Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej

cykl 4
W reakcji syntezy DNA stosowana jest termostabilna polimeraza wyizolowana z
termofilnej bakterii Thermus aquaticus-Taq polimeraza (II.4.).
Matrycą do syntezy DNA może być DNA liniowy, plazmidowy (ccc), cały genom np.
bakterii; nie musi być on oczyszczany. Reakcja amplifikacji DNA metodą PCR odbywa się w
specjalnym urządzeniu, umożliwiającym szybkie zmiany temperatury (termocykler).
Zastosowanie PCR
1. Amplifikacja fragmentu DNA – uzyskanie dużej ilości określonego fragmentu DNA
np. do klonowania
2. Diagnostyka molekularna – wykrywanie patogenów w próbkach klinicznych,
identyfikacja próbek w medycynie sądowej (możliwa z bardzo niewielkiej próbki, np.
pojedynczego włosa), analiza mutacji w chorobach nowotworowych
3. Synteza specyficznych sond.
4. Tworzenie bibliotek genomowych
Rys. 4 Schemat obrazuje cztery pierwsze cykle łańcuchowej reakcji polimerazy
in vitro – PCR. Prosta ciągła linia oznacza matrycową nić DNA, która ulega powieleniu
(amplifikacji). Strzałki biała i czarna obrazują odpowiednio lewy i prawy primer.
Oligonukleotydowe primery mają długość 18–30 pz i są komplementarne do obszarów
ograniczających amplifikowaną sekwencję.
DNA, AMPLIFIKACJA (PCR)
cykl 3
cykl 2
cykl 1
19