PDF Dosyası - Ankara Üniversitesi Kitaplar Veritabanı

6 — OPSONO - CYTOPHAGİC TESTBu deney; Neutrophyle'lerin Brucellâ grubu mikroorganizmalarıinvitro olarak fagosite etme özelliklerinden yararlanılarak yapılmıştır(32).Deneyin Yapılması :1 — Bakteri süspansiyonunun hazırlanması:Katı besi yerindeki Smooth Brucellâ Strain'ine ait kültürler ticarîformalinin fizyolojik tuzlu sudaki % 0,4 solüsyonu ile yıkanır.24 saat oda derecesine terk edilir. Santrifüje edilir. Mayi kısım atılır.Tuzlu sudaki % 0,1 formalin ile tekrar süspansiyon yapılır. Bu süspansiyonunkesafeti, tüpün 2 cm. arkasında bulunan plâtin özenin görülebileceğiderecedeki yoğunlukta olmalıdır.2 — Citrate'h kanın hazırlanması :Serum fizyolojik ile hazırlanmış % 10 nispetindeki Steril Sodiumcitrate solüsyonundan bir küçük tüpe (0,1 c.c.) konur. Üzerine 2 c.c.alınmış taze kan ilâve edilir ve koagülâsyonun önüne geçmek için derhalriyice karıştırılarak buzluğa konur.3 — Citrate'lı kan ile, antigen (bakteri) süspansiyonunun karıştırılması:Dört saat içinde citrate'lı kanın antigenle karıştırılması lâzımdır.Bunun için 0,1 c.c. citrate'lı kan 0,1 c.c. formollü bakteri süspansiyonuile steril küçük bir deney tübü içinde karıştırılıp, 37 C° deki subanyosunda 30 dakika tutulur. İyice karıştırılır. Pasteur pipeti ile azbir miktar alınır ve ince bir froti yapılır. Leukocyte'lerin büzülerek şekillerininbozulmasına meydan vermemek için lâm havagazı bekindensüratle 4 def'a geçirilerek kurutulur. Bundan sonra preparat; on mislisulandırılmış Ziehl-Neelsen Carbolfuchsin boya solüsyonu ile lâmın üzeriiyice örtülecek şekilde 2 dakika boyanır, çeşme suyu ile hafifçe yıkanıpkurumağa terk edilir.Sonra immersiyonla mikroskop altında muayene edilir. BuradaNeutrophile'lerin nucleusları ile fagosite edilmiş Bmcella grubu mikroorganizmalarkoyu kırmızı boya almış olup, leukocyte'lerin cytoplasmalarmınhafif penbeye boyanmış oldukları görülür. Cytoplasma içindekigranüller ise boya almazlar. Bu suretle fagosite edilmiş Brucellâ grubumikroorganizmalar kolayca sayılırlar. Denemede, şahit olarak negatifve positif citrate'lı kan numuneleri ile paralel çalışmalıdır.80