DFS-70 - Frame

P.O. Number Terms Rep Ship Via F.O.B. ProjectQuantity Item Code Description Price Each AmountDr.Hüseyin TUTKAKAnkara Üniversitesi Tıp Fakültesiİmmünoloji ve Allerji Hastalıkları BDTotal

DoğalIgG,IgM, IgAPolireaktifDüşük affiniteDüşük titreEşey hücre öncülleri (germline) kaynaklıPatojenikBaşlıca IgGSınırlı reaktiviteYüksek affiniteYüksek titreSomatik mutasyon31.05.2011 Dr.H.Tutkak 3

ANTİKOR TİTRESİ ve AVİDİTEKLİNİK ÖNEM EŞİKDEĞERİ31.05.2011 Dr.H.Tutkak4

ANTİKOR TİTRESİ ve AVİDİTEKLİNİK ÖNEM EŞİK DEĞERİ31.05.2011 Dr.H.Tutkak5

ANTİKOR TİTRESİ ve AVİDİTEKLİNİK ÖNEM EŞİK DEĞERİ31.05.2011 Dr.H.Tutkak6

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 7

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 8

¤ İndirektimmünfloresanstest¤ Primat (fare, sıçan, maymun) karaciğer, böbrek,mide dokuları) substrat¤ Hep-2 cell(epitelyalkültür hücreleri, insanlarenkskarsinomahücreleri, Amerikan dokukolleksiyonuCCL-23)¤ Hep 20-10 cell¤ Hep 2000 cell¤ Hücre fiksasyonu? (etanol, aseton)31.05.2011 Dr.H.Tutkak 9

615 protein29 protein23 protein271 protein136 protein31.05.2011 Dr.H.Tutkak10

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 11

Image contributed by F. Britz, C. Lohr, J. Schmidt and J.W. Deitmer, Universityof Kaiserslautern, Germany.31.05.2011 Dr.H.Tutkak 12

OtoimmünHastalıkOtoantikorunoluştuğu yapıSonuçlarıHÜCRE YÜZEYİNE BAĞLANMA ve LİZİSOtoimmünhemolitikanemi,SLEEritrositEritrositlerin lizisive yıkımı, anemiTrombositopenikpurpura Trombosit Trombositlerinlizisive yıkımı,morartı ve kanamaHÜCRE YÜZEY RESEPTÖRLERİYLE ETKİLEŞİMMiyasteniaGravis Asetilkolin reseptörü Kolinerjikreseptörün blokeedilmesi, kas zayıflığıPemphigusvulgaris Desmoglein3 Epidermishücreleri arasındakibağlantının ayrışması, deride sudolu kabarcık, kızarıklıkGraveshastalığı TSH Tiroidhormon sekresyonununstimülasyonu, hipertiroidizmPernisiyözanemi İntrinsikfaktör B12 vitamin absorbsiyonununblokeedilmesi, anemi31.05.2011 Dr.H.Tutkak13

OtoimmünHastalıkOtoantikorunoluştuğu yapıSonuçlarıİMMÜN KOMPLEKS ARACILIKLIMiksesansiyelkryoglobulinemiIgGkompleksleriHASARDolaşan immün komplekslerin damar veglomerüllerde depolanması, sistemikvaskülit, glomerülonefritRomatoidartritRomatoidfaktörIgGkompleksleriİmmün komplekslerin eklemlerdepresipitasyonu, artritOTOANTİKORLARIN PLASENTAYA GEÇMESİNeonatallupus SSA (60, 52), SSB Konjenitalkardiakblok ve/veyafotosensitifkızarıklıkMiyasteniaGravisAsetilkolinreseptörüKolinerjikreseptörün blokeedilmesi, kas zayıflığıPemphigusvulgaris Desmoglein3 Epidermishücreleri arasındakibağlantının ayrışması, deride sudolu kabarcık, kızarıklıkGraveshastalığı TSH Tiroidhormon sekresyonununstimülasyonu, hipertiroidizm31.05.2011 Dr.H.Tutkak14

TANI100Hasta pozitif test500-5 05YILLAR31.05.2011 Dr.H.TutkakANAAnti-Ro(SSA)Anti-La (SSB)APLdsDNASmAnti-RNP15

SLE ilk bulguları100Hasta pozitif test50ANAAnti-Ro(SSA)Anti-La (SSB)APLdsDNASmAnti-RNP0-5 0 5YILLAR16Dr.H.Tutkak31.05.2011

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 17

Hastalık ANA pozitiflik oranı %TANI İÇİN ANA TESTİNİN ÇOK YARARLI OLDUĞU HASTALIKLARSLE 95-100Sistemik sikleroz (sikleroderma) 60-80TANI İÇİN ANA TESTİNİN BAZEN YARARLI OLDUĞU DURUMLARSjögren sendromu 40-70Dermotomiyozit/Polimiyozit 30-80HASTALIĞIN TAKİBİ VE PROGNOZUNDA ANA TESTİNİN YARARLIOLDUĞU DURUMLARÜveyitle birlikte olan juvenil kronik oligoartiküler artrit 20-50Raynaud fenomeni 20-60POZİTİF ANA TEST SONUCUNUN TANI KRİTERLERİNDEN BİRİ OLDUĞUDURUMLARİlaça bağlı SLE ~100Otoimmün karaciğer hastalığı ~100Yumuşak bağ dokusu hastalığı ~1001831.05.2011 Dr.H.Tutkak 18

HastalıkANA pozitiflikoranı oranı %TANI İÇİN ANA TESTİNİN YARARLI OLMADIĞI HASTALIKLARRomatoid Artrit 30-50Mültiple sikleroz 25İdyopatik trombositopenik purpura 10-30Tiroid hastalıkları 30-50Diskoid lupus 5-25İnfeksiyon hastalıklarıMalignitelerDeğişkenDeğişkenSilikon meme implantlı hastalar 15-25Fibromiyalji 15-25Sağlıklı insanlarANA titresi ≥ 1:40 20-30≥ 1:80 10-12≥ 1:160 5≥ 1:320 331.05.2011 Dr.H.Tutkak 19

ANA (IFA)BOYANMAHomojen /DiffüzPeriferal/rimBenekliNükleolarSentromerHASTALIKSLE, ilaçabağlı lupus, sistemiksikleroz, neonatal lupus sendromuSLE, anti fosfolipidsendromu,otoimmünhepatitSLE, sistemik sikleroz, Sjögrensendromu, MCTD, neonatal lupusDiffüzkutenöz sistemik sikleroz,SLE, Polimiyozit, Raynoud fen.Raynoud fen. , Lim. kutenözsistemik siklerozPCNA SLE PCNASitoplazmikPM, DM, SLE, Sjögren, Primerbiliyersiroz, Sistemik siklerozHEDEF ORGANEL VEYAANTİJENdsDNA, kromatin, histon,Nükleer zar (Laminler)Sm, RNP, SSA, SSB, PCNA,RNA polimerazII, III, U1 RNP,Topo1, Ku, Mi-2PM/Scl(75-100), Fibrillarin(U3RNP), RNA polimeraz, NOR 90CENP-A, B, COrganeller; ribozom, mitokondri,lisosom, golgi, GW cisimleri, Jo-1, tRNAsentetaz, PL-7, PL-12,Rib. P proteinleri, Po, P1, P2,SRP31.05.2011 Dr.H.Tutkak 20

Colglazier, CL et al. Southern MedicalJournal.2005AntigenConditionSensitivitySpecificity+ LR -LRAnti-dsDNAAbSLE 57% 97% 16.3 0.49Anti-Sm Ab SLE 25-30% high * *Anti-Ro/SSAAbAnti-La/SSBAbSjogren’s,SCLESjogren’s,SCLE8-70% 87% * *16-40% 94% * *Scl-70 Scleroderma 20% 100% >25 0.8Anticentromer CREST 65% 99.9% 650 0.4Anti-U-3 RNP Scleroderma 12% 96% 3 0.9231.05.2011 Dr.H.Tutkak21

dsDNA RNP SM SS-A SS-B CENTROMERESLE 60% 30% 30% 30% 15% RareRA (-) (-) (-) Rare Rare (-)MCTD (-) >95% (-) Rare Rare RareScleroderma (-) Low titer (-) Rare Rare 10-15%CREST (-) (-) (-) (-) (-) 60-90%Sjogren’s (-) Rare (-) 70% 60% (-)Hobbs, K. in West, S Rheumatology Secrets. 2002.31.05.2011 Dr.H.Tutkak22

¤ SLE veya diğer bağ dokusu hastalıklarınıdışlamaz !¤ SSA/Ro, Jo-1 veya Scl-70, Hep-2 hücresubstratındanegatif olabilir !¤ Pozitif sitoplazmikpatternlerdensıklıkla“ANA NEGATİF” olarak bahsedilir !31.05.2011 Dr.H.Tutkak 23

¤ Homojen¤ Benekli¤ Nükleolar¤ Sentromer31.05.2011 Dr.H.Tutkak 24

NÜKLEUSHomojenPeriferalHomojenBenekMetafazkromatiniPOZİTİFMetafazkromatiniPOZİTİFMetafazkromatiniNEGATİFMetafazkromatiniNEGATİFMetafazkromatiniPOZİTİFdsDNA, ssDNA,Histon,NükleozomdsDNA, ssDNA,Histon,NükleozomNükleer membranproteini (laminler)laminler(A,B1,B2,C),gp210nRNP, Sm, SS-A,SS-B, Ku,Cyclin I,IIDFS-70LEDGF31.05.2011 Dr.H.Tutkak25

RC nükleusukuvvetliboyanmışDC kromatinikuvvetli pozitifHep-2, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 26

Hep-2KaraciğerBöbrekMide31.05.2011 Dr.H.Tutkak 27

Rim, Peripheral(Lineer)+HomojenDC kromatini kuvvetli pozitifRC nükleusundaperiferdeartan yoğunlukta boyanmaHep-2, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 28

1 ANAHOMOJENLİNEER2 ds-DNA(Crithidialuciliae)POZİTİF131.05.2011 Dr.H.Tutkak 292

Homojen zemindebenekli boyanmaBölünen hücrekromatininde yoğunhomojen boyanmaHep-2, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 30

Mikspatternleridahakolaytanımlayabilmekiçin;1. Örneğin ileri dilüsyonlardatekrar çalışılması2. Daha ileri büyütme ileinceleme (örn. 100x)3. Diğer yöntemlerHep-2, 40x ObjektifHep-2, 100x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 31

DC kromatini NEGATİFRC nükleusu uniformboyanmışve homojene benzeyen birgörüntüHep-2, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 32

HomojenDC kromatini POZİTİFNükleer MembranDC kromatini NEGATİF31.05.2011 Dr.H.Tutkak 33

7855 ANA (IFA testi) (4 ay, %87,5 K,%12,5 E)ANA pozitif (%15,7)Dense finespeckled(DFS-70, 75 kDa),LEDGF (lens epitelyumgrowthfaktör)Benek (%33,2), Homojen (%21,3),Nükleolar (%10,5), DFS-70(%5,8), Sentromer (%3,8),Stoplazmik (%2,6) Nükleer lamin(%1,8) …..31.05.2011 Dr.H.Tutkak35

Kromatinlerbelirgin beneklitarzda boyanır31.05.2011 Dr.H.Tutkak 36

TÜRKIYE CUMHURIYETİANKARA ÜNİVERSİTESİSAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜSİSTEMİK OTOİMMÜNHASTALIKLARDA VESAĞLIKLI BİREYLERDEDFS-70 OTOANTİKORUToplam 536 kontrol(264 K, 272 E)DUYGU KAYASÜDanışmanProf.Dr.Hüseyin TUTKAK2010-ANKARADFS-70 pozitifliği %1.9(kadın %2.3,erkek%1.8)31.05.2011 Dr.H.Tutkak 37

NÜKLEUSBenekBüyük benek(nükleer matriks)Kaba benekİnce benekYoğun incebenekli DFS-70Çok biçimlibenekli(PCNA)MetafazkromatiniNEGATİFMetafazkromatiniNEGATİFMetafazkromatiniNEGATİFMetafazkromatiniPOZİTİFMetafazkromatiniNEGATİFhnRNP-A1,A2,B2hnRNP-C1,C2 ve ISm, U1snRNPSSA (Ro), SSB (La),RNA polimerazII ve III,Ku, Ki ve Mi-2LEDGFProliferating CellNuclearAntigenMitoza hazırlananhücrelerde (1/3)%30-6031.05.2011 Dr.H.Tutkak38

Çoğu benekli boyanmada DCkromatini boyanmaz.Ancak az sayıda örnekte RC debenekli boyanma ile birlikteDC kromatin bölgeleri zayıfboyanabilir.DC kromatini RC nükleusunabenzer şekilde boyanmış amastoplazmadankesin hatlarlaayrılmamışHep-2, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 39

Benekli patterndebirçok farklı antikornükleusun değişikbüyüklükte benekliboyanmasına nedenolur.Hep-2, 40x ObjektifBenekli boyama kaba,ince ve görülemeyecekkadar çok ince olabilir.31.05.2011 Dr.H.Tutkak 40

Otoantikor : DNA polimeraz delta oksileri proteinPCNA hücre siklus bağımlıdır.Antikor sadece mitozahazırlanan hücrelerde(hücrelerin yaklaşık 1/3 -1/2)görülür. Diğer hücreler negatifdir.Pozitif RC de boyanmalarkabadan ince benekliyedeğişken.DC kromatini NEGATİF31.05.2011 Dr.H.Tutkak 43

NÜKLEUSNoktalıMetafazkromatiniPOZİTİFMetafazkromatiniNEGATİFSentromer(40-60)CENP-B,A,C,D)Nükleer noktalıort. 10 nokta, en fazla 20Sp100 , promyelocyticleukemiaproteini (PML) ve NDP53Az nükleer noktalı(2-3) ortalama 6p80 -coilin31.05.2011 Dr.H.Tutkak44

CENP- B,A,C,D31.05.2011 Dr.H.Tutkak 45

Marvin J. Fritzler et all.Faculty of Medicine, University of Calgary, Calgary, Alberta, CanadaAutoimmunity Reviews, Accepted 29 September 2010

NN ? / Sentromer ?4-15 nokta (MND)Bölünen hücrekromatini negatif !Bu örnekte zayıfince granüler(finespeckled)boyanma da varHep-2, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 48

Sp100 ,promyelocyticleukemiaproteini (PML)ve NDP5331.05.2011 Dr.H.Tutkak 49

1-4 noktaBu örnekte zayıf incebenekli (fine speckled)boyanma da varBölünen hücrekromatini negatifHep-2, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 50

p80 -coilin31.05.2011 Dr.H.Tutkak 51

NÜKLEUSNükleolarMetafaz kromatini negatif, pozitif veya azsayıda benekli boyanmaNükleolarhomojenPM-Scl, Th/ToNükleolarbenekliRNA polimeraz I (RNAP I)NükleolarkümeKüçük nükleolarribonükleoproteinin34 kDa lukprotein alt ünitesi (snoRNP)31.05.2011 Dr.H.Tutkak

Benekli tarzdanükleolar boyanmax100 objektifte dahakolay görülebilirDC kromatinbölgesinde kısmendaha zayıf boyanmış veaz sayıda daha parlakbenek farkedilebiliyorHep-2, x100 objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 53

Nükleolarboyanmaşekli HOMOJENZayıf ince granülerboyanma da varDC kromatiniNEGATİF31.05.2011 Dr.H.Tutkak 54

Az sayıda daha küçüknoktalarda boyanabilirDC kromatini pozitif olabilirRC de sıklıkla büyüklüğü veşekli değişken bu nükleolarboyanma CLUMPY (küme)olarak bilinirHep-2, x40 objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 55

RC de benekli nükleolarboyanmaRC nükleusu aynı zamandaİNCE BENEKLİ boyanmışDC kromatini zayıf pozitifHep-2, x40 objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 56

DAPIFITCAlexa31.05.2011 Dr.H.Tutkak 57

¤ İnterfaznükleus; ince benekli (zayıf vedeğişken)¤ Nükleolus¤ Stoplazma; perinükleeralandan sitoplazmamembranınadoğru zayıf boyanma¤ Mitotikhücrelerdeki kromozomlar; yoğunboyanma gösterirler, metafazkromozomları;yoğun boyanma¤ Kromozomlarda NOR (Nucleolar OrganizingRegion) domenlerindefarkedilebilir benek31.05.2011 Dr.H.Tutkak 58

NÜKLEUSSentriolMidbodySpindle(İğcik şekillifibril)NuMA-1CENP-F /p330dHeatshockprotein glycolyticspesifik enolas (48kDa, ggisoform),PCM-1 (228 kDa),Pericentrin (220kDa)MSA-2antikorlarıNuclear MitoticApparatus,MSA-1 [MitoticSpindleApparatus]antikorlarıcentrophilin,240 kDaİstirahat halindekihücrelerde değişikyoğunlukta incebenekli, metafazdakromatinler benekli,telefazdakromatinlerboyanmaz31.05.2011 Dr.H.Tutkak59

RC nükleusu ince benekliSpindle poles boyanmışHücre bölünmesinden sonraoluşan kardeş hücrelerin nükleusperiferinde boyanmaHep-2, 40x ObjektifDC kromatini NEGATİF31.05.2011 Dr.H.Tutkak 60

DC telefazda zayıfmidbody boyanmış,yoğun stoplazmikboyanma, kromatinNEGATİFDC metafazdakromatinlerbenekli boyanmışRC ince benekli değişikyoğunluklarda boyanmışBu patternhücresiklusuna bağlı olupsadece bazı hücrelerdegörülür.31.05.2011 Dr.H.Tutkak 61

Sentriol + ince benekliboyanmaİnterfazdakihücrelerde,stoplazmada1-2 nokta boyanırZayıf ince benekli boyanmaHep-2, 40x ObjektifBölünen hücrede sentriolboyanması (Spindle poles noktaşeklinde)31.05.2011 Dr.H.Tutkak 62

SİTOPLAZMAince benek büyük benek kaba benek,ipliksi (AMA)Aminoaçilt Lisosom,RNA senetazlar endosomJo-1, PL7, PL12 organeller AMA-M2homojenRibozomalPfosfoproteinleri,Po,P1, P2golgigolgin-67,golgin-95(GM130), golgin97, golgin-160,golgin-245(p230)ve macrogolgin/giantinsitosikeletonAKTİNVINCULIN31.05.2011 Dr.H.Tutkak

Mitokondriye karşı antikorlarHep-2 hücre stoplazmasındaboyanmaya neden olurBölünen hücre kromatiniNEGATİF ancak yoğunstoplazmikboyanma gözlenir31.05.2011 Dr.H.Tutkak 64

Stoplazmadabirçok farklıtürde cytoskeletalfibersvardır. Bunlar 3 gruphalinde sınıflandırılabilir;mikrotübüller,intermediatefilamentlerve mikrofilamentler.Mikrotübüllerekarşıantikorlar (resim 1)İntermediatefilamentlerekarşı antikorlar (resim 2)Mikrofilamentlerekarşıantikorlar (resim 3 ve 4)31.05.2011 Dr.H.Tutkak 65

golgin-67,golgin-95(GM130),golgin97,golgin-160,golgin-245(p230) vemacrogolgin/giantin31.05.2011 Dr.H.Tutkak 66

Stoplazmadadüzensiz dağılmış vedeğişen büyüklükte benekliboyanmalar. Bu şekilde boyanmalisosoma karşı veya diğer stoplazmikveziküllere karşı antikorlarbulunduğunda gözlenir.Hep-2, 40x ObjektifVeziküller membranetrafındakiküçük stoplazmikorganellerdir.Lisosomlar, endosomlarveperoksisomlargibi birçok farklı tipteveziküller vardır.31.05.2011 Dr.H.Tutkak 67

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 68

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 69

Golgi KompleksiGolgin-67, -97, 95/gm130, golgin-160, 245, giantinEndosomesEarly endosome antijen 1 (EEA1), sitoplazmik linker protein(CLIP170),Lisobifosfatidik asit (LBPA), GRASP-1GW cisimleriGW proteinleri (GW182, GW2, GW3), hAgo2, Ge-1/Hedis, RAP55/LSm15,LSm4SentrosomPericentrin, PCM-1, ninein, mob-1ProteasomeA-3HC-9, Ki-p28gAsemblyosome-SMN kompleksiSm, RNA helicase (Gu), fibrillarin, p80 coilinİntrasellüler exosomePM/Scl-75, -100, hCs14, hRrp4, 40,41,42Ekstrasellüler exosomes31.05.2011 Dr.H.Tutkak 70

Farklı nadir stoplazmik antikorlarNükleus DAPI ile maviye boyanmışA. Endosom/lysosome antijenlerinekarşı antikorlarB. GW182 ve GW ye karşı antikorlar(glisin, triptofan)(Sjögren, Nörolojik hast. SLE)C. CLIP-170 e (endosom antijeni)karşı antikorlar (SLE)D. Early endosom antijen 1’e karşıantikorlar(Nörolojik hastalıklar)E. Golgin 160’a karşı antikorlar(Sjögren, SLE)F. Centrosomdaki pericentrine karşıantikorlar31.05.2011 Dr.H.Tutkak 71

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 72

p ANCAc ANCAEtanol fikse nötrofilEtanol fikse nötrofilMaymun karaciğer doku kesitiMaymun karaciğer doku kesiti31.05.2011 Dr.H.Tutkak 73

MitokondrialantikorlarMide parietelhücreleriMide dokusu(mouse)Renaltübül hücreleriBöbrek (mouse)MSK, 40x Objektif31.05.2011 Dr.H.Tutkak 74

BöbrekHep-2 Karaciğer MideHep-231.05.2011 Dr.H.Tutkak 75

ASMA AMA LKMSıçan mide k. Sıçan böbrek k. Sıçan böbrek kRETİKÜLİN APCA EMASıçan mide k.Maymun mide k.Maymun karaciğer k.31.05.2011 Dr.H.Tutkak 76

Anti skin ab Adacık hücre ab GBMMaymun özfagus k.Maymun pankreas k. Maymun böbrek k.31.05.2011 Dr.H.Tutkak 77

31.05.2011 Dr.H.Tutkak 78

ANKARA ÜNİVERSİTESİ TIPFAKÜLTESİ16 mart2011İbn-i Sina Hastanesi Merkez Laboratuvarları

16 mart2011ANKARA ÜNİVERSİTESİ TIPFAKÜLTESİ

ANKARA ÜNİVERSİTESİ TIP FAKÜLTESİİBN-İ SİNA HASTANESݤ Semahat AkbayTEŞEKKÜR¤ Dilek Aslan¤ Mustafa Özdemir¤ Füsun Alpan¤ Berat ŞahinbaşİmmünolojiLaboratuvarı31.05.2011Dr.H.Tutkak81