Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej
Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej
Skrypt ćwiczeniowy - Katerda i Zakład Mikrobiologii Farmaceutycznej
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Szczep E. coli BL 21 (DE 3)<br />
Polimeraza<br />
RNA<br />
E.coli<br />
• Szczep ten na chromosomie posiada sztucznie wprowadzony gen kodujący<br />
polimerazę RNA faga T7 pod kontrolą promotora lacUV5 rozpoznawanego<br />
przez polimerazę RNA E. coli.<br />
• Promotor podlega regulacji zewnętrznej. Bez induktora do sekwencji operatora<br />
zostaje przyłączony represor LacI. Ekspresja jest indukowana przez dodanie<br />
do pożywki IPTG.<br />
represor<br />
LacI<br />
gen<br />
represora<br />
LacI<br />
Indukcja IPTG<br />
lacO<br />
promotor<br />
lacUV5<br />
gen polimerazy<br />
RNA faga T7<br />
Genom<br />
E.coli<br />
polimeraza<br />
RNA T7<br />
Indukcja IPTG<br />
Polimeraza T7<br />
RNA T7<br />
represor<br />
LacI<br />
gen<br />
represora<br />
LacI<br />
lacO<br />
promotor T7<br />
pET 16b<br />
Rys. 1 Elementy regulatorowe w systemie nadprodukcji białek faga T7.<br />
gen kodujący<br />
białko<br />
Przy braku induktora uzyskujemy podwójną blokadę:<br />
1. Represor blokuje promotor lacUV5 na chromosomie bakteryjnym – polimeraza RNA<br />
E. coli nie może transkrybować genu polimerazy RNA faga T7.<br />
2. Represor łączy się z sekwencją operatora (lacO) blokując dostęp do promotora faga<br />
T7 na plazmidzie.<br />
Gdyby z jakiegoś powodu nie doszło do represji promotora na plazmidzie (np.<br />
mutacja sekwencji operatora lacO) przy braku induktora i tak nie dojdzie do ekspresji<br />
klonowanego genu – brak polimerazy RNA T7<br />
Dodanie induktora: w pierwszej kolejności musi dojść do ekspresji genu polimerazy<br />
RNA T7 z chromosomu, odpowiada za to polimeraza bakteryjna. Dopiero jak<br />
powstanie polimeraza T7 rozpozna ona specyficznie promotor faga T7 na plazmidzie i<br />
dojdzie do ekspresji klonowanego genu.
Change language