ÇUKUROVA ÜNİVERSİTESİ FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ ...

3. MATERYAL ve METOD Tamer KAYIŞ
yavaşlar ve sonuçta spektrofotometrede okunan absorbans değeri düşer. Dolayısıyla
formazon oluşumunun inhibisyonun tayiniyle SOD miktarı indirekt olarak
saptanmaktadır.
Reaktif çözeltisinin bileşenleri
Ksantin çözeltisi (0,3 mM): 9.13 mg ksantin (Sigma; X7375) önce birkaç damla 1N
NaOH ile çözüldü daha sonra hacim bidistile saf su ile 200 ml ye tamamlandı.
EDTA (0.6 mM): 22.3 mg EDTA (C10H14N2O8Na22H2O) (Sigma: E-1644) toplam
hacim 100 ml olacak şekilde bidistile saf suda çözüldü.
NBT (150 µg/l): 12.3 mg NBT (Sigma; N6876) toplam hacim 100 ml olacak şekilde
bidistile saf suda çözüldü.
Na2CO3 (400 mM): 4.24 g Na2CO3 toplam hacim 100 ml olacak şekilde bidistile saf
suda çözüldü.
BSA (1 g/l): 25 mg BSA toplam hacim 25 ml olacak şekilde bidistile saf suda
çözüldü.
Reaktif çözeltisi (20 testlik): 20 ml ksantin çözeltisi, 10 ml EDTA çözeltisi, 10 ml
NBT çözeltisi, 6 ml Na2CO3 çözeltisi ve 3 ml BSA çözeltisi alındı ve
karıştırıldı.
Ksantin oksidaz [(EC:1.17.3.2) (Sigma; X1875) (167 U/l)] enziminden 48 µl alındı,
3 ml 2M buz soğukluğunda (NH4)2SO4 de çözüldü.
2M (NH4)2SO4: 2.643 g (NH4)2SO4 toplam hacim 10 ml olacak şekilde bidistile saf
su içerisinde çözüldü.
CuCl2.2H2O (0.8 mM): 13,6 mg CuCl2.2H2O toplam hacim 100 ml olacak şekilde
bidistile saf suda çözüldü.
44