KLONOWANIE DNA......................................................................................................1
1. 1. Zagadnienia ogólne:...................................................................................................1
1.2. System ekspresyjny z udziałem polimerazy faga T7..................................................4
1.3. Przygotowanie i transformacja komórek kompetentnych...........................................9
2. WYBRANE ENZYMY WYKORZYSTYWANE DO MODYFIKACJI DNA.........11
2.1. Enzymy restrykcyjne - Obróbka enzymatyczna oczyszczonego DNA.....................11
2. 2. Fosfataza alkaiczna – enzym modyfikujący koniec 5’ DNA..................................11
2. 3. Ligaza DNA faga T4................................................................................................12
2. 4. Polimeraza DNA Taq...............................................................................................13
3. IZOLACJA PLAZMIDU METODĄ LIZY ALKALICZNEJ...................................14
4. AMPLIFIKACJA DNA in vitro METODĄ PCR........................................................16
5. DETEKCJA I ANALIZA DNA.....................................................................................20
5. 1. Elektroforeza dna na żelu agarozowym...................................................................20
CZĘŚĆ DRUGA: BIAŁKA...............................................22
1. PRODUKCJA ZREKOMBINOWANEGO BIAŁKA ................................................22
1.1 Sprawdzenie poziomu indukcji białka.......................................................................22
2. IZOLACJA I OCZYSZCZANIE BIAŁKA..................................................................24
3.ANALIZA ILOŚCI I JAKOŚCI BIAŁKA....................................................................26
3. 1. Elektorforeza poliakrylamidowa białek...................................................................26
3. 2. Western blotting – immunobloting..........................................................................29